槐提取物和维生素C组合物对紫外照射诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

本研究旨在探讨槐提取物和维生素C(Vitamin C,V_(C))对紫外线照射引起的HaCaT细胞光损伤的保护作用。通过体外培养HaCaT细胞并将其分为不同组别:对照组(未接受紫外辐照,无槐提取物、V_(C)或二者组合物处理)、紫外线辐射组、125μg/mL槐提取物(接受紫外辐照及槐提取物处理)、125μg/mL维生素C(接受紫外辐照及维生素C处理)以及125μg/mL组合物组(接受紫外辐照及组合物处理,槐提取物和V_(C)质量比为1:1)。采用荧光染色和酶标仪检测技术来评估槐提取物、V_(C)及二者组合物对紫外照射引起的HaCaT细胞产生的活性氧物质(ROS)和线粒体ROS的抑制率。利用免疫荧光染色和酶联免疫吸附法检测槐提取物、V_(C)和组合物对紫外照射引起的HaCaT细胞中环丁烷嘧啶二聚体(Cyclobutane pyrimidine dimers,CPDs)和细胞炎症因子IL-6的表达水平。结果显示,槐提取物、V_(C)和组合物对UVA处理后HaCaT细胞生成的总ROS抑制率分别为38.23%±9.23%、27.20%±6.87%及64.13%±4.08%,与单独使用槐提取物或V_(C)处理相比,组合物显著提高总ROS抑制率(P<0.01)。槐提取物、V_(C)和组合物对线粒体ROS(Mitochondrial DNA,mtROS)的抑制率分别为50.29%±4.92%、38.81%±8.66%及84.74%±3.68%,与单独使用槐提取物或V_(C)处理相比,组合物极显著提高mtROS抑制率(P<0.01)。此外,在UVB照射后,槐提取物、V_(C)及组合物可极显著减少CPDs的生成(P<0.01),这种效应在组合物组效果更为显著(与槐提取物组比较P<0.05;与V_(C)组比较P<0.01)。同时,槐提取物和组合物显著降低UVA照射后炎症因子IL-6的分泌(P<0.01;P<0.05),表明槐提取物及组合物具有抗炎作用。本研究结果表明槐提取物和维生素C组合物能减轻紫外线引起的氧化应激损伤和炎症反应,为未来体内研究和开发具有健康益处的槐提取物和V_(C)组合物提供实验支持。

PIEZO1影响HaCaT细胞的趋电性迁移

目的伤口中心产生的内源性电场是指导细胞定向迁移促进伤口愈合的重要因子。PIEZO1是机械门控阳离子通道家族成员之一,它参与细胞迁移,影响细胞的趋化迁移,并且受到电压的调节,在伤口愈合过程中发挥重要作用。但PIEZO1是否参与影响电场指导的细胞定向迁移过程尚不清晰,本文以HaCaT细胞为模型探讨PIEZO1及其下游相关蛋白质对细胞趋电性迁移的影响。方法应用活细胞工作站追踪HaCaT细胞在微直流电场中的迁移,使用抑制剂及RNAi技术调控PIEZO1功能和表达,研究PIEZO1对于细胞趋电性迁移的影响;用蛋白质印迹(Western blot)检验细胞的整合素(integrin)β1与FAK磷酸化水平在电场作用下的变化情况,探讨PIEZO1与integrinβ1及FAK等对电场信号的响应及细胞趋电性迁移的影响。结果PIEZO1广谱抑制剂钌红、GsMTx4和RNAi处理显著抑制了HaCaT细胞向正极趋电性迁移的能力;电场和GsMTx4单独作用升高FAK磷酸化和integrinβ1表达,GsMTx4阻止电场进一步升高FAK的磷酸化水平和integrinβ1表达;siRNA干扰PIEZO1表达后显著下调FAK的磷酸化水平,并且电场对FAK磷酸化和integrinβ1表达的促进作用受到抑制;Integrinβ1和FAK的抑制剂使HaCaT细胞的趋电性迁移能力均显著降低。结论PIEZO1参与HaCaT细胞的趋电性迁移,是影响HaCaT细胞趋电性迁移的重要分子之一;抑制integrinβ1和FAK会影响HaCaT细胞的电性迁移;电场信号可能通过PIEZO1介导的信号通路调控integrinβ1的表达和FAK的活化进而影响细胞趋电性迁移。

