HVEM基因干扰后非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭能力变化及其机制

目的 观察疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过Western blotting法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC`细胞系SKMES-1、H1299、H460、H226、H520中HVEM蛋白表达,筛选出HVEM蛋白表达升高最明显的H1299细胞进行后续实验。将H1299细胞分为si-NC组、si-HVEM-1组和si-HVEM-2组,分别用Lipofectamine 2000瞬时转染si-NC、siHVEM-1和si-HVEM-2干扰序列,转染48 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测HVEM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,si-HVEM-1组和si-HVEM-2组迁移、侵袭细胞数及HVEM mRNA、蛋白相对表达量均减少,且si-HVEM-2组减少更明显(P均<0.05)。与si-NC组比较,siHVEM-1和si-HVEM-2组E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量均升高,N-cadherin、Vimentin、β-catenin mRNA及蛋白相对表达量均降低,si-HVEM-2组E-cadherin、Vimentin、β-catenin mRNA相对表达量及Vimentin、β-catenin蛋白相对表达量变化更明显(P均<0.05)。结论 干扰HVEM基因会降低NSCLC细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化而抑制上皮—间质转化的发生有关。

香烟烟雾提取物对人支气管上皮细胞中LIGHT及其受体基因表达的影响

目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对人支气管上皮细胞16HBE中肿瘤坏死因子超家族成员14(LIGHT)及其受体LTβR和HVEM基因表达的影响。方法将体外培养的16HBE细胞分为干预组和对照组,干预组分别加1%、2%、3%、4%、5%CSE培养48 h,或以3%CSE分别培养6、12、24、36、48 h;对照组加同样体积的无血清DMEM处理。收集对照组和干预组不同浓度和不同作用时点的细胞,采用real-time PCR法检测LIGHT、LTβR、HVEM mRNA。结果与对照组比较,干预组CSE作用16HBE细胞48 h后LIGHT LTβR mRNA表达升高,分别于3%~5%、2%~5%CSE时差异有统计学意义(P均<0.05);干预组1%~4%CSE作用16HBE细胞48 h后HVEM mRNA表达升高(P均<0.05),3%CSE时到达峰值,5%CSE时HVEM mRNA表达较对照组降低(P<0.05)。与对照组比较,3%CSE作用16HBE细胞后各时点LIGHT、LTβR mRNA表达逐渐升高,分别于36、48 h和24、36、48 h时差异有统计学意义(P均<0.05);3%CSE作用16HBE细胞48 h时HVEM mRNA表达升高(P<0.01),其余时点表达变化不显著。结论随着CSE浓度升高和作用时间延长,可引起16HBE细胞LIGHT、LTβR、HVEM基因表达的改变。