葡萄籽原花青素通过Nrf2/ARE信号通路抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化损伤

研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。建立高糖诱导的HUVEC-12细胞模型,测定细胞活力,检测细胞内活性氧(ROS)水平、乳酸脱氢酶(LDH)与超氧化物歧化酶(SOD)活性及Nrf2/ARE信号通路中相关基因mRNA水平和蛋白含量。结果显示GSPE作用后显著提高HUVEC-12细胞活力,抑制高糖诱导的细胞内ROS水平升高,增强SOD活性(P<0.05),并呈现剂量依赖效应。GSPE作用能同时提高抗氧化转录因子Nrf2和下游区GSH-Px、HO-1、γ-GCS、NQO1基因的表达量以及HO-1、NQO1蛋白的含量(P<0.05)。结果表明GSPE能通过激活Nrf2/ARE通路对抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化应激损伤。

葛根素对高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究葛根素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化损伤的保护作用。方法用含100 mmoL/L葡萄糖和10、25、50μmo L/L葛根素的培养基共同孵育HUVEC-12细胞36 h后,测定细胞存活率,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。qPCR检测细胞中SIRT1、PGC-1α mRNA表达,酶联免疫吸附法检测培养液中SIRT1、PGC-1α蛋白含有量。结果葛根素可增加HUVEC-12细胞存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含有量与Caspase-3活性,增加SOD、CAT活性和GSH含有量。同时,葛根素还能提高SIRT1、PGC-1α mRNA表达及蛋白含有量。结论葛根素能通过激活SIRT1/PGC-1α通路来保护高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤。

茶多酚对甲醛致人内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨茶多酚对甲醛致人内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法采用体外常规培养内皮细胞,取对数生长期的细胞进行实验。实验设对照组、甲醛损伤组和低、中、高剂量茶多酚保护组,其中茶多酚先与细胞预孵12 h后加入0.1 mmol/L甲醛,置CO_2培养箱培养4 h,检测细胞培养液中SOD活力及LDH、MDA、NO的含量,SP法检测NF-κB。结果茶多酚各保护组与甲醛损伤组比较SOD活力明显升高,LDH、MDA含量均降低(P<0.05);茶多酚各保护组内皮细胞NO释放量减少、NF-κB表达明显下降与甲醛损伤组比较均有显著性(P<0.05)。结论茶多酚可提高内皮细胞抗氧化酶的活性,减轻甲醛所致的氧化损伤;茶多酚通过拆制NF-κB的表达,减少NO的产生从而减轻细胞内脂质过氧化是其保护作用的重要机制。

氯化钴对人的eNOS基因启动子SP1改构体转录活性的影响

目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性的变化.方法:用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型,PCR点突变技术构建突变启动子pGL2-eNOS-insSP1,分别将pGL2-eNOS-insSP1和pGL2-eNOS-p载体导入HUVEC-12细胞,双荧光素酶报告基因技术用于检测启动子转录活性的变化.结果:DNA测序显示人的eNOS基因启动子SP1改构体的序列正确;改构体eNOS启动子活性在一定范围内随氯化钴刺激剂量的增加而升高.结论:SP1插入改造的方法显著提高了eNOS基因启动子的转录活性.

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞CD40表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中白细胞分化抗原CD40表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制。方法实验分为6组:对照组、10.0μmol/L氨氯地平单独处理组、ox-LDL组、0.1、1.0及10.0μmol/L氨氯地平预先处理细胞1 h后加入50 mg/L ox-LDL共同孵育24 h组。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40 mRNA的表达,W estern b lot检测CD40蛋白的表达。结果随着氨氯地平浓度增加,细胞CD40的mRNA和蛋白表达逐渐降低,当浓度为10.0μmol/L时作用更明显。结论氨氯地平对ox-LDL诱导的HUVEC-12细胞CD40的表达具有抑制作用。

脂联素减轻高糖诱导的人血管内皮细胞系损伤

目的观察脂联素(APN)对高糖诱导血管内皮细胞系损伤的保护作用及NF-κB与LOX-1蛋白表达在其中的作用。方法 30 mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12(人脐静脉内皮细胞系),不同浓度的脂联素(10、20和40μg/m L)作用48 h及20μg/m L脂联素作用不同时间(12、24、48和72 h)后,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态,Western blot检测核转录因子NF-κB和LOX-1蛋白表达,间接免疫荧光法检测NF-κB核转位情况。结果脂联素作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12,内皮细胞形态改善,折光性增强,胞内颗粒物减少,细胞排列相对规整;同时,LOX-1蛋白表达下调(P<0.05),NF-κB活性降低(P<0.05),并呈现时间和浓度依赖性(n=3,P<0.05)。结论脂联素可能通过NF-κB信号通路引起LOX-1蛋白表达下调,从而发挥其对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。

