人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因共转染的MSCs抗肿瘤免疫的体内研究

目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物(herpes virus entry mediator,HVEM)的淋巴毒素类似物(homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因共转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内的抗肿瘤免疫功能。方法将pIRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs/LT组),以转染空载体和转染HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。体内迁移实验观察MSCs/LT在小鼠体内迁移情况。观察更昔洛韦注射前后MSCs/LT对荷瘤小鼠体内肿瘤的治疗作用。ELISA法检测小鼠肿瘤组织中IFN-γ,IL-2和IL-10的水平。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子。MSCs/LT有特异地向肿瘤组织趋化的特性。MSCs/LT和MSCs/T有较好的抑制肿瘤生长的能力,但在更昔洛韦诱导后,MSCs/LT的抗肿瘤效应下降甚至消失。同时,MSCs/LT可促使T细胞进入肿瘤组织,并促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ,抑制IL-10分泌(P<0.05)。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞能稳定高表达LIGHT分子,能特异性地向荷瘤小鼠体内肿瘤组织趋化并抑制肿瘤的生长,这种体内抗肿瘤功能可能与促进T淋巴细胞IL-2、IFN-γ等细胞因子的分泌,改善局部免疫抑制环境有关。

HSV-tk/ACV系统基因治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

本文首次应用HSV-tk/ACV系统对小鼠黑色素瘤B16进行了基因治疗研究。体外实验证实,转有HSV-tk基因的B16细胞(B16LNTK)对阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)的敏感性显著高于其亲本细胞B16,当B16LNTK与B16以不同比例混合培养时,亲本细胞B16对ACV的敏感性不同程度增高,存在旁观者效应。用B16LNTK接种同系C57BL/6小鼠,经ACV治疗20天后,B16LNTK组小鼠的肿瘤(0.254±0.18cm^3)较对照组B16组的肿瘤(4.43±1.08cm^3)小94％(n=5,双侧t检验P<0.01)。HSV-tk/ACV系统原位基因转移治疗B16荷瘤小鼠效果显著:HSV-tk/ACV治疗组肿瘤14天后较对照组肿瘤小43％(n=5,双侧t检验P<0.05)。结果提示HSV-tk/ACV系统可作为黑色素瘤基因治疗研究的一种有效方法。

阳离子脂质体介导HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响

目的 探讨HSV TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响。方法 用阳离子脂质体Lipofectamine将 pCR3 Uni及含HSV TK基因的真核表达载体 pCR3 TK转染至人脑胶质瘤细胞株TJ90 5中 ,筛选出阳性克隆 ,阳性细胞克隆给予ACV(5 0mg/ml) ,72小时后 ,收集玻片 ,进行AgNOR染色。 结果 转染HSV TK基因的细胞 ,在给予ACV后 ,细胞增殖活性明显降低 ,转染 pCR3 Uni和 pCR3 \|TK细胞克隆的AgNOR颗粒数分别为 1 4.3 3和 6.67(P <0 .0 1 )。结论 AgNOR计数是一种操作简便、检测细胞增殖活性的方法 ,为研究HSV

阳离子脂质体介导HSV-TK/ACV基因系统抑制人肺癌生长的实验研究

目的:探讨阳离子脂质体介导的HSV-TK/ACV基因系统治疗人肺癌的实验研究的意义。方法:利用已构建的真核表达质粒pCR3-TK,用阳离子脂质体LipofectAMINE为载体,将pCR3-TK转染Anip973细胞株,然后给予不同浓度的Aciclovir(ACV)。结果:经MTT检测证实转染了TK基因的肺癌细胞对ACV的杀伤敏感性明显提高,FCM检测可以看到凋亡峰的出现,且相应的S期细胞比率增高。结论:HSV-TK/ACV系统对人类肺癌细胞株Anip973具有良好的抑制作用;阳离子脂质体LipofectAMINE对人类肺癌细胞株Anip973安全、低毒,有可能成为基因治疗应用到临床试验的有价值的载体。

反转录病毒介导的 HSV-tk/ACV 系统基因治疗的安全性研究

研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。首先采用ＰＣＲ、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以及补救分析方法，对ＨＳＶ－ｔｋ病毒包装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ）、Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液进行了检测。结果表明，所采用的反转录病毒基因转移系统没有产生野生型病毒，是安全的；另一方面，采用细胞接种、Ｘ－ｇａｌ染色、ｔｋ基因的ＰＣＲ和病理切片观察方法，对ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统本身的安全性进行了探讨，结果表明ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统用于动物基因治疗，ＡＣＶ及其代谢产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统是安全的。

