HTN9禽流感病毒人感染株与禽源株基因组差异分析研究

目的对比分析人和活禽市场来源禽分离到的HTN9禽流感病毒基因组差异；为流行季节活禽市场管理提供依据。方法采集实验室确诊和有禽类接触史的HTN9病毒感染患者的咽拭子和痰标本，采用RT—PCR检测病毒的M、H7和N9基因，采用MDCK细胞培养病毒。对有流行病学关联的活禽市场收集了30份禽类泄殖腔拭子标本并接种于鸡胚。通过测序对从人和鸡分离到的病毒进行鉴定和分型，并对病毒的8个基因片段进行分析。结果患者感染毒株基因序列与从当地一农贸市场鸡中分离到的HTN9禽流感病毒基因序列同源。所有的病毒基因片段属于禽源性，从患者体内分离到的病毒株出现了H7基因Oln226Leu和Gly186Val替换（这有可能增加了病毒与人呼吸道上皮细胞唾液酸a-2，6型受体的亲和力）和PB2基因AspTOIAsn突变（该突变与禽流感病毒的哺乳动物适应性有关）。结论HTN9禽流感病毒出现了适应性变异，可从禽向人跨种传播。因其对家禽没有致病性，导致活禽交易不止，禽流感威胁不息，为有效控制禽类HTN9病毒进一步感染人并引发大流行，流行期间有必要采取一些如临时关闭活禽市场和综合性监测等有效措施。

两株人H7N9禽流感病毒的全基因组测序及分子特征分析

【目的】对两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的人H7N9禽流感病毒进行全基因组测序,研究其来源、基因组特征以及相互间的分子差异,旨在了解毒株的遗传进化特征与其致病性及其所致疾病临床类型的关系,为进一步阐明H7N9禽流感病毒的致病机制提供科学依据。【方法】选取两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的H7N9禽流感病毒进行全基因组序列测定;运用生物信息学软件比较分析两株病毒的遗传进化关系、基因组特征、受体结合位点、宿主特异性位点及致病相关位点等重要分子特征;从禽流感共享数据(GISAID)下载2013年至2014年10月轻症和重症病例的病毒分离株序列,分析致病相关关键位点差异,并分析这些变异与其致病性及所致疾病临床类型的关系。【结果】这两株H7N9禽流感病毒的HA、NA和M基因来源于2013年华东地区流行的H7N9禽流感病毒,NP、NS、PA、PB1和PB2基因来源于2013年在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒;H7N9禽流感病毒PA蛋白L336M和PB1蛋白I368V的突变率随流行时间的延长而逐渐上升,并存在地区差异;两株病毒各基因核苷酸同源性达到99.2%以上,氨基酸同源性在99.5%以上,但各基因节段存在个别氨基酸的差异,其中HA受体结合位点存在一个关键氨基酸的差异(226L和226 Q),宿主特异性位点存在两个关键氨基酸的差异(PB2-591L和PB2-591Q,PB2-627E和PB2-627K),毒力位点存在两个关键氨基酸差异(PA-353R和PA-353K,PB2-627E和PB2-627K);M2均发生了S31N突变;潜在糖基化位点均相对保守;2013年至2014年10月报道的重症病例病毒分离株PB2蛋白E627K突变率高于轻症病例分离株。【结论】两株来自不同临床类型的H7N9禽流感病毒是一种新的重组病毒,是由华东地区流行的人H7N9禽流感病毒和在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒基因重组而来;H7N9禽流感病毒的某些致病相关的关键氨基酸位点在流行的过程中不断发生变异,必须密切监测毒株的变异动向;两株致病力不同的病毒各基因节段虽然同源性较高,但存在关键氨基酸位点的差异,其中PB2蛋白627位氨基酸位点的差异可能对病毒的致病性起重要作用,与所致疾病临床类型相关。

全球禽流感研究的发展态势:文献计量分析

目的从文献计量的角度研究全球禽流感研究的发展态势。方法检索ISI Web of Science的SCI-E数据库,利用TDA分析工具和文献引用树的分析方法对检索结果进行分析。结果得益于美国、中国等国家研究者的努力,自2005年以来全球禽流感研究快速增长。从研究质量上看,日本和荷兰在国际研究项目的支持下,表现十分抢眼。美国、日本和荷兰完成的H5N1病毒突变研究是近年来该领域的典型研究成果,但也引发了不少争议。结论全球关于H7N9等亚型的禽流感病毒研究有待进一步加强。

H7N9禽流感病毒研究现状

2013年3月在中国华东地区爆发了一场严重的人类感染禽流感疫情,导致此次疫情的病原体为一种全新的H7N9禽流感病毒,该病毒以其对人类的高致病性及远高于H5N1禽流感病毒的传播速度而引起全球广泛关注。本文就H7N9禽流感病毒的病原学、致病的分子基础、流行病学、临床特征及防治措施等方面的研究现状进行综述,旨在了解人感染H7N9禽流感的研究进展,为人感染H7N9禽流感的有效防控提供科学依据。