甲醛对人脐静脉内皮细胞氧化损伤作用

目的 探讨甲醛对人脐静脉内皮细胞的损伤作用及可能机制。方法 将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度甲醛（0、5、10、20、40、80μmol／L）下；同时以过氧化氢为阳性对照组，抗氧化药物维生素C为保护组。24h后通过MTT比色法检测细胞生长抑制率，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛含量，观察甲醛是否对内皮细胞具有损伤作用及维生素C对甲醛损伤的内皮细胞是否具有保护作用。结果 甲醛能抑制细胞的生长活性，细胞生长抑制率随甲醛浓度的增加而增加；甲醛诱导细胞外丙二醛的生成，且其含量随甲醛浓度的增加而增加。维生素C能降低甲醛对内皮细胞的生长抑制率，降低细胞外MDA含量。结论 甲醛能诱导内皮细胞产生损伤作用，这种作用与其增加内皮细胞产生过多的脂质过氧化物有关。抗氧化刺维生素C能减轻甲醛对内皮细胞的氧化损伤。

共轭亚油酸对甲醛致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察共轭亚油酸(CLA)对甲醛致内皮细胞株(HUVEC-12)损伤的影响及其作用机制。方法HUVEC-12体外培养至对数生长期,分别用浓度为0.0、50.0、100.0、200.0μmol/L的CLA预孵12h,再经0.1mmol/L甲醛处理,电镜观察细胞形态学变化,分光光度法检测细胞培养液中LDH、MDA和NO的含量变化。结果甲醛可致内皮细胞损伤,导致细胞膜破裂,甲醛损伤组(0.0μmol/LCLA)细胞LDH、MDA和NO释放量高于正常对照组,差异有显著性(P<0.01);与甲醛损伤组比较,50.0μmol/LCLA组内皮细胞LDH释放量低(P<0.01),100.0及200.0μmol/LCLA组LDH、MDA和NO释放量均下降(P<0.01),但100.0及200.0μmol/LCLA组间差异无显著性。结论甲醛致内皮细胞损伤与细胞脂质过氧化有关,适当浓度的CLA可减轻这种损伤。

咖啡酸抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及机制探讨

目的:用H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡建立氧化应激模型,观察咖啡酸对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)凋亡的保护作用并初步探讨其机制。方法:分别用不同浓度的咖啡酸和H_2O_2处理HUVEC-12,通过四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)检测细胞的活力,流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶荧光染色(AO-EB染色)观察细胞凋亡形态,Western blotting检测NF-κB、P53和Bcl-2的表达。结果:用0.5 mmol/L H_2O_2和不同浓度咖啡酸共同孵育24 h,MTT提示咖啡酸能明显减轻H_2O_2对HUVEC-12的损伤,提高细胞的存活率,流式细胞检测术提示咖啡酸能使H_2O_2诱导的HUVEC-12凋亡率由21.9%±2.1%降至3.8%±1.1%。AO-EB染色提示咖啡酸能降低H_2O_2诱导的细胞凋亡,使凋亡细胞减少;同时NF-κB和P53表达上调,Bcl-2表达下调。结论:不同浓度的咖啡酸对H_2O_2引起的HUVEC-12损伤有保护作用,并呈现一定的浓度依赖性和时效性,其机制可能与调节NF-κB、P53和Bcl-2蛋白的表达有关。

茶多酚对甲醛致人内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨茶多酚对甲醛致人内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法采用体外常规培养内皮细胞,取对数生长期的细胞进行实验。实验设对照组、甲醛损伤组和低、中、高剂量茶多酚保护组,其中茶多酚先与细胞预孵1 2h后加入0.1 mmoL/L甲醛,置CO2培养箱培养4h,检测细胞培养液中SOD活力及LDH、MDA、N0的含量,s P法检测NF-KB。结果茶多酚各保护组与甲醛损伤组比较SOD活力明显升高,LDH、MDA含量均降低(P<0.05);茶多酚各保护组内皮细胞N0释放量减少、NF—KB表达明显下降与甲醛损伤组比较均有显著性(P<0.05)。结论茶多酚可提高内皮细胞抗氧化酶的活性,减轻甲醛所致的氧化损伤;茶多酚通过抑制NF—KB的表达,减少N0的产生从而减轻细胞内脂质过氧化是其保护作用的重要机制。