间断性高浓度胰岛素对HUECV304细胞NO分泌的影响

目的研究在持续性高浓度胰岛素与间断性高浓度胰岛素不同浓度胰岛素的条件培养液的作用下,体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUECV304)分泌一氧化氮(NO)的相应变化,从而进一步探究间断性高浓度胰岛素血症导致动脉粥样硬化的原因及致病机制。方法本研究用体外培养的HUECV304细胞作为试验对象,研究间断性高浓度胰岛素对HUECV304细胞NO分泌的影响。试验共分为4组,即含100nmol/L胰岛素条件培养液与1nmol/L胰岛素细胞培养液轮换培养的间断性高浓度胰岛素组,含1nmol/L胰岛素细胞培养液的正常浓度胰岛素组,含100nmol/L胰岛素细胞培养液的持续性高浓度胰岛素组、不含胰岛素细胞培养液的阴性对照组,各组每间隔8小时均更换新鲜条件培养液1次,总共作用72小时。内皮细胞培养液上清中NO的含量用硝酸还原酶法检测。结果含不同浓度的胰岛素条件培养液作用内皮细胞72小时后,正常浓度组、间断性高浓度胰岛素组与持续性胰岛素组细胞分泌NO均出现不同程度的增加,分别为对照组的2.21倍(P<0.05),7.13倍(P<0.001)和4.50倍(P<0.001);其中间断性高浓度胰岛素组内皮细胞分泌NO增加尤为明显,明显高于持续性高浓度胰岛素组内皮细胞分泌NO(P<0.05)。结论间断性高浓度胰岛素相对于持续性高浓度胰岛素能增强人脐静脉内皮细胞NO的分泌。提示血管内皮细胞NO的过度合成可能是间断性高浓度胰岛素损伤血管内皮的功能、促进糖尿病的慢性血管并发症的产生及其发展的重要原因。

间断性高浓度胰岛素对HUECV304细胞iNOS蛋白表达的影响

目的研究体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUECV304)在间断性高浓度胰岛素与持续性高浓度胰岛素作用下诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白的不同表达,从而进一步研究间断性高浓度胰岛素血症导致动脉粥样硬化的原因及发病机制。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUECV304)为实验对象,研究间断性高浓度胰岛素对血管内皮细胞i NOS蛋白表达的影响。分为四组进行实验,即间断性高浓度胰岛素波动组(含100 nmol/L胰岛素的细胞培养液及含1 nmol/L胰岛素的细胞培养液轮换,每隔8小时更换一次)、持续性高浓度胰岛素组(含100 nmol/L胰岛素的细胞培养液)、含正常浓度胰岛素组(含1 nmol/L胰岛素的细胞培养液)、阴性对照组(不含胰岛素的细胞培养液);再依次更换新鲜条件细胞培养液(每次培育8小时后),四组细胞均培育72小时。采用免疫细胞化学法检测内皮细胞i NOS蛋白表达。结果四组内皮细胞经含不同浓度胰岛素的培养液培养72小时后,结果表明:正常浓度胰岛素组、间断性高浓度胰岛素组、持续性高浓度胰岛素组的内皮细胞i NOS蛋白的表达水平均不同程度地增高,分别为对照组的1.92倍(P<0.001)、4.52倍(P<0.001)、3.31倍(P<0.001),其中以间断性高浓度胰岛素组增高幅度尤为明显,高于持续性高浓度胰岛素组(P<0.001)。结论相对于持续性高浓度胰岛素,间断性高浓度胰岛素更能增强人脐静脉内皮细胞i NOS蛋白的表达,提示间断性高浓度胰岛素可能通过影响血管内皮细胞i NOS蛋白表达途径而损伤血管内皮的功能,从而促进糖尿病血管并发症的进一步发展。

间隔性高浓度胰岛素对内皮细胞VCAM-1蛋白表达的影响

目的比较体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUECV 304)在间隔性高浓度胰岛素与恒定性高浓度胰岛素作用下VCAM-1蛋白的不同表达,分析间隔性高浓度胰岛素促成动脉粥样硬化的原因。方法选择脐静脉内皮细胞进行实验,分为间隔性高胰岛素组(含重组人胰岛素100 nmol/L的细胞培养液及含重组人胰岛素1 nmol/L的细胞培养液轮换,每隔8小时更换1次)、恒定性高胰岛素组(含重组人胰岛素100 nmol/L的细胞培养液)、正常胰岛素组(含重组人胰岛素1 nmol/L的细胞培养液)、阴性对照组(不含重组人胰岛素的细胞培养液),每隔8小时更换新鲜条件细胞培养液,培育3 d后采用免疫细胞化学法检测4组内皮细胞VCAM-1蛋白的表达。结果正常胰岛素组、间隔性高胰岛素组、恒定性高胰岛素组内皮细胞VCAM-1蛋白表达均有不同幅度上升,分别为阴性对照组蛋白表达的2.26倍(P<0.001)、5.19倍(P<0.001)、3.67倍(P<0.001)。间隔性高胰岛素组内皮细胞VCAM-1蛋白的表达上升程度强于恒定性高胰岛素组(P<0.001)。结论相对于恒定性高浓度胰岛素,间隔性高浓度胰岛素更能增强内皮细胞VCAM-1蛋白的表达,提示间隔性高浓度胰岛素可能通过影响血管内皮细胞VCAM-1蛋白表达途径而损伤血管内皮功能,从而促进糖尿病血管并发症的进一步发展。

