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特异性干扰ICP27基因的siRNA对HSV-1病毒复制的影响 被引量:1
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作者 王晓婷 董慧 +2 位作者 王军 全金梅 张伟 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第2期130-135,共6页
针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后... 针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后通过病毒滴度测定、real-time PCR和细胞致病变效应(cytopathic effect,CPE)检测所设计的siRNA抑制病毒复制的能力。结果显示,所设计的shRNA-2(靶序列起始位置815)和shRNA-3(靶序列起始位置1 367)具有明显地抑制病毒复制的效果。尤其是shRNA-3,抑制病毒复制的效果更明显,在病毒滴度实验中,与阴性对照相比,其抑制倍数为81,同时可以下调ICP27基因的mR NA表达水平。实验结果表明shRNA-3能够显著抑制HSV-1病毒复制的能力,可以作为HSV-1感染性疾病的补充治疗手段,其对应的靶序列可以作为抗HSV-1新的靶标。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) 小干扰RNA(siRNA) RNA干扰(RNAI) ICP27基因
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靶向ICP4的小干扰RNA对HSV-1病毒复制能力的影响 被引量:2
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作者 刘玉涛 宋波 +4 位作者 王亚仑 许予明 韩志强 赵莘瑜 贾丽洁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期163-169,共7页
HSV-1是一种嗜神经病毒,能引起一系列神经系统严重症状,然而目前抗HSV-1药物易反弹、不能完全清除潜伏的病毒。ICP4对HSV复制、转录起主要调节作用,决定着溶细胞型感染或潜伏状态的平衡点。为了探寻新的抗病毒策略,本课题以HSV-1ICP4基... HSV-1是一种嗜神经病毒,能引起一系列神经系统严重症状,然而目前抗HSV-1药物易反弹、不能完全清除潜伏的病毒。ICP4对HSV复制、转录起主要调节作用,决定着溶细胞型感染或潜伏状态的平衡点。为了探寻新的抗病毒策略,本课题以HSV-1ICP4基因为靶点,设计合成2对siRNA,并构建重组真核慢病毒表达质粒pL-KO-puror-hU6-siRNA,通过脂质体转染和嘌呤霉素筛选建立靶向ICP4的4个siRNA单克隆细胞系,Real-timePCR法检测细胞系中ICP4的mRNA表达水平,TCID50法检测siRNA对HSV-1病毒复制能力的影响。结果显示靶向siRNA能有效抑制单克隆细胞系中的ICP4表达,并且抑制ICP4的表达后HSV-1病毒复制能力明显减弱,表明靶向ICP4的siRNA对HSV-1复制有明显抑制作用,且多位点siRNA联合干扰对病毒复制有协同抑制效果,有望应用于生物抗病毒药物的制备。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) ICP4 RNA干扰 病毒
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HSV-1病毒感染细胞诱导蛋白HSRG1影响病毒基因转录的延伸 被引量:1
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作者 吴文娟 余娴 +4 位作者 李卫中 郭磊 刘龙丁 王丽春 李琦涵 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2010年第3期210-217,共8页
病毒刺激相关蛋白HSRG1是HSV-1病毒感染细胞时诱导表达的蛋白之一,本研究组曾报道其具有与转录调控蛋白相互作用的特性.为进一步分析HSRG1对病毒基因转录调控的影响,本研究在转染细胞中上调HSRG1分子的表达,发现它能够延缓HSV-1病毒的增... 病毒刺激相关蛋白HSRG1是HSV-1病毒感染细胞时诱导表达的蛋白之一,本研究组曾报道其具有与转录调控蛋白相互作用的特性.为进一步分析HSRG1对病毒基因转录调控的影响,本研究在转染细胞中上调HSRG1分子的表达,发现它能够延缓HSV-1病毒的增殖.CAT分析结果也表明HSRG1对HSV-1多种病毒启动子的转录效率具有量效抑制作用.运用酵母双杂交及免疫沉淀技术表明,HSRG1与对RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ)的转录延伸具有重要作用的复合物P-TEFb(positive transcription elongation factor b,P-TEFb)中的调节亚基细胞周期蛋白T2(Cyclin T2)存在蛋白质相互作用,且Cyclin T2氨基端420氨基酸对二者的结合具有重要作用.荧光共定位实验表明,共转染的细胞中两蛋白的细胞内定位因二者相互作用而受影响.进一步利用CAT实验证实,HSRG1能够拮抗Cyclin T2对多种病毒启动子的转录激活作用,提示HSRG1对病毒复制增殖的抑制作用很可能是通过与Cyclin T2的结合而产生的,它具有阻断Cyclin T2的调控,影响病毒基因转录的延伸. 展开更多
关键词 Ⅰ型单纯疱疹病毒(hsv-1) HSRG1 CYCLIN T2 转录调节
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1型单纯疱疹病毒抗体与阿尔茨海默病的关联研究 被引量:1
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作者 孙奕 周辰 +1 位作者 潘晓东 何一然 《徐州医科大学学报》 CAS 2017年第6期372-376,共5页
