艰难梭菌A毒素诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞DNA双链损伤研究

研究了艰难梭菌A毒素(Clostridium difficile toxin A,TcdA)诱导人黏液表皮样癌细胞(MEC-1)DNA双链损伤的机制。采用MTT法、中性彗星电泳法与免疫荧光法三联实验,分别检测TcdA对MEC-1细胞增殖抑制的影响、TcdA对MEC-1细胞造成DNA双链损伤程度以及TcdA引起MEC-1细胞DNA双链断裂相关蛋白γH_(2)AX、pATM表达的影响。结果表明:TcdA(50~800μmol·L^(-1))抑制了MEC-1细胞的生长且存在时间和浓度依赖特点;TcdA作用MEC-1细胞24 h、100~400μmol·L^(-1)浓度曲线组和TcdA浓度为800μmol·L^(-1)、作用MEC-1细胞3~24 h时间曲线组,MEC-1彗星细胞的尾长、尾部DNA、尾矩和Olive尾矩呈增加趋势,头部DNA百分比减少,800μmol·L^(-1) TcdA作用MEC-1细胞24 h,上述参数均有统计学意义;100~800μmol·L^(-1) TcdA作用MEC-1细胞24 h浓度曲线组和TcdA浓度为800μmol·L^(-1)、作用MEC-1细胞3~48 h时间曲线组、γH_(2)AX、pATM阳性细胞率基本呈增加趋势。艰难梭菌A毒素杀伤肿瘤细胞的机制是诱导肿瘤细胞的DNA双链断裂损伤,其可能与抑制MEC-1细胞增殖,影响细胞γH_(2)AX、pATM的表达水平有关。

过氧化氢体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞氧化损伤模型的构建和分析

为给抗氧化损伤药物的开发利用和抗氧化损伤机制的研究提供理论依据和实验基础,本方法构建了过氧化氢(H_(2)O_(2))体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)经典的氧化应激损伤模型。应用贴壁细胞培养法培养NIH-3T3细胞,采用不同浓度的H_(2)O_(2)处理NIH-3T3细胞不同时间模拟氧化损伤模型,通过CCK-8法观察H_(2)O_(2)引起NIH-3T3细胞半数致死率浓度(IC50)和时间;检测丙二醛(MDA)以及一氧化氮(NO)的表达水平;免疫荧光法观察H_(2)O_(2)诱导NIH-3T3细胞氧化损伤后细胞核内组蛋白γH_(2)AX的表达变化。通过与对照组进行分析比较,300μM H_(2)O_(2)处理NIH-3T3细胞2 h后,NIH-3T3细胞死亡率最接近50%。此时,NIH-3T3细胞内MDA和NO水平显著增高,细胞核中组蛋白γH_(2)AX表达水平也明显提高。研究表明,H_(2)O_(2)体外诱导NIH-3T3细胞氧化应激模型的最适条件:300μM H_(2)O_(2)处理2 h。

电离辐射对断乳期小鼠脾脏发育的影响研究

为探讨电离辐射对断乳期小鼠脾脏发育及其机制的影响,将14只21日龄C57小鼠随机分为对照组和照射组,每组7只,照射组接受5 Gy的急性X射线全身照射,于照射后7天取血并处死小鼠取材。称取小鼠体重及脾重,生化法检测小鼠外周血象的变化,免疫组织化学和Western blot法检测小鼠脾脏中磷酸化H_(2)AX蛋白的表达。结果表明,与对照组相比,照射组小鼠的体重及脾重均明显降低(p<0.01),外周血中白细胞、血小板、红细胞数量以及血红蛋白的含量均减少(p<0.05,p<0.01),脾脏中磷酸化H_(2)AX蛋白的表达降低(p<0.05,p<0.01)。实验结果证明断乳期小鼠受到X射线照射可导致小鼠脾脏发育抑制及其功能异常,这可能与辐射抑制H_(2)AX磷酸化表达从而降低DNA修复能力相关。