新型H7N9病毒在同居小鼠中的传播途径

目的进一步了解新型H7N9流感病毒的致病性、传播能力以及通过何种途径进行传播。方法 H7N9病毒感染小鼠后与同居小鼠合笼,研究同居小鼠的临床变化指征、病毒复制情况、病毒在组织中的分布以及病理变化。以同居小鼠分泌物接种其他小鼠,观察同居小鼠通过何种途径传播病毒。结果 H7N9病毒可以在肺组织、肠组织和脑组织中复制,并可以在同居小鼠中传播。H7N9病毒感染小鼠其咽、眼分泌物以及粪便均具有感染性,其中尤以咽拭子的传播风险最高。结论 H7N9病毒可以不通过适应就感染小鼠,并引起小鼠间传播。被感染小鼠分泌物具有感染性。

重大传染病疫情应急管理现状与提升策略研究——基于人感染H7N9禽流感的个案分析

基于过程化应急管理理论,分析政府应对人感染H7N9禽流感措施,反思政府在应急管理中存在的问题,得出重大传染病疫情的应急管理提升策略:完善地方政府应急管理建设、完善重大传染病上报制度以及建立合理有效的信息管理机制。

H7N9亚型禽流感病毒核蛋白NP原核表达载体的构建与表达

目的构建甲型H7N9禽流感病毒NP基因的原核表达载体,并表达其编码重组蛋白。方法 RT-PCR法扩增H7N9病毒NP基因,克隆至原核表达载体PET28a(+)中,构建表达载体PET28a(+)-NP质粒;经PCR、双酶切、测序鉴定后,将PET28a(+)-NP质粒转化表达菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达NP重组蛋白。应用western blot法鉴定NP蛋白的表达。结果成功构建NP基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达出分子量为56kD的NP重组蛋白。结论实现了禽流感病毒H7N9NP重组蛋白在原核系统中的高效表达,为禽流感诊断试剂及单抗的研发工作奠定了基础。

基于百度指数的H7N9传播动力学模型研究

根据H7N9流感的传播机理,结合百度指数,建立了H7N9传播动力学模型.对模型进行了理论分析,得到基本再生数、无病平衡点及正周期解的稳定性;并给出实际病例与百度指数的相关性,进而通过对实际病例和百度指数的数据拟合,验证了模型的合理性;最后,分析了禽的因病死亡率对H7N9流感传播阈值及流行趋势的影响,为疾病的预防和控制提供支撑.

表达分泌型与膜结合型HH7N9 AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较

研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚中的繁殖性能较强。此外,LXs HA主要以分泌形式表达HA蛋白,而LXHAF则以膜结合形式表达HA。鸡的免疫试验显示,两株重组病毒在一次免疫后均能诱导针对NDV载体的血凝抑制抗体,但LXHAF能够诱导较高水平的H7N9 AIV特异性Ig Y抗体,而LXs HA不能诱导H7N9 AIV抗体应答。结果表明,表达膜结合型HA的重组病毒具有针对H7N9 AIV较好的免疫原性,而表达分泌型HA的重组病毒免疫原性较差。这为研发H7N9亚型禽流感载体疫苗提供新的信息与参考。

人感染H7N9禽流感监测病例中分离到一株A型呼吸道合胞病毒

目的对H7N9型禽流感病毒(简称H7N9病毒)监测病例进行病原学检测,以明确呼吸道感染的诊断与鉴别诊断。方法采用多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对H7N9病毒进行监测的同时对22种呼吸道常见病原体核酸进行检测,并对检测到的病原体进行分离鉴定。结果在一例重症肺炎患者的H7N9病毒监测标本中检出A型呼吸道合胞病毒(RSV-A),并利用人胚肺成纤维细胞(MRC-5)对该标本进行了病毒分离,成功分离到了一株RSV-A。结论多重RT-PCR能同时对22种呼吸道病原核酸进行检测,有助于疫情的及时诊断和控制。RSV-A的成功分离为呼吸道合胞病毒的进一步研究打下基础。