长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响

目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。

牙髓干细胞条件培养基联合LDH纳米材料抗HaCaT细胞光老化的作用研究

目的 探究牙髓干细胞条件培养基(DPSCs-CM)联合层状双金属氢氧化物(LDH)纳米材料对光老化HaCaT细胞的作用。方法 制备DPSCs-CM并合成LDH纳米材料。设置对照组[无预处理,无中波紫外线(UVB)照射]、模型组(无预处理,予UVB照射)、DPSCs-CM组(用含DPSCs-CM的DMEM完全培养基预处理24 h后进行UVB照射)、LDH组(用含LDH的DMEM完全培养基预处理24 h后进行UVB照射)和DPSCs-CM+LDH组(用含有等比混合的DPSCs-CM和LDH的DMEM完全培养基预处理24 h后进行UVB照射)。检测各组HaCaT细胞的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及活性氧(ROS)水平。采用细胞划痕实验检测各组HaCaT细胞的迁移能力。采用Western blot法检测各组HaCaT细胞中p53蛋白和p16蛋白的表达水平。结果 LDH纳米材料的平均粒径为65.52 nm,分散度系数(PDI)为0.109,Zeta电位为38.1 mV,表明LDH纳米材料的细胞毒性较低,纳米粒子粒径分布均一,分散性和稳定性良好。与模型组相比,DPSCs-CM组、LDH组和DPSCs-CM+LDH组HaCaT细胞的ROS水平和MDA含量降低,SOD活力升高,细胞迁移能力提高,细胞内p53蛋白和p16蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),且以DPSCs-CM+LDH组的干预效果最佳。结论 DPSCs-CM联合LDH纳米材料预处理可有效抗HaCaT细胞光老化,其效果优于单一DPSCs-CM和LDH纳米材料干预,为皮肤光老化治疗方法的研发提供了参考。

IL-10调控HaCaT细胞增殖及分化的分子机制

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖影响和对氯化钙(CaCl 2)诱导的角质形成细胞分化标志物的表达影响及其可能的分子机制。方法以不同浓度IL-10(0、3、10、30 ng/ml)处理HaCaT细胞不同时间(0、24、48、72 h),MTS分析细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;IL-10(终浓度为10 ng/ml)预处理HaCaT 1 h,加入或不加CaCl 2(终浓度为1.2 mmol/L)培养24、48、72 h,Western blot检测IL-10对HaCaT分化标志物表达影响;丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)特异性抑制剂PD98059及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)特异性抑制剂LY294002预处理HaCaT细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测IL-10对HaCaT细胞分化标志物(Keratin1、Keratin5、Involucrin)表达影响。结果MTS结果显示,在72 h内,IL-10(30 ng/ml和较低浓度)对HaCaT细胞增殖无影响;流式细胞分析结果提示IL-10不影响HaCaT细胞周期进程。Western blot分析显示,IL-10上调HaCaT角质形成细胞角质细胞分化标志物Involucrin表达,而对Keratin1及Keratin5没有显著的影响。机制研究分析显示,IL-10能够活化ERK1/2和AKT,增加其磷酸化水平;RT-qPCR和Western blot结果显示PD98059及LY294002部分阻断IL-10诱导的Involucrin的表达。结论IL-10在一定浓度范围内不影响HaCaT的增殖;IL-10部分通过MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径上调HaCaT分化标志物Involucrin表达。

LB对IL-17A诱导HaCaT细胞增殖和细胞因子影响

目的探讨龙血素B(LB)对白细胞介素-17(IL-17A)诱导的HaCaT细胞增殖和细胞因子分泌的影响及其机制。方法采用噻唑蓝检测细胞增殖;酶联免疫吸附检测IL-6和IL-23表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测趋化因子(CXCL1、CXCL12、CXCL20)mRNA表达量,蛋白免疫印迹方法检测Janus激酶-信号转导子及转录激活子(JAK-STAT)通路相关蛋白Janus激酶1(JAK1)、磷酸化信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)的表达。结果与对照组相比,IL-17A组的吸光度值(A值)及IL-6、IL-23和CXCL1、CXCL12和CXCL20 mRNA表达明显增加(F=34.76~135.70,P<0.001),JAK1、p-STAT3和STAT3蛋白表达上调(F=53.91~105.70,P<0.001)。IL-17A可以剂量依赖性地降低HaCaT细胞的A值,IL-6、IL-23,CXCL1、CXCL12、CXCL20 mRNA含量及JAK1、p-STAT3、STAT3蛋白量(F=22.55~88.41,P<0.001)。与IL-17A+LB-H组相比,IL-17A+LB-H+AG490组的A值、IL-6、IL-23和CXCL1、CXCL12、CXCL20 mRNA明显降低(t=4.73~8.40,P<0.001)。结论LB能抑制IL-17A诱导的HaCaT细胞增殖及相关细胞因子分泌,其作用机制可能与抑制JAK-STAT通路有关。