目的 探讨老年人群1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染与阿尔茨海默病(AD)的关联性。方法 共入组AD患者101例,男74例,女27例,年龄77~93岁。正常对照组107例,男81 例,女26例,年龄71~89岁。采用认知障碍简明评价量表(Cog-12)、简易... 目的 探讨老年人群1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染与阿尔茨海默病(AD)的关联性。方法 共入组AD患者101例,男74例,女27例,年龄77~93岁。正常对照组107例,男81 例,女26例,年龄71~89岁。采用认知障碍简明评价量表(Cog-12)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)等进行认知功能评分。应用ELISA 法测定HSV-1抗体、血浆Tau 蛋白。结果 两组间年龄、性别构成的差异无统计学意义。AD组HSV-1抗体阳性率为79.2%,对照组为58.0%,AD组明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。回归分析显示HSV-1抗体阳性、糖尿病、高胆固醇血症等是AD患病的危险因素。结论 HSV-1感染是AD患病可能的危险因素之一;外周血浆Tau蛋白水平与AD患病无明显关联。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 hsv-1病毒 TAU 蛋白
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单纯疱疹病毒1型VP16蛋白和VHS蛋白研究进展 被引量:2
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作者 张春龙 王一飞 张美英 《中国病毒学》 CAS CSCD 2006年第5期519-522,共4页
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) VP16蛋白 VHS蛋白
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人中性粒细胞多肽HNP_(1,3)体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用 被引量:1
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作者 刘娟 孙永涛 +3 位作者 王少扬 史孟元 庄严 翟嵩 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期366-369,共4页
体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的... 体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用。MTT法检测各药物对细胞的毒性作用。结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(EC50)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC50为0.68μg/mL。MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性。以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成。 展开更多
关键词 中性粒细胞多肽1 3(HNP1 3) 阿昔洛韦(ACV) 单纯疱疹病毒Ⅰ型(hsv-1) 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV—1)
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首批1型单纯疱疹病毒溶瘤活性测定国家候选标准品的研制
7
作者 秦玺 胡金盼 +7 位作者 李永红 史新昌 丁有学 毕华 韩春梅 郑红梅 饶春明 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期663-670,共8页
目的:研制首批1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)溶瘤活性测定国家标准品。方法:按2020年版《中华人民共和国药典》三部相关要求,分别进行HSV-1溶瘤活性测定液体标准品和冻干标准品的制备和质量检测,并使用热加速试验进行... 目的:研制首批1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)溶瘤活性测定国家标准品。方法:按2020年版《中华人民共和国药典》三部相关要求,分别进行HSV-1溶瘤活性测定液体标准品和冻干标准品的制备和质量检测,并使用热加速试验进行稳定性考察,以U-2 OS细胞/CCK-8法分别在3家实验室对标准品的溶瘤活性进行协作标定。对比研究液体标准品和冻干标准品,选择其中更为适用的1种作为国家标准品。结果:制备的2种HSV-1溶瘤活性测定标准品的质量检测结果均符合要求,其中冻干标准品水分含量为1.09%,分装精度为0.15%。稳定性试验结果用阿伦尼乌斯公式计算,初步预测液体标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需7.7年;冻干标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需6.1×10^(5)年,其稳定性得到很大提高。3个实验室协作标定进行了共21次测定,液体标准品的溶瘤活性值几何均数为7.08×10^(4)U·mL^(-1),冻干标准品的溶瘤活性值几何均数为1.82×10^(4)U·支^(-1)。HSV-1标准品原液在冻干后溶瘤活性由7.08×10^(4)U·mL^(-1)下降至3.03×10^(4)U·mL^(-1),但因其溶瘤活性在预稀释100倍后仍然出现良好的S型量效关系曲线,并不影响它作为标准品使用的要求。将液体标准品作为样品,用冻干标准品作为标准品进行校准后,3家实验室结果的几何变异系数(GCV)由64.4%下降到29.2%,实验的精密度得到较大提高。结论:该批HSV-1溶瘤活性测定冻干标准品各项指标均符合相关要求,与液体标准品相比更适合作为国家标准品使用,其溶瘤活性赋值为1.82×10^(4)U·支^(-1)。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒(hsv-1) U-2 OS细胞/CCK-8法 溶瘤活性 标准品 冻干 稳定性
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2种不同药性中药激活潜伏HSV-1引起“上火”的对比研究
