红花注射液在大耳兔体内药动参数的测定

目的:测定红花注射液的体内药动学参数。方法:高效液相色谱法测量大耳免静脉滴注试药后不同时间的血药浓度,通过药物代谢动力学软件(3P98)进行分析研究。结果:获得静脉滴注红花注射液的主要成份羟基红花黄色素A(HSYA)的药物动力学参数。结论:HSYA在大耳免体内呈现开放二室动力学模型特征。

羟基红花黄色素A对局灶性脑缺血后大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellowA,HYSA)对大鼠局灶性脑缺血后脑组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法采用大脑中动脉线栓法造成大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测大鼠脑组织中iNOS的表达,并观察了对大鼠行为学和脑组织梗死面积的影响。结果HYSA高、中剂量能明显抑制脑缺血后而高度表达的iNOS量,同时减轻大鼠脑梗死面积和神经功能障碍。结论HYSA能下调脑缺血所致iNOS的异常表达,这可能是其治疗脑缺血性脑血管疾病的机制之一。

红花黄色素对内皮细胞增殖及凋亡的保护作用

目的通过LPC诱导建立体外再狭窄内皮细胞模型并探讨红花黄色素对对血管内皮细胞的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为:(1)正常对照组,(2)溶血卵磷脂(LPC)组,(3)低浓度红花黄色素组(50 mg/L),(4)高浓度红花黄色素组组(100 mg/L)。分别观测内皮细胞增殖、凋亡及上清液一氧化氮(NO)浓度的的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,降低NO浓度。红花黄色素干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增殖增强,细胞凋亡减少,NO浓度升高。结论红花黄色素可改善LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增殖增强,凋亡减少,升高NO浓度。

氮磷钾配施对红花产量及其有效成分在器官中分配的影响

于2018—2019年在河南科技学院试验田,以百农红花1号为材料,设计氮、磷、钾三因素和无肥(N0、P0、K0)、低肥(N1、P1、K1)、中肥(N2、P2、K2)、高肥(N3、P3、K3)四水平试验,以T1(N0P0K0)为对照,T2(N0P2K2)、T3(N1P2K2)、T4(N2P2K2)、T5(N3P2K2)、T6(N2P0K2)、T7(N2P1K2)、T8(N2P3K2)、T9(N2P2K0)、T10(N2P2K1)、T11(N2P2K3)为不同配施水平,共11个处理,研究氮、磷、钾肥用量及配比对红花产量的影响,探讨氮、磷、钾不同用量及配比下红花生育期各器官中有效成分分配规律。结果表明:红花花产量随氮肥用量的增加而增加,以T5最高,与T1相比增加59.44%,随磷肥和钾肥用量的增加呈先上升后下降趋势,均以T4最大,与T1相比增加42.87%;红花种子产量随氮、磷、钾肥用量的增加呈先上升后下降的趋势,均以T4最高,与T1相比增加116.52%。氮、磷、钾肥不同用量及配比对红花生育期各器官中黄酮含量影响有相同规律,从苗期到成熟期,叶和茎黄酮含量均表现为先下降后上升的趋势,根中黄酮含量逐渐增加,红花营养器官中黄酮含量均表现为叶>茎>根;氮和钾抑制了营养器官黄酮向花中的分配与累积,磷促进了红花黄酮向花中分配与累积,单株花黄酮累积量以T9最高,其次为T4,花中黄酮累积量占单株黄酮累积量的比例以T3最高,其次是T2,花中有效成分羟基红花黄色素A以无氮、低磷、低钾时含量相对较高,山奈素含量与氮、磷、钾用量及配比无关;氮、磷、钾促进了种子内黄酮的分配与累积,以T4表现较好。综合考虑产量性状和品质,红花生产中氮、磷、钾用量及配比以T4(N 225 kg·hm^(-2),P 2 O 5150 kg·hm^(-2),K 2 O 150 kg·hm^(-2))表现最佳。

采收时期和干燥方式对新乡红花品质的影响

为了更好指导新乡红花大田生产,提高红花品质,探讨红花最佳采收期和干燥方式,以SD-1和BH-1为试验材料,以花蕾期红花开放程度、盛花期同一天不同采摘时间和花的不同干燥方式为研究对象,检测红花有效成分黄酮、羟基红花黄色素A、多糖含量变化.结果表明:不同采收时期对红花有效成分影响较大,红花黄酮含量变化为:盛花期>衰落期>始花期;羟基红花黄色素A和多糖含量变化均为:盛花期>始花期>衰落期.盛花期以6:00-8:00、8:00-10:00、16:00-18:00采收,花中黄酮、羟基红花黄色素A含量相对较高,以8:00-10:00、16:00-18:00采收,多糖含量相对较高;阴干处理花中黄酮、羟基红花黄色素A、多糖含量最高,其次为40℃烘干,红花黄酮、羟基红花黄色素A、多糖含量随烘干温度的升高均呈下降趋势,晒干严重影响红花有效成分含量.因此,新乡红花最佳采收时期为盛花期6:00-10:00或16:00-18:00,干燥方式以阴干或40℃烘干为宜.

