马疱疹病毒1型ORF2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体。根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)感受态细胞,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达ORF2蛋白,使用Ni-NTA琼脂糖纯化树脂纯化,免疫BALB/c小鼠,检测多克隆抗体的效价和特异性。结果显示:ORF2基因成功克隆至原核表达载体pET-28a中,并通过大肠杆菌表达系统得到ORF2蛋白,大小约为38 ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA纯化树脂获得纯度较高的重组蛋白,能够与EHV-1阳性血清特异性结合;间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价为1∶64000,RK-13表达的ORF2蛋白可被多克隆抗体能特异性识别。研究表明,大肠杆菌表达的ORF2重组蛋白具有良好反应原性,ORF2蛋白制备的多克隆抗体效价高、特异性强,可为ORF2蛋白的生物学功能和基因缺失疫苗的研究奠定基础。

抗心磷脂抗体、抗β2糖蛋白1抗体、hs-CRP及同型半胱氨酸与老年脑梗死的相关性

目的探讨抗心磷脂抗体(ACA)、抗β2糖蛋白1抗体(aβ2-GP1)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及同型半胱氨酸(Hcy)与老年脑梗死的相关性。方法回顾分析2016年10月至2019年10月承德医学院附属医院收治的老年脑梗死患者153例作为脑梗死组,另外选取同期体检的健康老年人42例作为对照组。比较两组血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy水平,Pearson相关性分析四者与老年脑梗死患者神经功能严重程度、梗死面积的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线评估四者对老年脑梗死的诊断效能及预后的预测价值。结果脑梗死组血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy水平均显著高于对照组(P<0.001),ROC曲线分析显示,血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy水平分别诊断老年脑梗死的曲线下面积(AUC)为0.861、0.843、0.754、0.858;四者截断值分别为5.83 RU/ml、10.08 RU/ml、1.52 mg/L、15.37μmol/L;四者的特异度分别为60.0%、62.1%、43.9%、60.9%;四者的灵敏度分别为96.8%、94.5%、75.2%、96.8%。轻、中度脑梗死组ACA、aβ2-GP1、hs-CRP、Hcy水平均显著低于重度脑梗死(均P<0.05);而轻度脑梗死组和中度脑梗死组ACA、aβ2-GP1、hs-CRP、Hcy水平差异无统计学意义(均P>0.05)。以ACA、aβ2GP1、hs-CRP和Hcy为自变量,美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分为因变量进行Pearson相关性分析,提示ACA、aβ2GP1、hs-CRP和Hcy与NIHSS评分呈正相关(r=0.455、0.301、0.389、0.299,均P<0.05)。小、中面积组ACA、aβ2-GP1、hs-CRP、Hcy水平均显著低于大面积组(均P<0.05),而小面积组与中面积组ACA、aβ2-GP1、hs-CRP、Hcy水平差异无统计学意义(均P>0.05)。以ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy为自变量,梗死病灶直径为因变量进行Pearson相关性分析,提示ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy与梗死病灶直径呈正相关(r=0.408、0.391、0.339、0.308,均P<0.05)。预后不良组血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy水平均显著高于预后良好组(P<0.05),ROC曲线分析显示,血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP和Hcy水平分别预测老年脑梗死患者预后不良的AUC为0.821、0.810、0.715、0.787;四者截断值分别为7.82 RU/ml、14.66 RU/ml、2.52 mg/L、25.79μmol/L,四者的特异度分别为58.7%、56.4%、60.0%、53.0%;四者的灵敏度分别为90.0%、88.7%、86.0%、75.2%。结论血清ACA、aβ2-GP1、hs-CRP、Hcy与老年脑梗死患者的严重程度、脑梗死面积均呈正相关,四者在老年脑梗死的诊断及预后评估中均有一定的参考价值。

HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。

抗心磷脂抗体与抗β2糖蛋白1抗体在2型糖尿病微血管病变中的意义

目的探索抗心磷脂抗体(aCL)与抗β2糖蛋白1抗体(aβ2GP1)在2型糖尿病微血管病变中的作用。方法将2014-2016年在该院内分泌科住院的322例糖尿病患者分为3组:糖尿病视网膜病变(DR)组150例,糖尿病肾病(DN)组103例,糖尿病无微血管并发症组(NDC)69例;该院体检中心体检健康者100例为健康对照组。用酶联免疫吸附试验法分别测定各组血清中aCL、aβ2GP1水平;用循环酶法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)的水平。结果与100例健康对照组相比,糖尿病各组血清中Hcy、aCL、aβ2GP1水平均明显高于健康对照组(P<0.05);DR与DN组Hcy与aβ2GP1水平明显高于NDC组(P<0.05);aCL水平在DR、DN、NDC各组间差异并无统计学意义(P>0.05)。结论早期监测糖尿病患者血浆抗心磷脂抗体谱尤其是aβ2GP1的水平有助于判断糖尿病微血管并发症的发生发展。

先兆子痫患者血清血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体对血管平滑肌细胞ERK1/2信号途径的激动效应

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)的自身激动性抗体(AT1-AAs)激动培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)AT1受体并激活细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号途径的能力。方法采用亲和层析法提取先兆子痫患者血清中的AT1-AAs。培养大鼠主动脉VSMCs。应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或AT1-AAs刺激培养的细胞。而后,采用免疫印迹法测定细胞中ERK1/2的表达;逆转录PCR检测细胞c-fos基因的表达;应用钙离子的荧光探针Fluo-3/AM负载培养VSMCs,应用共聚焦显微镜检测细胞荧光强度变化以反映细胞内游离钙水平的变化。结果 AT1-AAs能够发挥与血管紧张素Ⅱ类似的效应,能够激动AT1受体,促使ERK1/2的磷酸化并促进其下游的c-fos在VSMCs中的表达;并且ERK1/2的磷酸化一定程度依赖于钙离子信号。结论由于ERK1/2信号通过促进血管炎症、纤维化及血管收缩造成血管重塑,AT1-AAs可能通过该途径参与先兆子痫患者的循环障碍。

1型糖尿病患者血清中抗IA-2与抗GAD_(65)抗体的比较

目的:研究成人1型糖尿病患者血清中抗IA-2抗体和抗GAD65抗体的水平并进行分析。方法:用ELISA法检测了48例20～45岁,病程小于2年的1型糖尿病患者组血清中的IgG型抗IA-2抗体和抗GAD65抗体,并以110例正常人血清作对照组。结果:患者组血清中抗IA-2抗体和抗GAD65抗体的水平与对照组差别均有统计学意义,而且患者组血清中抗IA-2抗体较抗GAD65抗体有更高的阳性率。结论:成人新发1型糖尿病患者血清中IgG型抗IA-2抗体和抗GAD65抗体均有不同程度明显升高,而且对两者进行联合检测会更有助于临床上1型糖尿病的早期诊断。

原因不明复发性流产患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体检查价值分析

目的观察Th1/Th2型细胞因子、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、封闭抗体检查在原因不明复发性流产患者中的价值。方法临床资料采集2017年10月~2018年10月妇产科诊治的80例URSA患者(设观察组),另选取我院80例正常妊娠女性(设正常妊娠组),对两组Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体进行检测,比较两组检测情况。结果观察组治疗后URSA的TNF-α(27.69±8.96)pg/mL、INF-γ(28.16±5.25)pg/mL、IL-2(25.76±8.56)pg/mL均高于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,IL-4(2.19±0.86)pg/mL、IL-6(4.09±1.14)pg/mL、IL-10(1.35±0.33)pg/mL及M-CSF(89.77±8.68)pg/mL均低于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前BA阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗后URSA的BA阳性率52.50%低于正常妊娠组85.00%、治疗后正常妊娠87.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体与原因不明复发性流产存在密切联系,其中Th1细胞因子表达高,Th2细胞因子及M-CSF表达性低,封闭抗体阳性率低时,易引起流产。

