峨参石油醚提取物联合氟尿嘧啶对HT29多细胞球模型的作用及机制研究

目的:探讨峨参石油醚提取物联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对HT29多细胞球模型的作用及机制。方法:建立HT29三维多细胞球模型,采用MTT法检测峨参石油醚提取物联合5-FU对HT29三维多细胞球增殖的影响,采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞凋亡,采用western blot技术检测NF-κB P65以及MMP-9蛋白的表达。结果:峨参石油醚提取物对HT29三维多细胞球的抑制作用呈一定的药物剂量依赖性;5-FU和峨参石油醚提取物联用可将HT29结肠癌细胞阻滞于S期和G2/M期,且随着峨参石油醚提取物药物浓度的升高,细胞凋亡率有所升高,其对NF-κB P65、MMP-9的抑制作用加强。结论:峨参石油醚提取物联合5-FU能够显著提高对结肠癌HT29三维多细胞球的抑制作用,且抑制作用随着提取物浓度的增高而增加,其作用机制包括将细胞阻滞于G2/M期以及S期、促进细胞凋亡以及抑制NF-κB P65蛋白与MMP-9蛋白的表达。

肠道吸收细胞模型研究进展及其在类胡萝卜素上的应用

膳食化合物在维持人体生理功能和预防疾病等方面至关重要,但其必须被人体高效吸收利用才能充分发挥其功能活性。肠道吸收细胞模型已成为体外模拟人体膳食化合物吸收利用及机制研究的有效手段。针对不同的膳食化合物,选取合理的肠道细胞吸收模型以及在现有细胞模型的基础上进一步改进,对于实现高效模拟人体对该膳食化合物的吸收利用具有重要意义。因此,本文概述了人体肠道上皮细胞的结构和功能,系统地综述了体外肠道细胞吸收模型研究进展,并以类胡萝卜素为代表,阐述了其肠道吸收转运机制,重点探讨了Caco-2单细胞模型和Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型在其吸收利用上的应用,以期为更好地利用肠道细胞吸收模型体外模拟人体对不同膳食化合物的吸收利用提供借鉴。

聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运研究

建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型,研究不同表面化学性质的PLGA纳米粒在覆盖黏液层的Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运能力。以聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,通过单甲氧基聚乙二醇(mPEG)及壳聚糖(chitosan)对其进行表面修饰,采用纳米沉淀法制备PLGA-NPs、mPEG-PLGA-NPs和壳聚糖包裹的PLGA-NPs,并测定其平均粒径及zeta电位。以香豆素-6(coumarin 6)为荧光标记物,通过激光共聚焦显微镜观察纳米粒的转运情况;以呋喃二烯(FDE)为模型药物,HPLC测定纳米粒的转运量。通过加入内吞阻断剂秋水仙素及诺可唑研究纳米粒的转运机制。采用免疫荧光法考察不同表面化学性质的纳米粒对细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响。结果表明,纳米粒分散均匀,PLGA-NPs表面荷负电,经mPEG修饰后zeta电位近电中性,壳聚糖包裹后表面荷正电。呋喃二烯的包封率均>75%。mPEG-PLGA-NPs在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞的转运能力高于PLGA-NPs和CS-PLGA-NPs,在秋水仙素及诺可唑作用下转运量明显降低,并影响ZO-1蛋白的分布。说明PLGA-NPs和mPEG-PLGA-NPs可能通过胞吞作用和细胞旁路途径进行转运,CS-PLGA-NPs主要以胞吞作用进行转运;mPEG-PLGA-NPs因其表面的亲水性及电荷近中性,具有较好的抗黏性能,能够快速穿过黏液层到达细胞并转运。

健脾清肠方含药血清对HT29细胞内质网应激模型NF-κB信号通路的影响

目的:探讨健脾清肠方(JPQCD)含药血清对HT29细胞内质网应激(ERS)模型NF-κB信号通路的影响健脾清肠方。方法:采用毒胡萝卜素内酯(Tg)诱导体外HT29细胞发生ERD,分为空白组(Control组),模型组(Model组)及健脾清肠方含药血清低、高浓度组(JPQCD-L组、JPQCD-H组)。用健脾清肠方含药血清干预后,Western Blot法和Real time PCR法检测HT29细胞中GRP78、NF-κB蛋白及mRNA表达。结果:与Control组比较,Model组GRP78、NF-κB蛋白及mRNA表达均增加(P<0.05);与Model组比较,JPQCD-L组和JPQCD-H组GRP78、NF-κB蛋白及mRNA表达均减少(P<0.05);与JPQCD-L组比较,JPQCD-H组GRP78、NF-κB蛋白及其mRNA表达减少(P<0.05)。结论:健脾清肠方含药血清能抑制Tg诱导体外HT29细胞发生ERS,抑制NF-κB信号通路,发挥其消炎的作用。