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究──Ⅱ.HSV-tk/ACV系统的安全性研究

采用细胞接种、X－gal染色、TK基因的PCR和病理切片观察，分别将PA317／BAG．PA317／TK产病毒细胞注射到动物体内，结果产病毒细胞在动物体内存活期均不超过1个月；产病毒细胞在体内没有形成肿瘤，也没有发现严重的炎症反应；HSV－tk／ACV系统用于动物基因治疗，ACV及其代谢产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。说明反转录病毒介导的HSV－tk／ACV系统在动物体内取得了安全的结果。

HSV-tk基因和IL-12基因抑制VEGF的表达及对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用的实验研究

目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组、空白对照组、每组6只。采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液(AdKDR-tk)、重组逆转录腺病毒液IL-12及生理盐水,24 h后重复注射1次。次日起HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组连续10 d每天腹腔内注射GCV 100 mg/(kg·d),连续10 d。各放射治疗组第3周开始给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。治疗结束后处死裸鼠,检测裸鼠肿瘤质量及肿瘤生长抑制率,免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度及VEGF阳性细胞灰度值。结果:IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组裸鼠瘤体质量明显低于IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组的肿瘤生长抑制率最高,达71.7%。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组微血管密度均低于其他各组,VEGF阳性细胞灰度值均高于其他各组(P<0.05)。结论:HSV-tk基因和IL-12基因联合应用在鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放疗中可抑制移植瘤的生长,为鼻咽癌的放疗产生增敏作用。

HSV-TK/ACV治疗小鼠肺腺癌LA795及其与机体免疫系统的关系

目的 :探讨HSV -TK/ACV(GCV)系统对小鼠肺腺癌细胞LA795治疗作用及其与机体免疫系统的关系。方法 :用重组逆转录病毒载体上清感染体外培养的小鼠肺腺癌细胞LA795 ,然后用新霉素类似物G41 8进行筛选 ,得到转染HSV -TK基因的LAtk细胞 ,分别将LA795细胞和LAtk细胞接种于小鼠皮下 ,观察ACV治疗后肿瘤生长情况、抗免疫功能以及对动物生存期的影响。结果 :体外转染HSV -TK基因的LAtk细胞获得了对ACV的敏感性 ,接种LAtk细胞的治疗组动物在ACV治疗后出现了肿瘤体积缩小 ,而对照组接种LA795细胞的动物在ACV治疗后肿瘤体积逐渐增大 ,两者具有显著差异 (P<0 .0 1 )。治疗组动物生存期为 5 1 .8d ,对照组动物生存期平均为 1 5 .9d ,两者具有显著差异 (P <0 .0 1 )。光镜下观察治疗组肿瘤组织及血管周围有大量的淋巴细胞浸润 ,计数 75个高倍视野中的淋巴细胞为 1 1 6.0 3± 5 2 .95 ,而对照组为 1 0 .41± 5 .5 2 ,二者具有显著差异 (P <0 .0 1 )。超微结构观察显示淋巴细胞群攻击癌细胞现象 ,癌细胞出现凋亡征象。结论 :①HSV -TK/ACV系统可以显著杀伤小鼠肺腺癌细胞LA795 ,使肿瘤消退 ,动物生存期延长 ,提示该系统有良好的治疗效果和应用前景。②HSV -TK/ACV系统治疗肿瘤除了其直接杀伤作用外 ,尚有机体免疫系统的?

CD-TK和HSV-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞的杀伤作用

背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用价值。方法:应用逆转录病毒载体将HSV-TK基因和CD-TK融合基因分别转染PC-3m细胞,经RT-PCR鉴定后,MTT法检测丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)、5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)前体药物单一或联合应用对转染后PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染的PC-3m细胞作对照。结果:GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度为8.34μg/ml,但旁观者效应不明显;5-Fc则有显著旁观者效应,当混育细胞中转染细胞比例是5%时即可出现;联合用药具有协同作用,两药相互作用指数小于1.0。结论:CD-TK自杀基因体系对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用,明显优于单用HSV-TK基因体系,深入研究意义较大。

HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究

目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。

细胞缝隙连接与HSV-TK/GCV系统旁观者效应的关系

在用单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统治疗肿瘤的研究中,一个有趣和重要的现象就是旁观者效应(bystander effect,BE)。它在很大程度上提高了HSV-TK/GCV系统治疗肿瘤的疗效。但到目前为止,BE的确切机制尚未阐明。大量研究表明,靶细胞连接蛋白(connexin,Cx)的表达及其形成的细胞间缝隙连接(gapjunction,GJ)与这一现象关系密切。该文对GJ与HSV-TK/GCV系统BE的关系作一综述,并探讨了由HSV-TK/GCV系统生成可经GJ传递的"死亡信号"的性质。

乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应

目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。

脂质体/DNA复合物介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和生物活性

目的：探讨脂质体／ＨＳＶ—ＴＫ重组 ＤＮＡ对膀胱癌细胞的转导和在细胞内的活性表达。方法：用脂质体／ＤＮＡ复合物将 ＨＳＶ－ＴＫ基因逆转录病毒重组子（ｐＬＸＳＮ－ＴＫ）导入膀胱癌细胞株 ＢＩＵ８７。携带 ＨＳＶ一ＴＫ基因的 ＢＩＵ８７细胞（ＢＩＵ８７—ＴＫ）由 Ｇ４１８筛选获得。经过 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和细胞原位杂交检测后，观测 ＡＣＶ对 ＢＩＵ８７－ＴＫ细胞存活的影响。结果： Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实 ＨＳＶ—ＴＫ基因存在于 ＢＩＵ８７－ＴＫ细胞染色体中。细胞原位杂交检测 ＨＳＶ－ＴＫｍＲＮＡ的表达。外源ＤＮＡ的导入以及ＨＳＶ－ＴＫ和Ｎｅｏ基因表达不会改变细胞生长特性。然而，在ＡＣＶ作用下，转导ＨＳＶ－ＴＫ基因的膀胱癌细胞的存活率受到影响，ＡＣＶ可显著抑制癌细胞生长。结论：脂质体／ＴＫ重组 ＤＮＡ复合物可用于膀胱癌细胞的转基因治疗。

大鼠肝癌细胞HSV-tk/GCV自杀基因系统的构建及其旁观者效应

目的:构建针对大鼠肝癌细胞的HSV-tk/GCV(以下简称tk/GCV系统)自杀基因治疗系统,建立比较tk/GCV系统作用效果及其旁观者效应大小的细胞模型和检测方法.方法:用包装细胞PT67/tk分泌的重组逆转录病毒的活性颗粒感染大鼠肝癌CBRH7919细胞,用G418筛选3wk获得高耐药性的重组子CBRH7919/tk,扩大培养.提取CBRH7919(tk-),CBRH7919/tk(tk+)细胞的DNA,把HSV-tk基因片段用Dig标记为探针后,与2种DNA及阳性对照DNA进行点杂交,以检测tk+细胞的DNA是否整合有HSV-tk基因.用0.1、1、10、50、100mg/L的GCV体外作用于tk-、tk+细胞,MTT检测存活率.用GCV体外分别作用于含不同比例tk+细胞的tk+、tk-混合细胞,MTT检测存活率,比较分析各组旁观者效应大小,确定后续实验的合适tk+比例.结果:用G418筛选3wk后获到高耐药性的CBRH7919/tk(tk+)重组细胞.HSV-tk基因片段用Dig标记为探针后进行点杂交,检测到tk+细胞DNA上已整合有HSV-tk基因,而tk-细胞DNA不含HSV-tk基因.GCV对tk+细胞生长抑制和细胞毒作用明显,而且有浓度、时间依赖性,而tk-细胞对GCV不敏感,说明HSV-tk基因已表达且表达产物具有生物学活性.GCV对含5%和10%tk+的混合细胞杀伤率分别为6.0%和25.2%,结果表明5-10%的tk+混合比例下自杀基因系统自身的旁观者效应较低,而且用MTT检测旁观者效应大小时灵敏度比较高,可作为后续研究中药活性成分对旁观者效应增效作用的tk+、tk-混合比例.结论:成功构建了针对大鼠肝癌的HSV1-tk/GCV自杀基因治疗系统,建立了体外快速筛选旁观者效应增效药物的稳定有效的细胞模型和检测方法.

逆转录病毒介导HSV-TK基因治疗膀胱癌及旁观者效应的观察

目的 观察HSV TK/GCV治疗膀胱癌的体内效果及旁观者效应。方法 用逆转录病毒感染鼠源性膀胱癌细胞T739,以不同比例的T739和T739TK细胞建立膀胱癌腹腔肿瘤模型 ,同时 ,在背部皮下以母代细胞T739建立皮下肿瘤 ,观察GCV治疗前后肿瘤大小变化及动物存活时间。结果 动物存活时间随基因转移效率提高而延长 ,腹腔肿瘤生长受到抑制 ,背部肿瘤在 5 0 %以上转移效率时肿瘤生长缓慢。结论 HSV TK/GCV对膀胱癌的体内杀伤效应随基因转移效率提高 ,并存在远距离旁观者效应。

HSV-tk/GCV系统对人宫颈癌细胞株ME180旁观者效应的研究

目的 研究以逆转录病毒载体介导的 HSV - tk/ GCV系统对宫颈癌 ME180细胞株的旁观者效应。方法 应用脂质体及 ploybrene转染技术 ,将重组逆转录病毒载体 PL XSN- HSV- tk,导入 PA317包装细胞 ,以其分泌的逆转录病毒感染宫颈癌 ME180细胞 (ME) ,建立 ME/ TK转化细胞株。观察 GCV对 ME、ME/ TK细胞的存活率及旁观者效应。结果 从病毒滴度、电镜及 PCR检查 ,证实 tk基因随病毒的感染已成功地导入 PA 317及 ME180细胞。 ME/ TK细胞对 GCV的敏感性显著高于亲代 ME细胞。 ME/ TK及 ME+ME/ TK混合细胞还随 GCV浓度的增加受到明显的抑制。 ME+ME/ TK混合细胞的存活率 ,随 ME/ TK细胞比例的增加而降低 ,说明 TK/ GCV系统不但能杀伤 tk+ 细胞 ,也能杀伤未导入 tk的细胞 ,存在明显的旁观者效应。结论 HSV- tk/