羟基红花黄色素A对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用

目的探讨激素性股骨头缺血坏死的发病机制及羟基红花黄色素A(HYSA)防治该病的作用机制。方法 30天龄SD大鼠18只,体重(150±20)g。6只用于骨髓间充质干细胞取材培养、鉴定、MTT试验;12只用于骨髓间充质干细胞取材培养、干预。大剂量激素诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予不同浓度HYSA进行干预。6 d后予透射电镜、脂肪细胞油红"O"染色,检测细胞内甘油三酯。结果 HYSA可对抗激素诱导下的BMSCs甘油三酯含量的增加,光镜、电镜下见HSYA各组成脂情况明显受到抑制。结论 HYSA防治激素性股骨头缺血坏死的机制不仅是改善股骨头的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关。

羟基红花黄色素A对肝纤维化大鼠血清学指标及脂质过氧化的影响

目的观察羟基红花黄色素A(HYSA)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化(HF)大鼠血清学指标及脂质过氧化的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只,体重(180±30)g,随机分为A、B、C、D、E组,A组(正常对照组)、B组(HF模型组)、C组(红花组)、D组(HYSA组)、E(秋水仙碱组),除A组外,其余各组采用CCl4灌胃,诱导大鼠肝纤维化模型;造模第2周起,腹腔注射给予相应药物,8w后处死大鼠取血清及肝组织标本,光景下观察肝组织结构变化及肝纤维化程度,放射免疫技术检测测定血清中ALT、AST、ALB含量,分光光度计检测肝组织匀浆中SOD和MDA的含量。结果与B组比较,C、D、E组大鼠血清中ALT、AST活性显著降低,ALB含量显著升高,肝细胞变性、坏死明显减少,肝组织纤维化程度明显减轻,肝组织MDA含量显著降低,SOD活性显著升高;与C组比较,D组的肝纤维化程度显著减轻,两者比较有统计学意义(P<0.05)。结论 HYSA作为红花抗肝纤维化的主要有效作用成分,能够保护肝组织,减轻肝细胞水肿程度,减轻其纤维化程度,并能促进损伤肝组织的修复,且其抗肝纤维化作用机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。

尿液中羟基红花黄色素A的含量测定

目的:建立高效液相色谱法用于测定人尿液中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用乙腈∶0.2%磷酸水溶液(20∶80 v/v)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为400 nm。结果:羟基红花黄色素A的线性范围为0.58～57.69μg/mL,羟基红花黄色素A在尿中3个浓度的绝对回收率分别平均为100.3%、100.8%、100.9%。结论:本方法简单快速,准确灵敏,重现性好,适用于羟基红花黄色素A的尿中药物浓度测定。

羟基红花黄色素A对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响

目的观察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HYSA)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)大鼠肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只,体质量(180±30)g,采用CCl4灌胃,制作大鼠肝纤维化模型。将大鼠随机分为A组(正常对照组)、B组(HF模型组)、C组(红花组)、D组(HYSA组)、E(秋水仙碱组),各组从CCl4造模第2周起,腹腔注射给药,8周后取材,HE染色,镜下观察肝组织形态学改变,免疫组化SP法检测TGF-β1在大鼠肝脏中的表达。结果大鼠肝组织HE染色C、D组可见肝细胞水肿较小、体积增加不明显,胞浆疏松化轻,肝纤维化程度明显低于B组,和E组比较无明显差异;免疫组化染色显示C、D组大鼠肝脏中TGF-β1阳性细胞数与E组相近,明显低于B组。结论 HYSA能够保护肝组织,减轻肝细胞水肿程度,抑制其纤维化程度,促进损伤肝组织的修复。

IAR-HPLC法预测红花注射液的稳定性

目的:测定红花注射液的有效期。方法:将样品在不同的温度下进行恒温加速试验,采用高效液相色谱法测定含量,初均速法预测样品有效期。结果:初均速-HPLC法预测红花注射液的稳定性方法可靠,数据准确。结论:红花注射液的有效期为t0.95=13 mon。