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作者 尚小曼 牛杰 +7 位作者 龚海标 孙万阳 张孝仑 周正群 高昊 栗原博 李怡芳 何蓉蓉 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期5252-5260,共9页
中医理论认为“上火”属于阴阳失衡后的综合临床症状群,已有大量临床实践证明服用温热药性中药可引起“上火”,但是其生物学机制和物质基础有待进一步阐明。该研究利用课题组前期已建立的情志应激诱导潜伏Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复发... 中医理论认为“上火”属于阴阳失衡后的综合临床症状群,已有大量临床实践证明服用温热药性中药可引起“上火”,但是其生物学机制和物质基础有待进一步阐明。该研究利用课题组前期已建立的情志应激诱导潜伏Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复发的“上火”小鼠模型,以平性中药枸杞子Lycii Fructus和温热性中药人参Ginseng Radix et Rhizoma为研究对象,对比和探讨不同药性中药是否会激活HSV-1诱发“上火”,并探讨相关物质基础。结果显示,与枸杞子不同,人参给药14 d能诱导小鼠HSV-1再激活呈现“上火”症状。进一步,该研究制备了人参不同流分包括多糖富集部位(GS1)、水溶性皂苷富集部位(GS2)和非水溶性皂苷富集部位(GS3),并制备了枸杞子不同富集部位枸杞多糖富集部位(LF1)和枸杞多酚富集部位(LF2)。结果发现,与枸杞子给药结果一致,枸杞子2种富集部位LF1和LF2也不能诱发潜伏HSV-1再复发;但是,人参皂苷富集部位GS2和GS3均可引起HSV-1再激活,其中GS3组病毒激活率为100%,由此推测人参引起HSV-1复发可能与其中所含的皂苷成分有关。该研究从HSV-1潜伏再激活角度解析了药源性“上火”的科学内涵,为温热性中药的合理使用提供依据。 展开更多
关键词 “上火” 人参 枸杞子 Ⅰ型单纯疱疹病毒(hsv-1)再激活 中药药性
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四环素调控复制缺陷性疱疹病毒载体介导LacZ基因在原代培养神经元中的表达
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作者 翟登月 魏宁 +5 位作者 朱幼玲 吴波娜 姜永军 朱双根 徐格林 刘新峰 《临床和实验医学杂志》 2011年第22期1731-1734,共4页
目的利用四环素调控复制缺陷性单纯疱疹病毒I型重组载体(QR9TO-LacZ)感染体外原代培养的大鼠皮层神经元,探讨其介导半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达情况及基因调控效能;并检测该载体对神经元活力的影响。方法用RUL9-8细胞系扩增QR9TO-LacZ... 目的利用四环素调控复制缺陷性单纯疱疹病毒I型重组载体(QR9TO-LacZ)感染体外原代培养的大鼠皮层神经元,探讨其介导半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达情况及基因调控效能;并检测该载体对神经元活力的影响。方法用RUL9-8细胞系扩增QR9TO-LacZ病毒株,收集后采用噬斑法测定病毒滴度;体外原代培养大鼠皮层神经元。将培养的原代神经元分为强力霉素(DOX)组和对照组。两组细胞均用QR9TO-LacZ转染,强力霉素组加入四环素衍生物强力霉素(0.5μg/ml),对照组加入等剂量空白对照液。同时根据感染复数(MOI),即MOI=3、5、10、30 PFU/cell,将两组培养细胞进一步分为亚组。病毒转染48h后行X-gal染色;光镜下观察神经元形态,随机选取10个高倍镜视野(×400),计算每高倍镜视野中平均蓝染细胞率,比较不同MOI病毒感染神经元的效率。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测感染病毒48 h(MOI同上)后神经元的活性。结果在含有DOX的培养环境中,不同MOI亚组(3、5、10、30 PFU/cell)QR9TO-LacZ感染神经元出现蓝染细胞百分比分别为5.35%±0.84%、10.64%±1.92%、19.73%±2.87%、34.41%±2.58%;在无DOX的培养环境中,各亚组均未观察到蓝染细胞。上述MOI感染的神经元细胞存活率分别为:90.24%±8.16%、88.00%±5.69%、83.95%±3.82%、78.90%±5.49%。结论 QR9TO-LacZ载体能有效地将目的基因导入原代培养神经元中并表达;目的基因表达的开启受强力霉素调控;QR9TO-LacZ对体外原代培养神经元毒性较低。 展开更多
关键词 hsv-1病毒载体 基因调控 四环素 LACZ基因 神经元
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Ⅰ型单纯疱疹病毒单克隆抗体的制备及其应用
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作者 尹炳谦 贾继宗 +4 位作者 赵风强 韩金乐 黄承浩 叶祥忠 张景海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期798-802,共5页
目的:制备并筛选HSV-1单抗,建立定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,用于HSV-1病毒颗粒的质控。方法:以HSV-1免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以筛选的中和单克隆抗体1F6为捕捉抗体,HRP标记的2B1为检测抗体,构建定量检测HS... 目的:制备并筛选HSV-1单抗,建立定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,用于HSV-1病毒颗粒的质控。方法:以HSV-1免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以筛选的中和单克隆抗体1F6为捕捉抗体,HRP标记的2B1为检测抗体,构建定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、精密度、准确性和线性等性能进行验证。用本方法定量检测的病毒量与病毒滴度作回归分析。结果:构建的双抗体夹心定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的ELISA方法,线性范围为0.125~2μg/ml,相关系数为R2=0.995 5,定量限度为0.125μg/ml,试剂的变异系数CV〈10%,抗原回收率介于85.6%~107.1%之间。与HSV-1以外的其他样本无交叉反应。本方法检测与病毒感染滴度具有很好的相关性。结论:成功构建了定量检测HSV-1含量的ELISA方法,为HSV-1病毒颗粒抗原定量检测提供快速手段。 展开更多