人博卡病毒1型主要抗原NS1、NP1及VP1/2的抗体制备及应用

人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)是全球流行的重要呼吸道病毒,其研究尚处于初期阶段。通过原核表达的方式对HBoV1主要抗原NS1、NP1、VP1/2进行蛋白表达,通过纯化、免疫小鼠成功获得3种蛋白的抗体血清,通过ELISA评价了抗体对相应蛋白抗原及临床HBoV1阳性样品的效价,并将所制备的抗体成功用于HBoV1广州株GU338055反向遗传系统的NS1、NP1、VP1/2的免疫荧光研究。结果表明,所制备抗体在1∶50稀释度时A_(450)值对阴性对照约有4倍提升,为HBoV1后续深入研究提供了重要工具,具有重要意义。

猪戊型肝炎病毒重组蛋白ORF2-V1单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析

用纯化的猪戊型肝炎病毒DQ株重组蛋白ORF2-V1免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了αC11,αC12,γH1,γF8,BC4和CH86株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1∶1.60×103～1∶3.20×103,腹水为1∶1.28×106～1∶2.56×106;经ELISA法测定,6株单克隆抗体均与重组蛋白ORF2-V1反应,而不与ORF2其它部分片段的蛋白反应;将试验中制备的MAbs分别用HEVswDQ株感染的A549细胞涂片进行IFA检测,同时分别用猪的阳性、阴性血清和SP2/0细胞上清做对照,制备的6株MAbs对感染细胞均呈现阳性反应,说明其可以与天然的病毒发生反应,并且与阳性多克隆血清比较,以单克隆抗体为一抗,IFA反应表现出良好的特异性。单抗的亚类鉴定结果表明,所有MAbs均为IgG1型,而且所有单克隆抗体的轻链均为κ链。单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明,6株单抗分别针对4个不同抗原位点,McAb-γH1,BC4,CH8识别的位点各不相同,其中McAb-γH1,BC4识别的位点有部分重叠,McAb-αC11,αC12,γF8识别同一位点,位于γH1,BC4识别位点的重叠区内。

胰岛细胞自身抗原IA-2及其自身抗体在1型糖尿病研究中的意义

IA-2是近年来发现的1型糖尿病的一种主要自身抗原,它不仅是体液性自身免疫反应的靶蛋白,而且可能也是细胞免疫反应的靶分子。对IA-2及其自身抗体的研究,在1型糖尿病发病机制、预测及防治等方面均具有重要的意义。

维格列汀联合艾塞那肽治疗2型糖尿病的效果及对血清胰岛细胞抗体和胰高血糖素样肽-1的影响

目的探究维格列汀联合艾塞那肽治疗2型糖尿病(T2DM)的效果及对血清胰岛细胞抗体(ICA)和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水平的影响。方法选择二甲双胍控制不佳的T2DM患者共90例,按照随机数字表法均分为对照组和观察组。对照组使用维格列汀治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合艾塞那肽治疗。比较2组患者治疗前后血糖、胰岛素和胰岛素抵抗相关指标,检测并比较治疗前后血清GLP-1和ICA的表达水平。结果治疗后2组血糖生化指标均显著降低(P<0.05),且观察组空腹血糖(FPG)、2 h血糖(2 h FPG)和糖化血红蛋白(HbA1c)显著低于对照组(P<0.05)。治疗后2组胰岛素相关指标改善,观察组2 h胰岛素(INS)和胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)显著高于对照组,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著低于对照组(P<0.05)。治疗前2组血清GLP-1水平和ICA阳性率无显著差异,治疗后均有好转,治疗后观察组的血清GLP-1水平显著高于对照组,ICA阳性率显著低于对照组(P<0.05)。2组不良反应发生情况无显著差异。结论维格列汀联合艾塞那肽能更有效地提高GLP-1水平,并降低ICA表达,提示联合治疗具有改善胰岛β细胞功能的作用。

