LncRNA SNHG12调控miR-138-5p/HIF-1α轴改善缺氧/复氧人血管内皮细胞损伤的研究

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)调控miR-138-5p/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)轴改善缺氧/复氧(H/R)人血管内皮细胞损伤的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、H/R模型组、H/R+LncRNA SNHG12过表达组、H/R+miR-138-5p mimics组、H/R+共转染组、H/R+共转染阴性对照组,各转染组分别进行转染处理,除对照组外,其余各组给予5 h缺氧,再进行复氧1 h处理,诱导细胞模型,然后通过CCK-8实验检测各组细胞活力情况;通过流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况,比较各组细胞凋亡率;通过试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子IL-6、IL-17、IL-18水平;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验测定各组细胞miR-138-5p及HIF-1αmRNA表达;通过免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α蛋白表达。结果:与对照组相比,H/R模型组细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞HIF-1αmRNA和蛋白水平、细胞caspase-9、Bax及HIF-1α蛋白水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-138-5p水平降低(P<0.05)。与H/R模型组、H/R+共转染组相比,H/R+LncRNA SNHG12过表达组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞caspase-9与Bax蛋白水平、miR-138-5p水平降低(P<0.05);H/R+miR-138-5p mimics组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞cas⁃pase-9与Bax蛋白水平升高(P<0.05)。与H/R模型组相比,H/R+共转染阴性对照组、H/R+共转染组细胞各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA SNHG12可通过下调miR-138-5p表达,上调HIF-1α表达,抑制H/R诱导的HUVECs炎症与氧化应激,减轻细胞损伤及凋亡。

葡萄籽原花青素通过Nrf2/ARE信号通路抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化损伤

研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。建立高糖诱导的HUVEC-12细胞模型,测定细胞活力,检测细胞内活性氧(ROS)水平、乳酸脱氢酶(LDH)与超氧化物歧化酶(SOD)活性及Nrf2/ARE信号通路中相关基因mRNA水平和蛋白含量。结果显示GSPE作用后显著提高HUVEC-12细胞活力,抑制高糖诱导的细胞内ROS水平升高,增强SOD活性(P<0.05),并呈现剂量依赖效应。GSPE作用能同时提高抗氧化转录因子Nrf2和下游区GSH-Px、HO-1、γ-GCS、NQO1基因的表达量以及HO-1、NQO1蛋白的含量(P<0.05)。结果表明GSPE能通过激活Nrf2/ARE通路对抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化应激损伤。

内皮细胞生长因子诱导大鼠血管内皮细胞增殖过程中FKBP12的表达

目的 探讨内皮细胞生长因子 (Endothelialcellgrowthfactor ,ECGF)诱导的血管内皮细胞 (Vascularendothelialcell ,VEC)增殖过程中FK5 0 6结合蛋白 12 (FK5 0 6bindingprotein 12 ,FKBP12 )表达的变化 ,为VEC的鉴定提供新的方法。方法 培养大鼠VEC并传代。倒置显微镜下观察其在ECGF作用下的增殖情况 ,检测Ⅷ因子相关抗原、FKBP12和不同时期FKBP12mRNA水平的表达。结果 VEC表达FKBP12 ;VEC传代后第 4天FKBP12mRNA表达水平达到最高 ,6～ 8d下降。结论 FKBP12既可作为VEC的标志物 。

11,12-环氧二十碳三烯酸对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的通过观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞损伤程度的影响,了解EET血管保护的可能途径,并初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、11,12-EET对照组、11,12-EET缺氧/复氧组、细胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2)抑制组和一氧化氮合酶抑制组。通过向培养瓶内通入混合气体(2%O2,5%CO2,93%N2)3h,复氧1h复制缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测细胞存活率,比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的变化,Westernblot方法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和ERK1/2的表达。结果11,12-EET在常氧条件下可对细胞造成轻度损伤,而在缺氧/复氧条件下能显著提高内皮细胞的存活率,降低LDH的漏出率,提高SOD的活性,降低MDA的含量,并且促进eNOS、磷酸化ERK1/2的表达。结论11,12-EET具有拮抗内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,这与其提高缺氧/复氧内皮细胞SOD活性、清除氧自由基、减少缺氧/复氧对eNOS及磷酸化ERK1/2表达的抑制有关。

