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佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响
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作者 高萍 王永军 柳惠图 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期62-65,共4页
目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测... 目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测PMA(100μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响。结果经PMA(100μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD。结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达。 展开更多
关键词 佛波酯 ha—ras基因 ha—ras基因启动子与结合蛋白 人胃癌细胞BGC-823 凝胶电泳移动检测 DNA免疫印迹法
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C57-ras转基因小鼠模型的建立 被引量:11
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作者 周舒雅 左琴 +7 位作者 刘甦苏 胡培丽 吕建军 杨艳伟 张頔 李保文 岳秉飞 范昌发 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1928-1934,共7页
目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型。方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL... 目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型。方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核。通过PCR,real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达,并结合病理切片分析自发肿瘤的发生。结果:人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6%,共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传,建成C57-ras转基因小鼠系;C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致;3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生。结论:本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型。该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A),这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠,也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础。 展开更多
关键词 C57-ras基因小鼠 人类原癌基因 c—ha—ras基因 致癌性实验 临床前安全评价 自发肿瘤
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AEG-1在恶性肿瘤中的研究进展 被引量:2
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作者 王芬 柯尊富 王连唐 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期1195-1198,共4页
星形胶质细胞升高基因(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)最初通过快速消减杂交技术(rapid subtraction hybridization,RaSH)鉴定发现,在HIV-1或肿瘤坏死因子-α诱导的原代人胎脑星形胶质细胞(primary human fetal astrocvtes,PHFA)中... 星形胶质细胞升高基因(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)最初通过快速消减杂交技术(rapid subtraction hybridization,RaSH)鉴定发现,在HIV-1或肿瘤坏死因子-α诱导的原代人胎脑星形胶质细胞(primary human fetal astrocvtes,PHFA)中其表达升高。AEG-1的cDNA由3 611个碱基组成,定位于8q22,分子量64kDa,等电点是9.33。研究发现,AEG-1定位于核周和类内质网结构区。AEG-1是Ha-ras和c-myc的下游靶分子。此外,近几年研究证实,AEG-1的致癌作用与激活PI3K-Akt和NF-κB信号通路有关。AEG-1最初在2002年被成功克隆,目前已被证实在多种器官的致癌作用过程中发挥关键作用。AEG-1在神经母细胞瘤、乳腺癌、肝癌和前列腺癌等多种恶性肿瘤中高表达,且与患者的生存率负相关。在体内、外通过提高或抑制AEG-1表达的研究进一步探明AEG-1调节细胞的多种生理、病理过程,包括增殖、侵袭、转移、血管新生和基因表达等。虽然AEG-1的致癌作用已经得到证实,但它作为一个癌基因的潜在功能和作用机制需要进一步探讨。本文就AEG-1与恶性肿瘤的关系做一综述,旨在以AEG-1为合理的靶点介入肿瘤治疗提供新的视野。 展开更多
关键词 星形胶质细胞升高基因ha—ras c—myc核因ff-KB
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