Research on immunosensor based on porous silicon

Porous silicon is functionalized using thermal oxidation and silanization. The HYSA antibodies are immobilized to the porous surface in this paper. The changes in the reflection spectrum and photoluminescence spectrum are investigated when BSA are attached to the PS surface. The result shows that the luminescence peak of PS disappears. After the antigen-antibody reaction,the higher light emission is observed and the reflection spectrum also red shifts. Therefore,this research lays a foundation for the development of sensitive label-free optical immunosensor.

不同生育期新疆红花品质分析研究

目的分析不同生育期下新疆红花的含量,探讨新疆红花不同生育期对品质的影响。方法分别采取新红4号、裕民无刺、吉红1号不同品种在7月13日、7月22日、7月24日、8月1日等不同时期的样品,用HPLC法测定3个品种在不同时期、3个品种在同一时期的羟基红花黄色素A含量及山奈素含量;用紫外分光法测定测定3个品种在不同时期、3个品种在同一时期的总黄酮含量。结果新疆红花不同生育期中羟基红花黄色素A的含有量为1.01%～1.65%,山柰素的含有量为0.0881%～0.1514%,总黄酮的含有量为0.2731%~1.20%。结论新疆红花在不同生育期中羟基红花黄色素A、山柰素及总黄酮的含有量有差异,其中采摘于8月1日的含有量最高,是红花优质高产的适宜采摘时期。

基于VEGF/p38MAPK研究羟基红花黄色素A对过氧化氢诱导人肝细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人肝细胞LO2氧化损伤的保护作用及其机制。方法利用H_(2)O_(2)诱导并建立了LO2细胞氧化损伤模型。将细胞分为对照组(Control group,CG)、H_(2)O_(2)损伤模型组(Model group,MG)、HYSA(0.125,0.25,0.5,1mg·mL^(-1))干预组(MG+0.125,0.25,0.5,1mg·mL^(-1)HYSA)。分别利用MTT法、流式细胞术测定了细胞活力和凋亡程度;利用ELISA测定细胞内ROS、LDH、SOD、GSH-Px、MDA和CAT的活性及含量;Hoechst染色进一步观察细胞核凋亡状态;通过qRT-PCR技术测定细胞内VEGF、p38MAPK和凋亡相关蛋白的mRNA表达量;采用Western blotting法检测凋亡相关因子及VEGF/p38MAPK通路的蛋白表达。结果成功建立由H_(2)O_(2)所诱导的人肝细胞LO2损害模型;与MG比较,在0.125、0.25、0.5、1mg·mL^(-1)HYSA干预组细胞中LDH、MDA和ROS的活性和含量均明显下降,SOD、GSH-Px和CAT活性均明显增强,HYSA可明显抑制细胞凋亡并下调VEGF、p38MAPK/p-p38MAPK蛋白表达。结论HYSA可缓解H_(2)O_(2)对人肝LO2细胞造成的损伤,对细胞内氧化指标产生显著影响,有明显的氧化损伤保护作用,机制与VEGF/p38MAPK通路有关,可为HYSA的临床应用提供支持。

AHP-CRITIC法结合正交设计优化红黄丹酊提取工艺

目的 优选红黄丹酊复方的制备工艺。方法 以羟基红花黄色素A(HYSA)、大黄游离蒽醌的提取率和总固体得率作为考察指标,通过层次分析法(AHP)、基于指标相关性确定权重的方法(CRITIC)及AHP-CRITIC混合加权法对各指标的权重系数赋值,应用综合评分法对正交试验结果进行分析,优选红黄丹酊剂的的制备工艺参数。结果 AHP-CRITIC混合加权法科学合理,优选出的最佳制备工艺为4倍量50%乙醇浸渍10 d。结论 优选的制备工艺简便、稳定、成本低,可用于红黄丹酊的制备。

