补气活血生发酊促进毛发生长及HaCat细胞增殖实验研究

目的:研究补气活血生发酊促进小鼠毛发生长及提高人永生化角质形成细胞(HaCat细胞)存活率的作用。方法:小鼠35只建立硫化钠脱毛模型,分为50%乙醇、米诺地尔搽剂20mg/ml、补气活血生发酊生药200mg/ml、补气活血生发酊生药100mg/ml、补气活血生发酊生药50mg/ml组,每组7只,连续给药30d,2次/d。应用小鼠毛发生长情况评分标准对小鼠给药第10、14、18、21、24、27、30d毛发生长情况进行评分;给药30d后,处死小鼠,从每只小鼠脱毛区域随机取新生毛发10根,测量其长度和重量,并计算其均值;取背部定点皮肤(面积约2cm×2cm),于光镜下观察小鼠皮肤毛囊生长情况并统计毛囊数量;采用CCK-8法评价补气活血生发酊对HaCat细胞存活率的影响。结果:与50%乙醇组比较,补气活血生发酊生药200mg/ml、100mg/ml、50mg/ml组小鼠的毛发生长平均得分、平均重量及平均毛长均显著增高,补气活血生发酊生药200mg/ml、100mg/ml组毛囊数量显著增高;与培养基组比较,补气活血生发酊浸膏1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml剂量组对HaCat细胞存活率有显著提高。结论:补气活血生发酊具有促进毛发生长的作用,且作用机制可能与其提高角质形成细胞存活率有关。

低浓度过氧化氢对HaCat细胞增殖和大鼠创面愈合的作用与机制研究

目的探讨低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))对创面愈合的促进作用及其可能的作用机制。方法建立大鼠全层皮肤缺损创面模型,将大鼠分为对照组(使用生理盐水)、高、低浓度H_(2)O_(2)组(分别使用3%,0.01%H_(2)O_(2)干预)。选取第0、3、6、9、12、15、18天共7个时间点评估创面愈合率,并在第3、6、9天对创面组织样本进行组织病理检测。使用CCK-8法探索了不同浓度的H2O2对HaCat细胞增殖的影响。将细胞分为对照组、35 μmol/L H_(2)O_(2)组、35 μmol/L H_(2)O_(2)+ML385组3组[使用5 μmol/L的核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂ML385预处理]检测各组的细胞增殖活性,并使用免疫荧光法及流式细胞分析技术分别检测各组细胞内磷酸化Nrf2(pNrf2)的核转位和活性氧(ROS)的水平。重复观测的创面愈合情况使用重复测量方差分析,多组间比较采用单因素方差分析,多个实验组与一个对照组间的比较采用Dunnett-t检验。结果与对照组相比,0.01%H_(2)O_(2)组在3、6、9、12、15、18d愈合率升高,使创面炎症期提前且缩短,3%H_(2)O_(2)组愈合率降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。在细胞实验中,与对照组相比,25.92、43.2 μmol/L H_(2)O_(2)均可促进细胞增殖(吸光度:1.30±0.04比1.52±0.06、1.49±0.07),差异有统计学意义(P均<0.05),故选取35 μmol/L H_(2)O_(2)进行接下来的实验。与35 μmol/L H_(2)O_(2)组相比,对照组和35 μmol/LH_(2)O_(2)+ML385组HaCat细胞的增殖活性(吸光度:1.47±0.05比1.30±0.05、1.23±0.06),pNrf2核转位(荧光强度:30.81±14.31比9.11±4.45、13.61±6.83)降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,35 μmol/L H_(2)O_(2)组和35 μmol/L H_(2)O_(2)+ML385组ROS水平升高(平均荧光强度:593.56±19.98比621.56±32.08、701.44±54.04)差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度H2O2可通过提高细胞增殖活性促进创面愈合,且该过程受Nrf2调节。