特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

目的通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制。方法使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型。分三组,即空白对照组(RAAEC+20%DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20%DMEM培养基+1mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1mL PBS将1mg LPS溶解后的溶液)。观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量变化。结果LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性。与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/m L:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组e NOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05)。结论特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度。

血管内皮生长因子与白细胞介素12在急性白血病不同时期血清中的变化

目的:由于造血干/祖细胞发生基因突变,子代细胞增殖失控等导致的恶性血液病。血管内皮生长因子和白细胞介素12参与这一发生发展过程,检测不同时期其在急性白血病患者静脉血中的水平,有利于认知与血管新生及体液免疫的相关性。方法:随机选择2005-06/2006-04在吉林市中心医院住院的急性白血病患者25例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,患者知情同意,并经医院伦理委员会批准。将患者分为:①初诊未治组10例。②复发组5例。③完全缓解组10例。并设9名健康查体者为正常对照。应用定量酶联免疫吸附实验测定受试者血清中血管内皮生长因子和白细胞介素12的水平,在评定白细胞介素12水平时,将初诊未治组与复发组合并为初诊复发组:①两组的发病机制相似。②两组病例数较少,单独观察没有统计学意义。结果:25例患者和9名健康对照者均进入结果分析。①初诊未治组血管内皮生长因子含量高于完全缓解组及正常对照组(P均<0.05)。②正常对照组白细胞介素12水平与初诊复发组、完全缓解组之间差异均具有显著性意义(P均<0.05)。③正常对照组血管内皮生长因子含量与白细胞介素12之间存在负相关(r=-0.9644P<0.05)。④初诊复发组、完全缓解组血管内皮生长因子和白细胞介素12含量之间均无相关性(r=-0.0883,-0.3593,P均>0.05)。结论:急性白血病患者血清中血管内皮生长因子和白细胞介素12含量与临床病情变化有关,可以作为诊断和预测急性白血病发生和复发的指标。

白细胞介素-12基因缺陷促进内皮祖细胞浸润改善缺血再灌注后心肌损伤的研究

目的:探讨白细胞介素-12(IL-12)调控小鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)的作用机制。方法:复制小鼠心肌IRI模型,分成四组:野生型(WT)假手术组;白细胞介素-12p35亚基(IL-12p35)基因缺陷假手术组;WT手术组;IL-12p35基因缺陷手术组。超声检测心脏结构及功能;采用Masson三色特殊染色法检测组织内胶原沉积;TUNEL检测心肌细胞凋亡;免疫组化染色及qRT-PCR检测内皮祖细胞(EPC)招募相关的趋化因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达以及EPC细胞表面趋化因子受体(CXCR4)和血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)表达;流式细胞术检测IRI后梗死部位EPC数量。结果:缺血再灌注术后14d,与对照组相比,IL-12p35基因缺陷小鼠的心脏射血分数明显升高[WT vs.IL-12p35基因缺陷:(48.7±5.9)vs.(55.2±6.7)%,P<0.05],心功能显著改善;心肌纤维化程度明显减轻(P<0.05);术后1d,IL-12p35缺陷小鼠心肌细胞凋亡数量较对照组,差异无统计学意义;术后7d,IL-12p35基因缺陷小鼠心脏中趋化因子GM-CSF、EPC细胞表面受体CXCR4和VEGFR表达较对照组显著增加(P<0.05),干扰素-γ(IFN-γ)表达较对照组减少(P<0.05);且与对照组相比,IRI后梗死部位EPC数量明显升高(P<0.05)。结论:IL-12基因缺陷表现出明显的抗心肌IRI的作用,其机制是GM-CSF表达增加促进内皮祖细胞(EPC)浸润,从而促进了血管生成和抑制心力衰竭。

11,12-环氧二十碳三烯酸对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤及细胞间黏附因子-1表达的影响