血管内皮生长因子与不同类型急性白血病的关系及其意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在不同类型和不同病期急性白血病(AL)患者发病过程中的作用及其意义。方法采用半定量RTPCR方法检测69例AL患者骨髓单个核细胞(MNC)VEGFmRNA表达,ELISA法检测培养上清MNCVEGF的含量,MTT比色法检测骨髓MNC培养上清对人脐静脉内皮细胞株huECV304细胞增殖的影响。结果骨髓MNCVEGF相对中位表达量(VEGF与βactin相对灰度比值),初发未治组(0.86)高于缓解组(0.41)和正常对照组(0.39)(P值均<0.01),复发组(1.02)与初发未治组之间差异无统计学意义(P>0.05);初发未治急性髓系白血病(AML)组(1.03)高于急性淋巴细胞白血病(ALL)组(0.61)(P<0.05)。初发未治AL组骨髓MNC72h培养上清液VEGF水平为91.48ng/L,高于缓解组(31.91ng/L)和正常对照组(28.71ng/L)(P值均<0.01);AML组(173.49ng/L)高于ALL组(32.76ng/L)(P<0.01)。AML患者骨髓MNC72h培养上清可促进huECV304细胞增殖,明显高于条件上清加VEGF抗体阻断组(P<0.01);而ALL患者骨髓MNC培养上清液对huECV304细胞增殖的影响与单抗阻滞组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论AML患者MNCVEGFmRNA表达强度和分泌水平高于ALL患者;参与ALL和AML血管新生反应的调控因子可能不同。

波动性高胰岛素对血管内皮细胞的凋亡的影响

目的:对比研究波动性高浓度胰岛素与恒定性高浓度胰岛素对体外培养的人脐静脉内皮细胞的凋亡的影响,从而探究波动性高浓度胰岛素血症在糖尿病动脉粥样硬化形成中的致病机制。方法:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞为对象,研究波动性高胰岛素对血管内皮细胞的凋亡的影响。实验分为4组,即对照组(不含胰岛素)、正常浓度胰岛素组(含胰岛素1nmol/L)、恒定性高胰岛素组(含胰岛素100nmol/L)与波动性高胰岛素组(含胰岛素1nmol/L及含胰岛素100nmol/L两种条件培养液,每8小时轮换一次),每间隔8小时更换新鲜条件培养液一次,一共作用72小时。应用AO-EB染色法与流式细胞仪检测内皮细胞凋亡。结果:1、胰岛素对内皮细胞凋亡的影响1.1经不同浓度的胰岛素作用72小时后,AO-EB检测结果显示:正常浓度胰岛素组的内皮细胞凋亡细胞数明显下降,为对照组的81%(p<0.001),而恒定性高胰岛素组与波动性高胰岛素组的内皮细胞凋亡细胞数明显上升,分别为对照组的1.53倍(p<0.001)与1.75倍(p<0.001),正常浓度胰岛素组的1.88倍(p<0.001)与2.15倍(p<0.001);且波动性高胰岛素组内皮细胞凋亡细胞数显著高于恒定性高胰岛素组(p<0.001)。1.2经不同浓度的胰岛素作用72小时后,流式细胞仪检测结果显示:正常浓度胰岛素组的内皮细胞凋亡率明显下降,为对照组的81%(p<0.001),而恒定性高胰岛素组与波动性高胰岛素组的内皮细胞凋亡率出现明显上升,分别为对照组的1.11倍(p<0.01)与1.39倍(p<0.001),正常浓度胰岛素组的1.37倍(p<0.001)与1.72倍(p<0.001);且波动性高胰岛素组内皮细胞凋亡率显著高于恒定性高胰岛素组(p<0.001)。结论:1、波动性高胰岛素相对于恒定性高胰岛素更能诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡。

波动性高胰岛素对内皮细胞一氧化氮合酶信使核糖核酸的影响

目的:对比研究波动性高浓度胰岛素与恒定性高浓度胰岛素对体外培养的人脐静脉内皮细胞eNOS mRNA转录水平的影响,从而探究波动性高浓度胰岛素血症在糖尿病动脉粥样硬化形成中的致病机制。方法:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞为对象,研究波动性高胰岛素对血管内皮细胞eNOS mRNA转录水平的影响。实验分为4组,即对照组(不含胰岛素)、正常浓度胰岛素组(含胰岛素1nmol/L)、恒定性高胰岛素组(含胰岛素100nmol/L)与波动性高胰岛素组(含胰岛素1nmol/L及含胰岛素100nmol/L两种条件培养液,每8小时轮换一次),每间隔8小时更换新鲜条件培养液一次,一共作用72小时。应用应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞eNOS基因mRNA转录水平。结果:经不同浓度的胰岛素作用72小时后,正常浓度组、恒定性高胰岛素组与波动性高胰岛素组内皮细胞eNOS mRNA转录水平均不同程度上调,分别为对照组的2.25倍(p<0.001)、6.00倍(p<0.001)和6.88倍(p<0.001),其中以波动性高胰岛素组上调尤为明显,且明显高于恒定性高胰岛素组(p<0.05)。结论:波动性高胰岛素相对于恒定性高胰岛素能增强人脐静脉内皮细胞eNOS mRNA的转录。