HSV-tk/GCV自杀基因系统对视网膜母细胞瘤的体外抗肿瘤效应

目的 研究单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /更昔洛韦 (herpessimplexvirusthymidinekinase /gancyclovir,HSV tk/GCV)自杀基因系统对视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)细胞的体外杀伤作用以及旁观者效应发生的机制。方法 应用脂质体将pCMV/hytk IRES hrGFP质粒导入HXO Rb44细胞株。用潮霉素筛选出阳性细胞克隆并命名为HXO Rb44/tk。RT PCR鉴定hytk基因在HXO Rb44/tk细胞中的转录结果。比较HXO Rb44和HXO Rb44/tk细胞的形态特征及生长特性。通过MTT法检测GCV对不同比例HXO Rb44/tk和HXO Rb44混合细胞的杀伤作用 (“旁观者效应”)。并通过上清移换实验研究旁观者效应发生的机制。结果 HXO Rb44/tk细胞经RT PCR可检测出 5 30bp的hytk基因片段。HXO Rb44/tk和HXO Rb44细胞的形态特征及生长特性无明显差异。HXO Rb44/tk细胞仅占很低比例时即可观察到明显的旁观者效应 ,而GCV作用的HXO Rb44/tk细胞上清对HXO Rb44细胞无杀伤作用。结论 HSV tk基因转移联合GCV治疗可作为Rb基因治疗的一种有效方法 。

hTERT启动子调控的HSV-tk基因逆转录病毒载体的构建及SKOV3转染细胞的生物学特性观察

目的 :观察转染有人端粒酶逆转录酶基因 (humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控的单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (herpessimplexvirusthymidinekinase ,HSV tk)基因的人卵巢癌细胞的部分生物学特性。方法 :构建hTERT启动子调控的HSV tk基因重组逆转录病毒载体 ,筛选携带该载体的包装细胞 ,测定包装细胞产生的逆转录病毒滴度 ,并用病毒颗粒感染人卵巢癌SKOV3细胞 (SKOV3/tk细胞 )并经RT PCR方法鉴定。然后倒置显微镜下观察SKOV3/tk细胞形态 ,MTT法研究细胞生长特性 ,并观察转染细胞裸鼠体内的成瘤能力。结果 :包装细胞产生的病毒滴度可达 2× 1 0 3 cfu·ml-1 。SKOV3/tk细胞扩增出 770bp的tk基因片段 ,形态与SKOV3细胞无明显差异 ;倍增时间 72h ,无明显变化 ;裸鼠体内的成瘤能力较SKOV3细胞下降。结论 :hTERT调控的HSV tk基因逆转录病毒载体构建成功 ;

腺病毒介导的HSV-tk体外抗喉癌作用

目的观察 HSV- tk/ GCV系统对喉癌细胞的杀伤作用。方法将带有报告基因 L ac Z的 5型缺陷性腺病毒载体Ad CMVL ac Z感染喉癌细胞 Hep- 2 ,X- gal染色 ,测定腺病毒的转染率。利用同源重组技术构建含 HSV- tk基因的重组腺病毒载体 Ad CMVtk。Ad CMVtk感染 Hep- 2细胞后 ,加入 10 mg/ L GCV,观察瘤细胞存活率及旁观者效应。结果随着腺病毒感染复数量 (multiplicity of infection,MOI)增加 ,对 Hep- 2细胞转染率亦增加 ,10 0 %转染所需的 MOI为 2 0 0。 Ad CMVtk/ GCV对Hep- 2细胞的杀伤强度与 Ad CMVtk量呈正向关系 ,即有浓度依赖性。此杀伤作用存在旁观者效应 ,但较弱。结论腺病毒介导的 HSV- tk/ GCV具有杀伤喉癌细胞作用。

EB病毒LMP1通过NF-kB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)通过活化NF-kB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基困HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用,为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据。方法:以鼻咽癌细胞为实验模型,将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下,构建LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk/GCV系统,采用同位素方法检测tk活性来研究LMP1通过NF-kB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征,MTT方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况。结果:成功构建受LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk表达质粒,发现其在GCV处理下,表达LMP1的肿瘤细胞的生长有显著的抑制。结论;携带有LMP1-HSV-tk的细胞对GCV治疗高度敏感,显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景。