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EET)对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤以及黏附分子表达的影响,了解环氧二十碳三烯酸发挥血管保护作用的可能途径,初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉内皮细胞,用数字表法将其随机分为对照组、11,12-EET对照组、缺氧/复氧组和11,12-EET缺氧/复氧组。通过向培养瓶内通入混合气体(2%O2,5%CO2,93%N2)3h,复氧1h,复制缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测细胞活力,用比色法检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的变化,用RT-PCR法检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)mRNA表达,用酶联免疫吸附实验测定细胞间黏附分子-1蛋白表达,用Western blotting方法检测蛋白激酶B(Akt)。结果11,12-EET在常氧条件下可对细胞造成轻度损伤,在缺氧/复氧条件下能显著提高内皮细胞的存活率,提高SOD的活性,降低MDA的含量,抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达,提高Akt的表达。结论11,12-EET具有减轻内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,这可能与其能提高缺氧/复氧条件下内皮细胞SOD活性、清除氧自由基、抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达和促进Akt的表达有关。

胰蛋白酶对内皮细胞释放IL-10、IL-12和INF-γ的影响

目的研究胰蛋白酶对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放IL-10、IL-12和INF-γ释放的影响。方法分离、培养HUVECs,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,免疫荧光染色检测蛋白酶激活受体2(PAR2)表达,ELISA法检测HUVECs培养上清中IL-10、IL-12和INF-γ水平。结果贴壁后的原代HUVECs经历呈圆形或类圆形、梭性和多角形的形态变化。HUVECs表达PAR2,荧光分布于细胞周边。胰蛋白酶诱导HUVECs上清中的IL-10和IL-12水平显著升高,INF-γ水平几乎未被检出。蛋白酶激活受体-2抑制剂能够降低胰蛋白酶诱导的IL-10和IL-12水平。结论胰蛋白酶可能通过PAR2激活促进内皮细胞释放IL-10和IL-12。

血管内皮生长因子和白细胞介素-12在急性白血病中的表达及临床意义

通过检测急性白血病(AL)患者静脉血清中血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-12(IL-12)的含量,探讨VEGF和IL-12在急性白血病中的含量及临床意义.应用定量酶联免疫吸附实验测定10例初诊未治1、0例缓解期、5例复发患者和9例正常对照血清中VEGF和IL-12的含量.初诊未治组的VEGF含量(521.06ng/L±163.85ng/L)明显高于缓解组(307.62ng/L±55.40ng/L)及对照组(262.01ng/L±141.66ng/L)(P<0.05);对照组的IL-12水平(58.96ng/L±38.11ng/L)与初诊复发组(初诊未治组与复发组的合称32.51ng/L±14.58ng/L)、缓解组(71.67ng/L±119.09ng/L)之间均有显著性差异(P<0.05);正常对照组VEGF的含量与IL-12之间存在负相关性.结论是VEGF和IL-12与AL的病情变化有一定的关系.

白藜芦醇对CXCL12诱导的人脐静脉内皮细胞株细胞增殖及血管生成的影响

[目的]探讨白藜芦醇(Resv)对CXCL12诱导的人脐静脉细胞株(HUVEC)细胞增殖及血管生成的影响.[方法]取体外培养的HUVEC细胞,给予CXCL12和Resv干预后采用MTT法检测HUVEC细胞增殖情况,采用Matrigel胶体外管型形成实验检测HUVEC细胞管型形成情况,利用RT-PCR法检测HUVEC细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平.[结果]CXCL12可显著促进HUVEC细胞体外增殖、体外管型形成及VEGF mRNA表达(P<0.01,P<0.001);而Resv显著抑制CXCL12诱导的HUVEC细胞体外增殖、体外管型形成及VEGF mRNA表达(P<0.01,P<0.001).[结论]Resv可抑制CXCL12诱导的HUVEC细胞体外增殖及血管生成,其机制可能与下调VEGF mRNA表达水平有关系.