关键词 hsv-1病毒 溶瘤 颗粒完整性 病毒滴度
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鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究 被引量:6
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作者 袁琦 侯林 +3 位作者 刘相文 陈亚乔 张晓平 田景振 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第7期1755-1758,共4页
目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方... 目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75%乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75%乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7。结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持。 展开更多
关键词 鸭跖草 不同提取方法 体外抗病毒 单纯疱疹病毒Ⅰ型(hsv-1) 呼吸道合胞病毒(RSV) 肠道病
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直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒和乙型肝炎病毒的实验研究 被引量:2
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作者 鞠怀强 王沙燕 +5 位作者 裴赢 向阳飞 李深 张颖君 杨崇仁 王一飞 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期242-245,共4页
目的:研究3种不同溶剂的直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:采用MTT法检测药物毒性,CPE法与空斑减数实验检测药物抗HSV-1活性;采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15细胞分泌的乙型肝炎表面抗原... 目的:研究3种不同溶剂的直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:采用MTT法检测药物毒性,CPE法与空斑减数实验检测药物抗HSV-1活性;采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15细胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)的抑制作用。结果:直杆桉叶果实的醋酸乙酯提取物(P18-E1)和甲醇提取物(P18-E2)无明显抗HSV-1的活性,水提物(P18-E3)能明显抑制HSV-1的致病变作用,其TC50为69.20 mg/mLI,C50为126.77μg/mL,治疗指数为545.87;3种不同溶剂的提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg和HBeAg均无明显抑制作用。结论:直杆桉果实的水提物(P18-E3)具有显著的抗HSV-1活性,主要是对病毒有直接灭活作用,也能影响病毒对细胞的吸附。初步推测其抗HSV-1活性的机理是影响病毒的囊膜结构从而使之失活。 展开更多
关键词 直杆桉果实 单纯疱疹病毒Ⅰ型(hsv-1) 乙型肝炎病毒(HBV) HEPG2.2.15细胞
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单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建 被引量:6
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作者 蔡晓辉 张钦宪 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第41期7701-7705,共5页
背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。目的:利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,... 背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。目的:利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,构建一株带有Loxp位点的重组HSV-1框架载体HSVLoxp。构建穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT培养基筛选出阳性毒株后用GDNF引物做PCR鉴定,扩增培养后测定滴度。结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01。成功构建HSV-1框架载体HSVLoxp及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF基因,并将其转移到了HSV-1基因组上,成功构建了表达GDNF的单纯疱疹病毒HSV-1载体,测定其滴度约为2.25×106IU/mL。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅰ型(hsv-1)载体 基因治疗 GDNF CRE重组酶 构建
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单纯疱疹病毒Ⅰ型最新研究进展——病原学、防控及应用 被引量:7