金标层析法与酶联免疫吸附试验初筛HIV1+2型抗体对比分析

目的：对金标层析法（GICA）试剂和酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂初筛 HIV1＋2进行对比分析，评估GICA试剂的品质，并将筛查出阳性血清进行免疫印迹试验（WB）确认，探讨筛查结果与WB试验结果的关系。方法选用市面上口碑较好的5个厂家的艾滋病病毒（HIV ）抗体GICA快速筛查试剂与ELISA HIV抗体初筛试剂平行检测16780例血清标本，初筛阳性血清送疾控中心用WB试验做确认，对WB试验结果不确定者进行4、8周随访检测，8周随访标本补充HIV-1病毒载量检测。结果7种试剂敏感性为99．23％～100．00％，其中3种GI-CA试剂在敏感性上已经达到ELISA试剂的水平（100％），假阳性率为0．08％～0．12％，功效率均在99．80％以上，282例初筛阳性血清经WB法确认有260例为阳性，5例不确定血清经随访检测确定均为阴性，初筛试剂阳性率可达92．20％。结论 GICA检测试剂筛检HIV抗体检测敏感性、特异性和功效率均较高，某些厂家生产的试剂在敏感性、特异性方面已经达到了ELISA试剂的水平，且快速、简便、价廉，是理想的HIV抗体筛查试剂。

初发1型糖尿病患儿血清GADA抗体和IA-2A抗体的阳性率及其与糖脂代谢紊乱的关系

目的探讨初发1型糖尿病(T1DM)患儿血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)阳性率及其与糖脂代谢紊乱的相关性。方法选取2018年1月-2022年1月在南京市高淳人民医院内分泌科住院治疗的初发1型糖尿病患儿95例为T1DM组,另选取同期体检的95例健康儿童作为对照组,对比两组GADA抗体和IA-2A抗体阳性率及糖脂代谢指标的水平,同时分析T1DM组中GADA抗体和IA-2A抗体阳性率与糖脂代谢指标的相关性。结果T1DM组血清糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h-PG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于对照组,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组血清GADA抗体阳性率为2.11%,IA-2A阳性率为1.05%;T1DM组血清GADA抗体阳性率为46.32%,IA-2A阳性率为22.11%;T1DM组2种抗体的阳性率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。T1DM组中血清GADA抗体阳性者和IA-2A抗体阳性者有较高的HbA1c、FPG、2 h-PG、TC、TG及LDL-C水平,同时有较低的血清HDL-C水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。T1DM组患儿血清GADA和IA-2A抗体水平与HbA1c、FPG、2 h-PG、TC、TG及LDL-C水平呈显著正相关(P<0.05),与HDL-C水平呈显著负相关(P<0.05)。结论T1DM患儿血清GADA抗体及IA-2A抗体有较高的阳性率,同时与糖脂代谢呈显著的相关性,T1DM患儿的发病及糖脂代谢紊乱可能与GADA和IA-2A抗体的阳性率升高有关。

临床药师参与1例抗LGI 1抗体相关性脑炎伴2型糖尿病患者药学监护实践

目的探讨临床药师在抗富亮氨酸胶质瘤失活1蛋白(LGI 1)抗体相关性脑炎伴2型糖尿病患者药学监护中发挥的作用。方法临床药师参与1例抗LGI 1抗体相关性脑炎伴2型糖尿病患者临床治疗方案的制订,结合患者的体格检查、专科检查、辅助检查结果,以及自身临床药学实践经验和相关指南文献,评估患者病情,调整醋酸泼尼松给药方式、用药时间,以及胰岛素用药剂量,并给予利培酮片。结果临床医师采纳临床药师建议,调整治疗方案后,患者的临床症状、焦虑抑郁情绪、药品不良反应得到明显改善。结论临床药师参与调整抗LGI 1抗体相关性脑炎治疗和降血糖方案,促进了合理用药。