热休克蛋白A12B对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨小鼠肺微血管内皮细胞(mPMVECs)热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达下调对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎症反应、迁移及超微结构改变的影响。方法体外传代培养的mPMVECs分为LPS组(添加1μg/mL LPS)、LPS+siRNA组[瞬时转染法将HSPA12B相应基因片段干扰小RNA(siRNA)寡核苷酸转入mPMVECs中,再加入1μg/mL LPS)]和LPS+NC组[瞬时转染法将平行对照(NC)siRNA寡核苷酸转入mPMVECs中,再加入1μg/mL LPS]。对LPS+siRNA组和LPS+NC组,分别采用Transwell试验和细胞划痕实验观察细胞迁移情况;应用透射电子显微镜(透射电镜)观察mPMVECs超微结构改变;应用Real-Time PCR检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-10和IL-1βmRNA的表达。结果与LPS+NC组比较,LPS+siRNA组mPMVECs的线粒体损伤加重,内质网水肿更明显;细胞内TNF-α、IL-6和IL-10mRNA的表达显著上调(P<0.05),而IL-1β表达下调,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞迁移功能显著下降(P<0.05)。结论下调HSPA12B表达后,mPMVECs经LPS刺激的炎症反应增强,细胞迁移功能下降。HSPA12B可能参与保护mPMVECs免受LPS侵袭的过程。

葛根素对高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究葛根素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化损伤的保护作用。方法用含100 mmoL/L葡萄糖和10、25、50μmo L/L葛根素的培养基共同孵育HUVEC-12细胞36 h后,测定细胞存活率,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。qPCR检测细胞中SIRT1、PGC-1α mRNA表达,酶联免疫吸附法检测培养液中SIRT1、PGC-1α蛋白含有量。结果葛根素可增加HUVEC-12细胞存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含有量与Caspase-3活性,增加SOD、CAT活性和GSH含有量。同时,葛根素还能提高SIRT1、PGC-1α mRNA表达及蛋白含有量。结论葛根素能通过激活SIRT1/PGC-1α通路来保护高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤。

热休克蛋白A12B降低脂多糖诱导的血管内皮细胞通透性

目的探讨脂多糖诱导下血管内皮细胞热休克蛋白A12B（HSPAl2B）表达的改变及其对血管内皮通透性的影响。方法体外传代培养人脐静脉内皮细胞，并将其分为空白组（未进行任何处理）、脂多糖（1μg／mL）诱导组、脂多糖＋HSPAl2B高表达组（转染HSPAl2B过表达质粒）和脂多糖＋阴性质粒对照组（转染阴性对照质粒）。采用电阻抗检测仪检测脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗，流式细胞仪检测血管内皮钙黏素（VE-cadherin）的表达，蛋白质印迹、PCR检测HSPAl2B的表达改变。结果脐静脉内皮细胞经脂多糖诱导后，细胞中HSPAl2B表达在O～12h内上调，12h时达高峰。HSPAl2B能使脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗值明显升高（P〈O．001），并能完全对抗脂多糖诱导造成的跨内皮电阻抗值的下降（P〈O．001）。HSPAl2B能使脐静脉内皮细胞细胞膜上VE-cadherin的表达上调。结论HSPAl2B可能通过上调VE-cadherin表达降低血管内皮细胞的通透性，从而保护血管内皮的屏障功能。

Ganetespib对PC12细胞的凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的体外探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)抑制剂Ganetespib对PC12细胞生长的影响及血管内皮生长因子VEGF表达的调控。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法观察Ganetespib对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的生长抑制作用;流式细胞学技术观察不同浓度Ganetespib处理细胞后的细胞周期变化;蛋白质免疫印迹法(Western blotting法)检测HSP90、VEGF蛋白的表达变化。结果 Ganetespib呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞,24h半数抑制浓度(IC50)为0.2μmol/L;Ganetespib在0.2μmol/L浓度能够有效引起PC12细胞周期阻滞于G0/G1期;Ganetespib能抑制PC12细胞的HSP90、VEGF的表达。结论 HSP90抑制剂Ganetespib能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,抑制HSP90、VEGF蛋白表达。