H7N9禽流感病毒人感染株与禽源株基因组差异分析研究

目的：对比分析人和活禽市场来源禽分离到的H7N9禽流感病毒基因组差异；为流行季节活禽市场管理提供依据。方法：采集实验室确诊和有禽类接触史的H7N9病毒感染患者的咽拭子和痰标本，采用RT—PCR检测病毒的M、H7和N9基因，采用MDCK细胞培养病毒。对有流行病学关联的活禽市场收集了30份禽类泄殖腔拭子标本并接种于鸡胚。通过测序对从人和鸡分离到的病毒进行鉴定和分型，并对病毒的8个基因片段进行分析。结果：患者感染毒株基因序列与从当地一农贸市场鸡中分离到的H7N9禽流感病毒基因序列同源。所有的病毒基因片段属于禽源性，从患者体内分离到的病毒株出现了H7基因Gln226Leu和Glyl86Val替换（这有可能增加了病毒与人呼吸道上皮细胞唾液酸a-2，6型受体的亲和力）和PB2基因Asp701Asn突变（该突变与禽流感病毒的哺乳动物适应性有关）。结论：H7N9禽流感病毒出现了适应性变异，可从禽向人跨种传播。为有效控制禽类H7N9病毒进一步感染人并引发大流行，流行期间有必要采取一些如临时关闭活禽市场和综合性监测等有效措施。

H7N9亚型AIV荧光定量RT-PCR技术建立及在活禽市场的应用

针对H7N9亚型欧亚谱系AIV的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的序列保守区分别设计特异性引物和TaqMan探针。通过优化反应条件,建立了H7N9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用该方法对泰安市活禽市场11个月的空气状况进行监测。结果显示:H7和N9基因的最低检测限度分别为100copies/μL和101 copies/μL,检测H7和N9基因的R2值均为0.999。批内和批间试验的变异系数均小于3%。采用该技术,活禽市场空气样品3/114份检测出H7N9阳性。结果表明:本试验建立的H7N9亚型AIV实时荧光定量RT-PCR方法与其他方法相比具有快速、特异和敏感的优点,可为H7N9亚型AIV的监测及早期诊断提供理论依据。

湖南省人感染H7N9禽流感患者流行病学调查研究

目的描述人感染H7N9禽流感患者的流行病学特征,分析人感染H7N9禽流感患者预后的影响因素。方法从"中国疾病预防控制信息系统"收集湖南省2013年3月30日至2016年3月30日报告的人感染H7N9禽流感确诊患者35例,描述流行病学及临床特征,利用logistic回归分析评估人感染H7N9禽流感患者预后的影响因素。结果35例确诊患者中,死亡16例(45.71%),具有禽类暴露史31例(88.57%)。症状起始至入院时间中位数5(3~7)d,症状起始至诊断时间中位数7(6~10)d,症状起始至死亡时间中位数14(10~26)d。多因素logistic回归分析显示,女性患者发生死亡风险是男性患者的12.877(95%CI:1.156~143.450)倍,肾功能不全患者发生死亡的风险是肾功能正常的30.636(95%CI:3.180~295.179)倍。生存分析结果显示,女性和肾功能不全患者的总生存率低于男性和肾功能正常的患者(P<0.05)。结论女性和肾功能不全可能是影响人感染H7N9禽流感患者预后的主要影响因素,建议针对女性和肾功能不全患者采取有效的治疗措施和重点护理。

一起人感染H7N9禽流感家庭聚集性疫情的流行病学调查分析

目的 调查一起人感染H7 N9禽流感聚集性疫情的流行病学特征,分析病例的感染来源和传播途径.方法 对病例开展现场流行病学调查和实验室检测,对病例感染来源进行调查和外环境采样检测.结果 共发现两名病例,病例为父女关系.两病例发病前有可疑活禽暴露史,居住地附近可疑暴露市场标本检测出H7N9禽流感病毒.病例1在潜伏期内即发病,判断为环境暴露感染;其女儿的发病时间距脱离暴露环境已经10天,而在其父亲发病后曾共同生活,判断由其父亲传染给她的可能性大.结论 本起家庭聚集性疫情中,病例1的感染来源可能为被H7 N9禽流感病毒污染的环境,病例2被病例1传染的可能性更大.

利用系统进化树对H7N9大数据预测传播模型的评估

活禽贸易和H7N9禽流感病毒传播之间存在关联,应用大数据技术分析活禽交易网络数据,可进行疫情溯源并预测未来传播趋势。从流感研究数据库中获取了截止至2013年分离得到的H7N9毒株的血凝素基因核酸序列,构建系统进化树推断2013年上半年疫情中H7N9在各省及城市间的传播情况,并与大数据推断结果进行对比分析。结果表明,系统进化树推断结果更为准确,但大数据分析能够提供更多地区的信息且具有更好的时效性,同时推断的传播模型准确度较高,在H7N9疫情的应对中具有较高的应用价值。

广州市番禺区人感染H7N9禽流感流行病学和外环境监测

目的分析广州市番禺区人感染H7N9禽流感的流行特征和外环境监测结果,为防控H7N9禽流感工作提供科学依据。方法采用流行病学个案调查与描述性分析方法,收集2014-2015年番禺区出现的人感染H7N9禽流感确诊病例的流行病学调查资料,以及全区外环境监测点的监测资料。结果 2014-2015年番禺区共确诊6例人感染H7N9病例,均在2月份发病,死亡4例,发病前有活禽市场接触史5例;共采集外环境标本3 031份,检测阳性率为6.17%,肉菜市场、禽类批发市场、禽类养殖场检测阳性率分别为7.22%、2.04%、0.00%,差异有统计学意义(P<0.05);外环境标本阳性检出率与病例发病时间分布上一致。结论冬春季节是本地人感染H7N9禽流感易发季节,活禽市场暴露是危险因素,规范活禽交易是防控人感染H7N9禽流感的关键。