丹红注射液与羟基红花黄色素A对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β、TNF-α和Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:观察丹红注射液和羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和Caspase-3 mRNA表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红注射液治疗组(分高、中、低3个剂量组)、HSYA治疗组。应用线栓法建立大鼠中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型;利用实时荧光定量PCR技术分析I/R组织中IL-1β、TNF-α和Caspase-3 mRNA表达的变化,以β-actin基因作为内参,采用△△Ct法计算mRNA相对表达水平。结果:与假手术组比较,模型组中IL-1β、TNF-α和Caspase-3 mRNA表达水平显著上调(P<0.01),而丹红注射液各剂量组对上述基因的表达具有明显抑制作用,且抑制效果随剂量的增大而增加。另外使用HSYA(2mg/kg)治疗同样能明显抑制IL-1β、TNF-α和Caspase-3的mRNA表达水平。结论:丹红注射液和HSYA均能明显抑制大鼠I/R脑组织中IL-1β、TNF-α和Caspase-3基因的过度表达。

丹红注射液主要有效成分配伍在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学研究

目的应用总量统计矩法研究丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和羟基红花黄色素A（HYSA）正交配伍对总量药动学参数的影响，研究复方内在配伍规律。方法以改良的线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，采用正交试验法L9（3^4）组成丹红注射液主要有效成分（丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、HYSA）用量配比不同的9个组方，供大鼠尾静脉iv给药，进行药动学研究。用DAS3．2．6软件以非房室模型法拟合药动学参数，并进一步运用总量统计矩法计算总量药动学参数。应用正交分析法评价配伍对总量药动学参数的影响。结果丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和HYSA正交配伍对总量统计矩各参数影响不一，总量零阶矩AUC。以丹参素水平的影响最大，且影响显著（P〈0．05），最优组合为A3B3C2D1；总量一阶矩MRTt以HYSA水平影响最大，最优组合为A1B3C1D1。结论总量统计矩可整合丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B、HYSA的药动学参数，表达各组方的整体药动学行为，中药复方多成分药动学可采用总量统计矩法进行研究，可为中药复方内在配伍规律研究提供方法。

丹红注射液中主要有效成分在脑缺血大鼠体内药动学研究

目的建立同时测定给予丹红注射液主要组分后脑缺血再灌注损伤大鼠血浆中丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和羟基红花黄色素A（HYSA）质量浓度的HPLC-DAD方法,为其药动学研究提供准确可靠的方法。方法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,iv丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和HYSA后,收集血样,采用Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长280 nm用于检测丹参素、原儿茶酸、香草酸和丹酚酸B,403 nm用于检测HYSA,柱温为30℃,内标法定量。结果原儿茶醛在MCAO大鼠体内迅速被代谢,3 min即可检测到其代谢产物原儿茶酸和香草酸。丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的进样浓度分别在0.35-140 mg/L（R2=0.999 8）、0.15-60 mg/L（R2=0.999 0）、0.05-20 mg/L（R2=0.998 8）、0.25-100 mg/L（R2=0.999 6）、0.075-30 mg/L（R2=0.998 5）呈良好线性关系,平均回收率均在80%-120%,日内、日间RSD均小于10%,稳定性符合体内药物分析要求。大鼠iv给予丹红注射液主要有效成分后丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的主要药动学参数：AUC0-∞分别为（1143.862±230.840）、（427.024±59.293）、（135.785±47.631）、（418.631±66.242）、（288.788±87.809）mg·min/L,t1/2z分别为（71.496±29.067）、（82.379±26.279）、（40.331±6.006）、（125.164±59.709）、（177.577±112.836）min。结论所建立的HPLC-DAD分析方法专属性强,各成分分离度好,分析时长适宜,操作简单快速,可用于MCAO大鼠体内丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B、HYSA的同时测定及复方丹红注射液的药动学研究。

羟基红花黄色素A对LPS诱导的羊子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用

为了探讨羟基红花黄色素A(HYSA)对LPS诱导的羊子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用,用50 mg/L LPS作用细胞12 h,构建子宫内膜上皮细胞炎性反应模型。分别用60,80,100 mg/L HYSA作用子宫内膜上皮细胞炎性反应模型12 h,通过ELISA检测细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,用Western blot检测p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果表明,LPS处理后12 h,TNF-α、IL-1β和IL-6的含量与对照组相比显著增加(P<0.05),p-p38、p-JNK蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01)。HYSA作用后12 h,80 mg/L HYSA处理组IL-1β和IL-6的含量显著降低(P<0.05);60,80,100 mg/L HYSA处理组TNF-α的含量极显著降低(P<0.01)。HYSA作用后12 h,60,80,100 mg/L处理组p-JNK蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01);80,100 mg/L处理组p-p38蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01)。由上可知,HYSA可以降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量及p-p38、p-JNK蛋白的相对表达量,对羊子宫内膜上皮细胞炎性反应有抑制作用,其最佳质量浓度为80 mg/L。