银屑病中滤泡性辅助性T细胞及IL-21对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探究寻常型银屑病患者外周血滤泡性辅助性T细胞及其主要功能性细胞因子IL-21在体外培养条件下对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法 选取15例寻常型银屑病患者作为试验组,同时纳入10位健康志愿者作为对照组。运用流式细胞技术分选出外周血CD4~+CXCR5~+的Tfh细胞,与HaCaT细胞以1∶1进行共培养。加入IL-21或IL-21中和抗体干预72 h后收集HaCaT细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,并运用流式细胞学技术检测HaCaT细胞周期及Ki-67表达特征。结果 IL-21对HaCaT细胞的增殖有促进作用(P <0.05),使G_0/G_1期HaCaT细胞减少、S期HaCaT细胞增多(P <0.05)。HaCaT细胞与Tfh细胞共培养时,银屑病组与健康对照组HaCaT细胞增殖活性均较空白对照组显著升高(P <0.000 1),且银屑病组较健康对照组促进作用更强(P <0.05);银屑病组与健康对照组中加入IL-21组均比加入IL-21中和抗体组的HaCaT细胞增殖活性高(P <0.05);此外,在银屑病组细胞共培养中,IL-21中和抗体组同单纯共培养组相比,可将HaCaT细胞阻滞于G_0/G_1期,减少S期细胞数量,进而抑制HaCaT细胞增殖活性(P <0.05)。结论 银屑病患者中Tfh细胞及其主要功能性细胞因子IL-21可促进角质形成细胞增殖,且中和IL-21会抑制这种促进作用。因此,Tfh细胞可能通过IL-21促进角质形成细胞增殖从而促进银屑病的发生发展。

裂叶独活精油成分分析及其对HaCat细胞辐射损伤的保护作用

目的采用GC/Q-TOF MS对裂叶独活精油进行成分定性分析并研究其对X射线照射的HaCaT细胞的损伤保护作用。方法应用水蒸气蒸馏法提取裂叶独活精油,采用GC/Q-TOF MS对其成分进行解析;采用CCK-8法检测细胞增殖活性探索裂叶独活精油的照射剂量、作用浓度和时间;细胞划痕实验检测细胞迁移;Real-time PCR法检测Notch1受体和Jagged1配体mRNA表达。结果共得到裂叶独活精油118个化学成分,其中含量较高的有3-苯基丙基环丁烷羧酸酯(9.06%)、十六烷酸(8.62%)、匙羹藤醇(7.76%)、氧化石竹烯(4.05%)、反式-橙花叔醇(3.99%)、2-(4-甲基苯基)2-丙醇(3.92%),主要为单萜、倍半萜、脂肪族和芳香族类化合物;裂叶独活精油能有效促进HaCaT细胞增殖、迁移,并上调Notch1受体和Jagged1配体mRNA表达。结论裂叶独活精油成分对辐射损伤的HaCaT细胞有防护作用,可能是通过激活Notch信号通路,上调HaCaT细胞相关受体与配体的表达,发挥其促增殖和迁移作用。

硫酸镍对HaCaT细胞增殖、凋亡及炎症表达的影响

目的探讨硫酸镍刺激对角质形成细胞增殖、凋亡及炎症表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同质量浓度的硫酸镍刺激HaCaT细胞12、24、36、48和72 h后细胞的增殖活力。采用Annexin V-Alexa Fluor 647/PI试剂盒检测不同质量浓度的硫酸镍刺激HaCaT细胞24和48 h后的细胞凋亡率。采用实时荧光定量PCR技术检测不同质量浓度的硫酸镍刺激HaCaT细胞24和48 h后,炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、胸腺间质淋巴生成素(TSLP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA的表达情况。结果与未处理的对照组相比,硫酸镍(100、200和300μg/mL)处理HaCaT细胞12、24、36、48和72 h后,细胞增殖能力受抑制且凋亡细胞比例明显升高。低质量浓度的硫酸镍(50μg/mL)处理时,随着时间的延长,细胞存活率呈现先下降后升高的趋势;高质量浓度的硫酸镍(100、200和300μg/mL)处理时,随着时间的延长,细胞存活率呈现下降的趋势。硫酸镍(50、100、200和300μg/mL)刺激HaCaT细胞24和48 h后,IL-1βmRNA表达降低(P<0.01),IL-6和TSLP的mRNA表达升高(P<0.01),TNF-αmRNA变化不明显(P>0.05)。结论高质量浓度的硫酸镍可抑制HaCaT细胞增殖,促进凋亡。硫酸镍刺激HaCaT细胞,可降低IL-1β的表达,增加TSLP和IL-6的表达。

