人HUT78细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

为了检测人HUT78细胞是否存在褪黑素受体(melatoninreceptor,MR)及其亚细胞分布特点 ,采用异硫氢酸胍 苯酚 氯仿一步法抽提总RNA ,进一步通过RT PCR方法检测MR亚型mt1和MT2 的mRNA ,并将RT PCR的阳性产物通过自动测序仪测序 ;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2 受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点。RT PCR方法则得到了 3 68bpmt1cDNA片段 ,无 3 2 1bpMT2 cDNA片段 ,同时将mt1阳性条带通过胶回收、测序 ,结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合 ;免疫组化结果显示 ,人HUT78细胞存在mt1受体蛋白 ,主要分布于细胞膜和细胞浆 ,呈棕褐色阳性颗粒 ,而细胞核上未见阳性颗粒 ,MT2 受体蛋白则未检出。提示褪黑素 (melatonin,Mel)对T淋巴细胞具有直接调节作用 。

阿维A与干扰素对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞株Hut78细胞增殖及白细胞介素15表达的影响

目的：检测不同浓度阿维A、干扰素α（IFN-α）单独或联合应用对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的增殖抑制作用及白细胞介素15（IL-15）表达的影响。方法将Hut78细胞分为空白对照组、阴性对照组、二甲基亚砜组（DMSO）和实验组，其中实验组分别用0.1~10μmol/L阿维A和5000~20000 IU/ml IFN-α单独或1.0μmol/L阿维A联合5000~20000 IU/ml IFN-α作用Hut78细胞，培养24、48、72 h后分别进行测定。CCK8法检测细胞增殖情况，ELISA检测药物处理后细胞的白细胞介素15（IL-15）表达情况。结果各浓度阿维A或联合作用组与DMSO组相比及IFN-α组与阴性对照组相比，Hut78细胞增殖和IL-15表达均受到明显抑制，抑制作用随浓度增加和时间延长而增强。重复测量方差分析显示，阿维A、IFN-α单独或联合作用不同时间，细胞增殖抑制率和IL-15表达差异均有统计学意义（P〈0.05），不同作用浓度之间差异亦有统计学意义（均P〈0.05），作用时间与药物浓度之间存在交互作用（均P〈0.05）。1.0μmol/L阿维A＋10000或20000 IU/ml IFN-α组与相应浓度药物单独作用组比较，细胞抑制率差异在24、48、72 h时均有统计学意义（P〈0.05）。1.0μmol/L阿维A＋5000 IU/ml IFN-α组在24、48、72 h时与5000 IU/ml IFN-α组相比，IL-15表达差异均有统计学意义（P〈0.05）；1.0μmol/L阿维A＋10000或20000 IU/ml IFN-α组与相应浓度药物单独作用组之间IL-15表达差异在24、48、72 h时均有统计学意义（P〈0.05）。结论阿维A和IFN-α均对Hut78细胞的增殖有抑制作用，均可下调Hut78细胞IL-15的表达，这种作用随着浓度的增加和时间的延长而增强，且两者联合用药优于单独用药。