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作者 田文骏 郑成 王晓佳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2020年第5期425-430,共6页
单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus 1,HSV-1)感染可引起广泛的临床症状,包括口腔感染造成的组织损伤,以及严重的中枢神经系统感染造成的脑炎。HSV-1的研究每年都有突破性进展,其病原学、感染引致慢性炎症、抗病毒制剂,以及作为微... 单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus 1,HSV-1)感染可引起广泛的临床症状,包括口腔感染造成的组织损伤,以及严重的中枢神经系统感染造成的脑炎。HSV-1的研究每年都有突破性进展,其病原学、感染引致慢性炎症、抗病毒制剂,以及作为微生物工具用于治疗肿瘤的研究,引起了业界同行的广泛兴趣。本文对HSV-1近几年的研究进展进行综述,为进一步了解该病毒致病机理及应用价值提供参考。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅰ型(hsv-1) 炎症 病毒治疗 溶瘤病毒
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PNKP Knockdown by RNA Interference Inhibits Herpes Simplex Virus-1 Replication in Astrocytes
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作者 Lei Yue Sujie Guo +5 位作者 Xia Cao Ying Zhang Le Sun Longding Liu Min Yan Qihan Li 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2013年第6期345-351,共7页
Herpes simplex virus-1 (HSV-1) is a major pathogen that causes various central nervous system (CNS) diseases,including herpes simplex encephalitis and meningitis.According to recent studies,PNKP significantly affects ... Herpes simplex virus-1 (HSV-1) is a major pathogen that causes various central nervous system (CNS) diseases,including herpes simplex encephalitis and meningitis.According to recent studies,PNKP significantly affects the proliferation of HSV-1 in astrocytes.Here,we used viral proliferation curves to confirm the significant inhibitory effects of PNKP on HSV-1 proliferation.PNKP downregulation was also confirmed by analyzing the transcription of viral genes.We found that PNKP downregulation affects the viral DNA copy number.This study preliminarily confirms that PNKP affects viral proliferation by affecting HSV-1 genome cyclization.These results also suggest that astrocytes play a specific role in preventing HSV-1 infection. 展开更多
关键词 Herpes simplex virus I hsv-1 REPLICATION PNKP CYCLIZATION Primary culture MONKEY
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HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析 被引量:1
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作者 周洁楠 徐兴丽 +4 位作者 高有 张莹 王晶晶 刘龙丁 李琦涵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期241-246,共6页
目的:原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,... 目的:原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。间接法ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性,使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后不同时间点的UL7蛋白表达量进行检测。结果 GST-UL7重组蛋白在E. coli BL21( DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶105以上。 Western blot试验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的不同时间点均检测到了UL7蛋白的表达。结论成功获得GST-UL7融合蛋白,且制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的不同时间点均有表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) UL7 原核表达 多克隆抗体
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T细胞对单纯疱疹病毒1的潜伏和再活化的调节 被引量:1