4种常用消毒剂对H7N9亚型流感病毒灭活效果研究

为了比较常用消毒剂对H7N9亚型流感病毒杀灭效果,依照2002年版《消毒技术规范》,评估过硫酸氢钾复合物粉、聚维酮碘溶液、戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液4种消毒剂在不同浓度下,与H7N9亚型流感病毒作用10 min、30 min和60 min的灭活效果。结果显示,0.2%（w/v）过硫酸氢钾复合物粉溶液作用10 min,0.5%（w/v）聚维酮碘溶液作用30 min,0.1%（v/v）戊二醛癸甲溴铵溶液作用30 min,或0.3%（v/v）稀戊二醛溶液作用30 min,均可将H7N9亚型流感病毒完全灭活。与推荐使用浓度相比,戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液、聚维酮碘可以有效灭活H7N9亚型流感病毒,而过硫酸氢钾复合物粉不能有效灭活H7N9亚型流感病毒。本研究对H7N9亚型流感病毒消毒剂的选用具有指导意义。

人感染H7 N9禽流感重症患者13例临床分析

自2013年3月起，我国部分省市出现人感染H7N9禽流感，重症患者病情发展迅速，短期内出现严重呼吸衰竭、多器官功能障碍，甚至死亡。既往研究多针对患者症状和实验室检查，而对支气管肺泡灌洗液细胞学检查和长期的影像学随访观察的文章甚少。现对福建省福州肺科医院收治的13例人感染H7 N9禽流感重症患者的临床资料和预后进行回顾性分析，进一步增加对该病的认识，提高诊疗水平。

2017年淮南市外环境H7N9病毒HA和NA基因特征分析

目的分析淮南市2017年外环境标本中H7N9禽流感病毒血凝素基因(hemagglutinin,HA)及神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA)的基因特征。方法采集活禽市场禽类咽拭子、肛拭子、粪便、笼具、台面或砧板、脱毛机、禽类饮水、污水等标本,进行禽流感病毒Real-time PCR分型检测,选取H7N9核酸阳性标本(CT值≤28),对其HA和NA基因进行特异性扩增,并对扩增产物进行基因序列测定。采用Bioedit5.0.9、DNASTAR7.1软件对测序结果拼接,并选取国内外H7N9参考序列使用Mega 6.06软件构建HA和NA基因遗传进化树。结果淮南市外环境3株H7N9禽流感毒株HA基因其核苷酸同源性为98.7%~100.0%,氨基酸序列同源性为99.3%~100.0%,基因进化分析显示,该3株H7N9禽流感毒株与安徽、江苏、浙江分离毒株亲缘性较近,处于长三角分支内,与2017年安徽株A/Anhui/13449/2017/H7N9(EPI258029)核苷酸同源性为98.7%~99.9%,氨基酸同源性为99.3%~100.0%,HA发生G186V、Q226L突变;NA基因核苷酸同源性为98.3%~100.0%,氨基酸同源性为99.5%~100.0%;基因进化分析显示,淮南株HN-3、HN-4与2017年安徽分离株A/Anhui/13449/2017/H7N9(EPI 258029)亲缘性最近,核苷酸同源性为98.7%~99.7%,氨基酸同源性为99.5%~100.0%,NA蛋白R294K耐药位点无变异,NA茎区69~73位缺失了"QISNT"序列。结论淮南市活禽市场外环境H7N9病毒HA基因和NA基因与人感染H7N9安徽株(EPI 258029)A/Anhui/13449/2017/H7N9高度同源,处于同一进化分支,有共同的进化来源;HA受体结合位点氨基酸发生G186V、Q226L变异,NA茎区69~73位缺失"QISNT"序列均加强了病毒感染人类的能力。

两类带有接种的H7N9禽流感模型

为了评价家禽和人接种抗H7N9疫苗对预防和控制H7N9禽流感的效果,建立了两类带有接种的H7N9禽流感模型,分析了模型的稳定性,比较了两种接种措施的控制效果,得出的主要结论:人接种抗H7N9疫苗不会消灭H7N9禽流感,而家禽接种抗H7N9疫苗可以通过加强接种力度消灭H7N9禽流感;进一步从数值分析上,人接种抗H7N9疫苗能快速降低感染H7N9禽流感的人数,在短期内控制人群感染发病上效果更好,因此积极研发人和家禽使用的抗H7N9疫苗是有意义的.