Adv-HIF-1α^(mu)转染内皮祖细胞对CXCL12表达影响的研究

目的研究转染低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF1αmu)后的外源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中CXCL12的表达情况及对EPCs的影响。方法密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养EPCs并进行鉴定;以Adv-HIF-1αmu的最佳转染指数转染EPCs,获得含有目的基因处理的EPCs细胞,设为A组。B组为单纯转染Adv的EPCs。设未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs为C组。Western Blot检测转染后的EPCs中HIF-1的表达,检测转染后的EPCs培养液上清液中的CXCL12浓度及其对外源性EPCs迁移的影响。结果密度梯度离心结合差速贴壁法获得的EPCs能够结合UEA-1和摄取ac-LDL,并具有成血管作用;转染Adv-HIF-1αmu的EPCs表达的HIF-1及CXCL12高于单纯转染Adv的EPCs及未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs(P<0.05),且能诱导外源性EPCs的迁移。结论密度梯度离心结合差速贴壁法能够分离、培养符合特征的EPCs,转染Adv-HIF-1αmu的EPCs能够在常氧条件下高表达HIF-1及CXCL12,并诱导外源性EPCs的迁移。

钙结合蛋白A12、白细胞介素-6、白细胞介素-8及血管内皮生长因子水平变化与骨关节炎患者病情程度的关系探讨

目的探讨钙结合蛋白A12(S100A12)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及血管内皮生长因子(VEGF)的变化与骨关节炎病情的关系。方法选取2015年3月至2017年12月河北省张家口市张北县医院收治的109例骨关节炎患者作为观察组(OA组),选取年龄及性别相匹配的60例外伤致半月板或韧带损伤的手术患者作为对照组,检测两组患者的血清及骨关节液中的S100A2、IL-6、IL-8及VEGF水平,并分析上述指标与骨关节炎患者西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC指数)的相关性。结果 OA组的血清及膝关节液中S100A2、IL-6、IL-8及VEGF水平显著高于对照组,差异均有显著性(P<0.05);OA组血清及膝关节液中的S100A2、IL-6、IL-8及VEGF水平与WOMAC指数呈显著的正相关关系(P<0.05)。结论骨关节炎患者血清中的S100A2、IL-6、IL-8及VEGF水平显著升高,可为骨关节炎患者的病情评估提供参考。

桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用

目的观察桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用。方法采用氧-葡萄糖剥夺再恢复的方法诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)和PC12细胞共培养体系的缺糖缺氧再灌注损伤模型,并通过流式细胞仪检测PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,采用Western Blot法检测Bcl-2、Bax和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达水平。结果桃红四物汤促进PC12细胞的活力,抑制细胞凋亡和ROS的产生,抑制MDA的活性,增强SOD和GSH-Px的活性,上调HIF-1α和Bcl-2的表达并下调Bax的表达。结论桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抗氧化作用有关。

同型半胱氨酸硫内酯诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12途径对内皮细胞凋亡的影响

目的探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)是否通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)12凋亡途径影响内皮细胞生长。方法体外培养内皮细胞ECV304,先将0、50、100和200μmol/L的HTL干预细胞24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;随后以200μmol/L的HTL干预0 h、3 h、16 h和24 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,再以200μmol/L HTL刺激细胞为观察组(3、16和24 h),不加HTL刺激的细胞为对照组,2组分别采用免疫组织化学染色和Western Blot法检测Caspase-12、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达情况。结果100和200μmol/L的HTL作用细胞24 h,细胞活性分别为0.76±0.01、0.73±0.01;200μmol/L HTL对细胞的抑制作用具有时间依赖性,与0 h比较,3、16和24 h的细胞活性下降明显(0.87±0.04、0.83±0.04、0.78±0.01 vs 0.90±0.07,P<0.01)。与对照组比较,观察组Caspase-12蛋白、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);Bcl-2蛋白先增高后降低(P<0.01)。结论Caspase-12途径参与HTL致细胞凋亡的过程,Bcl-2也参与其调控。