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作者 亢泽峰 马雪英 高健生 《国际病毒学杂志》 2006年第5期133-137,共5页
单纯疱疹病毒1型(HSV-1),像所有的疱疹病毒一样,拥有多种逃逸宿主免疫系统的机制,它可以长期持续存在于宿主体内,说明在多数情况下,机体免疫系统对它是无能为力的。HSV-1感染粘膜或皮肤的上皮细胞,然后进入外周神经末梢,经过神经轴突传... 单纯疱疹病毒1型(HSV-1),像所有的疱疹病毒一样,拥有多种逃逸宿主免疫系统的机制,它可以长期持续存在于宿主体内,说明在多数情况下,机体免疫系统对它是无能为力的。HSV-1感染粘膜或皮肤的上皮细胞,然后进入外周神经末梢,经过神经轴突传导到感觉神经节。HSV-1潜伏在神经元中,并周期性的再活化,逆向沿着神经纤维到达表皮肤,开始新一轮的病毒复制,此为再感染或复发。 展开更多
关键词 T细胞 单纯疱疹病毒1(hsv-1) hsv-1潜伏感染 hsv-1再活化及潜伏感染
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单纯疱疹病毒1型解螺旋酶-引物酶编码基因重组杆状病毒载体的构建与鉴定
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作者 向阳飞 钱垂文 王一飞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第7期1470-1472,共3页
目的:分别构建含单纯疱疹病毒1型(HSV-1)解螺旋酶-引物酶编码基因UL5、UL52与UL8的重组杆状病毒载体。方法:PCR扩增UL5、UL52与UL8基因全长序列,分别克隆至转移载体pFastBac1,转化E.coliDH10Bac,通过转座作用制备分别带有3种目的基因的... 目的:分别构建含单纯疱疹病毒1型(HSV-1)解螺旋酶-引物酶编码基因UL5、UL52与UL8的重组杆状病毒载体。方法:PCR扩增UL5、UL52与UL8基因全长序列,分别克隆至转移载体pFastBac1,转化E.coliDH10Bac,通过转座作用制备分别带有3种目的基因的重组杆状病毒穿梭载体。结果:克隆的各目的基因序列与GenBank中收录序列一致,各目的基因正确重组至杆状病毒穿梭载体Bacmid。结论:成功构建分别插入HSV-1 UL5、UL52与UL8基因的重组杆状病毒载体,为在昆虫细胞内表达组装HSV-1解螺旋酶-引物酶以及建立靶向该酶复合体的药物筛选平台奠定基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) 解螺旋酶-引物酶 杆状病毒
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U-2 OS细胞/CCK-8法测定1型单纯疱疹病毒溶瘤活性 被引量:5
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作者 胡金盼 李永红 +4 位作者 史新昌 李响 于雷 郑红梅 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期31-36,共6页
目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用... 目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用四参数曲线法进行量效关系拟合。在选择出量效关系最好的细胞株基础上,对方法的各项实验条件进行优化,并采用活性测定标准品对结果进行校正分析。对建立的方法初步验证准确性和精密度,并用上述方法对3批样品的溶瘤活性进行检测。结果:优化后的实验采用U-2 OS细胞株,1∶4的样品系列稀释比例,5×10^4 PFU·mL^-1的样品系列稀释初始浓度,每孔2.5×10^4个细胞的铺板数量,72 h感染时间和4 h CCK-8试剂反应时间等条件进行样品测定,得到的四参数方程拟合的量效关系曲线R^2大于0.99,信噪比较高,初步验证结果显示该方法的回收率为113.4%,日间精密度分析的几何变异系数(GCV)为21.8%。3批测试样品的溶瘤活性分别为3.52×10^3、3.93×10^4和1.61×10^5 U·mL^-1。结论:建立的U-2 OS细胞/CCK-8法可用于以HSV-1为载体的基因治疗药物溶瘤活性测定。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒(hsv-1) 溶瘤活性 标准品校正 量效关系拟合 四参数曲线法 U-2 OS细胞 CCK-8显色法
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HSV-1 UL18基因重组载体的构建及其编码蛋白VP23的表达 被引量:1
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作者 杨攀 金富军 +3 位作者 夏敏 侯志波 王一飞 任哲 《中国卫生检验杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期1639-1640,1664,共3页
目的:构建含有单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的原核表达载体。方法:先将UL18基因进行全序列PCR扩增,再将PCR产物克隆进pET-28a(+)质粒,最后将重组质粒转化进入原核表达系统E.coli BL21(DE3)中表达出带有6个组氨酸标签的重组VP23蛋白... 目的:构建含有单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的原核表达载体。方法:先将UL18基因进行全序列PCR扩增,再将PCR产物克隆进pET-28a(+)质粒,最后将重组质粒转化进入原核表达系统E.coli BL21(DE3)中表达出带有6个组氨酸标签的重组VP23蛋白。结果:UL18基因正确重组进pET-28a(+)质粒,并在E.coli BL21(DE3)中表达。结论:成功构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的重组载体,并在原核表达系统表达出其编码的衣壳蛋白VP23且带有组氨酸标签,为进一步优化VP23在发酵中的最佳表达条件,纯化并大量制备VP23,以及制备VP23的多克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(hsv-1) VP23 三聚体 原核表达
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