动脉粥样硬化指数与血清抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白1抗体水平的相关性研究

目的探讨动脉粥样硬化指数(AI)与血清抗心磷脂抗体(ACA)及抗β2糖蛋白1抗体(aβ2GP1)水平的关系,为动脉粥样硬化(As)的预防控制提供参考依据。方法选择温州医科大学附属第一医院2017年3月至2018年6月住院患者34 598例,检测其血清ACA、ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM、aβ2GP1、aβ2GP1-IgA、aβ2GP1-IgG、aβ2GP1-IgM、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸(Hcy)、载脂蛋白A1(ApoA1)。计算AI,根据AI将患者分为高危组(AI≥4)和低危组(AI<4)。利用统计软件进行相关分析。结果高危组ACA和aβ2GP1的阳性率均高于低危组(χ^2=23.276和17.603,均P=0.000),且年龄、ACA-IgA、ACA-IgG、aβ2GP1-IgA、aβ2GP1-IgG、Hcy水平亦均高于低危组(均P<0.05),而ApoA1水平低于低危组(P=0.000)。相关性分析显示,AI与ACA-IgA、ACA-IgG、aβ2GP1-IgA、aβ2GP1-IgG、Hcy均呈正相关(r=0.048、0.032、0.094、0.014、0.142,均P<0.01),与ApoA1呈负相关(r=-0.447,P=0.000)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、ACA-IgA、Hcy、aβ2GP1是As的危险因素,ApoA1是As的保护因素。结论随着ACA-IgA、aβ2GP1、Hcy、年龄的升高,ApoA1的降低,患者AI逐渐升高,As危险度也相应升高。临床上应密切关注ACA、aβ2GP1、Hcy、ApoA1异常的高龄患者,以预防As的发生。

1型糖尿病一级亲属GADA、IA-2A与IAA联合检测的价值

目的 采用放射配体法检测118 例1 型糖尿病一级亲属的谷氨酸脱羧酶抗体(GA-DA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA),发现三种抗体单独检出率与欧美高加索人接近,联合检测阳性率优于单一抗体检测。

新疆伊宁县婚前检查者人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体感染情况分析

来医院婚前1332名检查者自然人群静脉采血2～3ml分离血清后进行HIV抗体检测时发现其中的15例HIV抗体阳性情况,现报告其血清学检测结果并对这一结果出现的原因做出初步分析。

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体与动脉粥样硬化斑块局部炎症的关系

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)与动脉粥样硬化动物模型粥样斑块局部炎症之间的关系。方法收集高血压合并急性冠状动脉综合征患者AT1-AA阳性和阴性的血清并纯化。建立30只球囊拉伤所致高脂血症兔动脉粥样硬化模型,随机分成6组:(1)对照组;(2)低浓度AT1-AA[20μg/(kg·d)]注射组(简称LA组);(3)高浓度AT1-AA[40μg/(kg·d)]注射组(简称HA组);(4)氯沙坦[20 mg/(kg·d)]灌胃+高浓度AT1-AA注射组(简称L+HA组);(5)辛伐他汀[4 mg/(kg·d)]灌胃+高浓度AT1-AA注射组(简称S+HA组);(6)7aa[1.5 mg/(kg·d)]灌胃+高浓度AT1-AA注射组(简称7aa+HA组),予以不同的处理。取兔腹主动脉进行HE染色,比较各组斑块所占管腔面积;同时用Western blot检测斑块局部MMP-2的表达。结果各组总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平在第4周后明显升高。除对照组外,其他各组在第8、10周血清AT1-AA水平均明显高于实验开始时。LA组、HA组斑块占管腔面积百分值分别为46.99%±13.06%、66.11%±19.67%,明显高于对照组(27.71%±7.46%)、L+HA组(34.27%±12.38%)、S+HA组(24.03%±8.56%)及7aa+HA组(28.54%±12.50%)(均P<0.05)。LA组、HA组MMP-2的表达均明显高于其他各组(均P<0.05)。结论 AT1-AA可明显促进高脂喂养兔受损动脉内膜处斑块形成,增强斑块局部炎症反应的发生及细胞增殖。