HTPAP单体型与基因表达及肝细胞癌(HCC)预后的关系

目的拟通过分析不同HTPAP单体型与基因表达及肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后的关系,探讨HTPAP单体型对HCC术后复发及预后的影响。方法随机选取377例HCC样本,提取其中以AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC和GCGGAT等4种主要HTPAP单体型组成的HCC RNA。绝对定量PCR检测HTPAP基因表达水平,免疫组化染色、RT-PCR和Western blot检测HTPAP蛋白表达水平,分析单体型与基因表达的关系。随机选取665例HCC样本并提取DNA,焦磷酸测序方法对6个单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)进行检测。单体型构建后,分析HTPAP单体型与HCC预后的关系。结果 377例HCC中有327例由上述4种主要单体型构成。基因表达分析提示,HCC中HTPAP在GCGGGT纯合子组和AGCTAC/GCGGGT杂合子组的表达低于AGCTAC/GCGGAT杂合子组、AGCTAC/AGCTGC杂合子组及AGCTAC纯合子组,但差异无统计学意义(P=0.062)。免疫组化染色发现GCGGGT纯/杂合子组HCC较其他单体型HCC的HTPAP表达显著降低(P=0.035)。Kaplan-Meier分析提示,GCGGGT纯/杂合子组HCC较其他单体型HCC术后易复发且预后差(P<0.001)。Cox风险比例模型发现GCGGGT单体型是HCC术后复发及预后差的独立相关因子。结论 HCC的不同HTPAP单体型在mRNA水平的表达差异无统计学意义,但在蛋白水平存在显著差异。GCGGGT单体型可作为HCC术后复发和预后差的预测指标。

肿瘤抑制基因HTPAP单体型构建及其与肝癌转移潜能的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织DNA的HTPAP基因单体型与肝癌转移潜能的关系。方法提取864例HCC手术样本DNA,应用焦磷酸测序行SNPs检测,并予单体型构建,分析其与肝癌转移潜能的关系。构建HTPAP启动子单体型pGL3质粒,并分别转染MHCC-97H、HepG2肝癌细胞和正常的肝Hela细胞,分析不同HTPAP启动子单体型对基因转录活性的影响。结果共发现6个SNPs位点[-1053A/G、+64G/C、+357C/G、+1648-/TAAG(无插入和插入TAAG等位基因分别以T/G示,后同)、+1838A/G、+3528C/T]。单体型构建发现HTPAP中共存在11个单体型,其中AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC、GCGGAT四种单体型占94.75%。临床病理特征分析提示单体型GCGGGT与高转移潜能正相关(P=0.0003)。启动子序列中两个SNPs(-1053AG和+64GC)存在完全LD,故只有三种启动子单体型(-1053AA/+64GG、-1053AG/+64GC GC和-1053GG/+64CC);双荧光报告法发现三种单体型的HTPAP启动子都具有显著转录活性,其中-1053AA/+64GG单体型启动子转录活性较-1053GG/+64CC和-1053AG/+64GC单体型启动子强,差异具有统计意义(P=0.005,0.009)。结论肿瘤转移抑制基因HTPAP的GCGGGT单体型与HCC高转移潜能正相关。HTPAP启动子单体型对基因的转录活性有显著影响并与术后复发密切相关,提示HCC中HTPAP的不同SNP单体型可能是潜在侵袭转移和复发预后的预测指标。