西洋参果肉提取物对UVB辐射HaCaT细胞损伤保护作用

为探究西洋参果肉提取物对中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞损伤的保护作用,本研究以西洋参果肉为材料,经80%甲醇提取后用不同溶剂萃取得到3个组分,以DPPH自由基清除能力以及总抗氧化能力(ABTS)为考察指标,评价各组分抗氧化能力;采用MTT法筛选对UVB辐射HaCaT细胞损伤的保护作用,检测其MDA、SOD和GSH活力,筛选活性组分。试验结果表明,乙酸乙酯萃取层和水层抗氧化能力较强,但水层具有细胞毒性;正丁醇萃取层和乙酸乙酯萃取层均对UVB辐射HaCaT细胞有保护作用,乙酸乙酯层较正丁醇萃取层低浓度便能起到保护作用,乙酸乙酯萃取层能明显提高UVB辐射HaCaT细胞存活率,减少MDA生成,上调SOD和GSH酶活性。可见,乙酸乙酯萃取层是保护HaCaT细胞免受UVB辐射的有效部位。

3D皮肤模型法评价五味子油对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

运用3D皮肤模型法评价五味子油对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。利用水蒸气蒸馏法提取得到五味子油,采用GC-MS分析其化学成分,通过DPPH、ABTS自由基清除实验,以及H_(2)O_(2)诱导HaCaT细胞损伤2D、3D皮肤模型评价五味子油的抗氧化作用。结果表明,五味子油中主要化学成分包括依兰烯、β-喜马烯、L-α-蒎烯等37种化合物,五味子油对DPPH、ABTS自由基具有良好的清除效果,其清除率的IC50分别为5.6 mg/mL、9.4 mg/mL;五味子油能提高H_(2)O_(2)处理后的HaCaT细胞存活率,增加3D皮肤模型的表皮层厚度,降低白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平,上调SOD酶和CAT酶活性。研究结果证实,五味子油对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤模型具有保护作用,可为五味子油皮肤抗衰老产品的研发奠定基础。

绿茶和红茶提取物抑制中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的比较

为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明:与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物可提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率,提高SOD、GSH–Px活性(P<0.01),降低LDH活性、MDA含量和细胞内氧自由基含量(P<0.01),降低由UVB辐射导致的细胞凋亡率(P<0.01),使细胞凋亡率分别降低了6.94%和3.68%;绿茶中茶多酚和儿茶素类物质的含量明显高于红茶,绿茶提取物的抑制效果优于红茶提取物。综合分析以上结果,认为绿茶、红茶提取物可以减少由UVB辐射导致的HaCaT细胞损伤和凋亡,具有光保护作用,其机制与细胞抗氧化能力的增强和氧自由基的加速清除有关,且绿茶提取物的作用效果比红茶提取物的好。

酮洛芬异丙酯在HaCaT细胞中的代谢

目的 研究酮洛芬异丙酯在HaCaT细胞中的代谢作用 ,为探讨HaCaT细胞作为研究酯类前体药物的皮肤代谢模型提供实验依据。方法 采用含不同浓度酮洛芬异丙酯的人角质形成细胞无血清培养基进行HaCaT细胞培养 ,或将不同量酮洛芬异丙酯加入HaCaT细胞的PBS匀浆中进行 37℃温孵实验 ,通过高效液相色谱法分别在不同时间测定细胞培养液和细胞匀浆中酮洛芬异丙酯及酮洛芬的浓度。结果 酮洛芬异丙酯在HaCaT细胞培养和匀浆中能被水解成酮洛芬。酮洛芬的形成速率与酮洛芬异丙酯初始浓度的大小有关 ,在低浓度时随酮洛芬异丙酯初始浓度增大而增加。细胞培养中 ,加入 1 .4789,4.735 3 ,9.0 34 1 ,1 1 .851 1 μmol·L- 1 的酮洛芬异丙酯对细胞活性影响不大 ,酮洛芬的形成速率分别是 0 .0 696 ,0 .2 72 2 ,0 .886 0 ,0 .675 1 μmol·L- 1 ·h- 1 。细胞匀浆中 ,酮洛芬异丙酯的初始浓度是 7.4573 ,1 2 .6787,2 4 .7845 ,44.6943μmol·L- 1 ,相应的酮洛芬形成速率分别为 0 .1 34 7,0 .2 782 ,0 .473 5 ,0 .60 89μmol·L- 1 ·h- 1 。结论 HaCaT细胞作为一种常用的角质形成细胞系细胞 。

