目的绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展值得探讨。文章旨在构建H 2 O 2诱导滋养细胞焦亡模型,探讨绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展,为探究子痫前期发病机制提供新的方向。方法人滋养细胞HTR-8/SVneo培养于164...目的绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展值得探讨。文章旨在构建H 2 O 2诱导滋养细胞焦亡模型,探讨绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展,为探究子痫前期发病机制提供新的方向。方法人滋养细胞HTR-8/SVneo培养于1640+10%胎牛血清+1%抗生素中,培养12 h后,给予H 2 O 2(100、150、200、250μmol/L)处理细胞(2、4、6、12 h),对照为1640+10%胎牛血清+1%抗生素正常培养细胞。提取细胞总蛋白,Western blot检测焦亡相关分子蛋白水平的表达;RT-qPCR检测细胞中焦亡相关分子mRNA水平;倒置相差显微镜观察细胞形态学改变。结果当H 2 O 2为150μmol/L,处理人滋养细胞4 h时,焦亡相关分子NLRP3、caspase1、Cleaved caspase1、GSDMD及IL-1β的蛋白水平明显高于对照,随着作用时间的延长及浓度的增加,蛋白质表达水平被抑制;当H 2 O 2为150μmol/L,作用2 h时,焦亡经典通路中上游“启动”信号关键分子NLRP3及IL-1β的mRNA水平较对照明显升高(P<0.000);4 h时,焦亡经典通路中的关键分子GSDMD的mRNA水平及下游炎症因子IL-18的mRNA水平明显高于对照组(P<0.05)。通过焦亡相关分子mRNA水平的逆向验证,H 2 O 2诱导滋养细胞焦亡模型最佳条件为150μmol/L和4 h,在该条件下,光镜下可明显看到细胞肿胀、碎裂及质膜气泡形成等细胞焦亡典型改变。结论体外成功建立了氧化应激反应诱导滋养细胞焦亡模型,模拟了氧化应激反应诱导滋养细胞发生焦亡损伤的病生理过程,为后续子痫前期发病机制的研究提供实验基础。展开更多
目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8...目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。展开更多
文摘目的绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展值得探讨。文章旨在构建H 2 O 2诱导滋养细胞焦亡模型,探讨绒毛外滋养细胞焦亡是否参与子痫前期的发生发展,为探究子痫前期发病机制提供新的方向。方法人滋养细胞HTR-8/SVneo培养于1640+10%胎牛血清+1%抗生素中,培养12 h后,给予H 2 O 2(100、150、200、250μmol/L)处理细胞(2、4、6、12 h),对照为1640+10%胎牛血清+1%抗生素正常培养细胞。提取细胞总蛋白,Western blot检测焦亡相关分子蛋白水平的表达;RT-qPCR检测细胞中焦亡相关分子mRNA水平;倒置相差显微镜观察细胞形态学改变。结果当H 2 O 2为150μmol/L,处理人滋养细胞4 h时,焦亡相关分子NLRP3、caspase1、Cleaved caspase1、GSDMD及IL-1β的蛋白水平明显高于对照,随着作用时间的延长及浓度的增加,蛋白质表达水平被抑制;当H 2 O 2为150μmol/L,作用2 h时,焦亡经典通路中上游“启动”信号关键分子NLRP3及IL-1β的mRNA水平较对照明显升高(P<0.000);4 h时,焦亡经典通路中的关键分子GSDMD的mRNA水平及下游炎症因子IL-18的mRNA水平明显高于对照组(P<0.05)。通过焦亡相关分子mRNA水平的逆向验证,H 2 O 2诱导滋养细胞焦亡模型最佳条件为150μmol/L和4 h,在该条件下,光镜下可明显看到细胞肿胀、碎裂及质膜气泡形成等细胞焦亡典型改变。结论体外成功建立了氧化应激反应诱导滋养细胞焦亡模型,模拟了氧化应激反应诱导滋养细胞发生焦亡损伤的病生理过程,为后续子痫前期发病机制的研究提供实验基础。
文摘目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。