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptidefromChlamysfarreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol.L-1PCF组、UVA+2.84mmol.L-1PCF组、UVA+1.42mmol.L-1PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.425.69mmol.L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。

寻常型银屑病患者血清中IL-17的表达及紫草素对IL-17刺激HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23的影响

目的:探讨寻常型银屑病患者血清中白细胞介素17(IL-17)的表达水平及IL-17刺激后HaCaT细胞分泌白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素23(IL-23)的变化,阐明其临床意义及紫草素的干预作用。方法:以25名正常对照者、29例寻常型银屑病患者和不同组别HaCaT细胞(空白对照组、IL-17刺激24h组、IL-17刺激36h组、IL-17刺激48h组、紫草素+IL-17组、环孢素A+IL-17组和IL-17组)为研究对象,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测寻常型银屑病患者血清IL-17水平和HaCaT细胞各组上清液中IL-6、IL-23水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组HaCaT细胞中IL-6和IL-23p19mRNA表达水平;采用细胞计数盒-8(CCK-8)法检测各组HaCaT细胞活力。结果:与正常对照组比较,银屑病组患者血清IL-17水平明显升高,以重度皮损银屑病组升高最为明显(P<0.05);IL-17刺激24、36和48h组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRNA表达水平均高于空白对照组(P<0.01);紫草素+IL-17组和环孢素A+IL-17组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRAN表达水平均低于IL-17组(P<0.05)。与空白对照组比较,其他各组细胞活力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:银屑病患者血清IL-17表达水平升高,尤其是重度皮损银屑病患者血清IL-17表达水平升高明显,IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23,呈时间依赖性,紫草素可抑制IL-17的促炎症作用。

苦参碱对P物质诱导HaCaT细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

目的:研究苦参碱对P物质诱导表皮角质形成细胞系HaCaT细胞表达IFN-γ和IL-10的影响。方法:采用ELISA法测定P物质诱导HaCaT细胞分泌IFN-γ和IL-10的时效关系与量效关系。以P物质刺激HaCaT细胞,加入不同剂量的苦参碱共孵育24 h,测定苦参碱对IFN-γ和IL-10表达的影响。结果:以1×10-8mol/L P物质刺激HaCaT细胞24 h,可以显著增加HaCaT细胞IFN-γ和IL-10的分泌量,不同浓度的苦参碱均可以促进HaCaT细胞分泌IFN-γ,其中50μg/mL和100μg/mL的苦参碱均可以显著增加IFN-γ的分泌量;但苦参碱对P物质诱导的IL-10的分泌无显著影响。结论:苦参碱可能通过促进抗炎因子IFN-γ的分泌而发挥抗皮肤变态作用。

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响。方法:采用45.00mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及免疫组化检测紫外线照射及经羟氯喹和蒿甲醚处理后HaCaT细胞活性变化及其Fas和Bcl-2蛋白水平的变化。结果:①羟氯喹及小剂量(≤50mg/L)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100mg/L蒿甲醚增加细胞活性,但浓度超过200mg/L,可见大量细胞悬浮于培养液上;②与未照射组相比UVB照射可使HaCaT细胞表达Fas增加;③与UVB组相比,UVB+羟氨喹(Q)组、UVB+25mg/L蒿甲醚(H1)组、UVB+50mg/L蒿甲醚(H2)组、UVB+100mg/L蒿甲醚(H3)组使HaCaT细胞表达Fas减少;④与未照射组相比,UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;⑤与UVB组相比,UVB+Q组、UVB+H1组、UVB+H2组、UVB+H3组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加。结论:小剂量(25mg/L、50mg/L、100mg/L)蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用。蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡。

以HaCaT细胞为种子细胞构建新型人组织工程皮肤

目的:评估以人永生化角朊细胞HaCaT为种子细胞构建新型人组织工程皮肤的可行性。方法:对HaCaT进行无血清培养(DK-SFM)及传代培养;取处于对数生长期的细胞进行接种;利用物理化学方法,采用SD大鼠网状层真皮制备(Acelluar dermal matrix,ADM);应用MTT比色法作生长曲线观察HaCaT细胞长满真皮支架所需时间。HE染色法观察脱细胞前后真皮支架和细胞单层及初步形成的细胞多层。结果:脱细胞真皮的细胞成分消失,组织疏松,为理想的组织皮肤支架;将HaCaT细胞按2×10~5/cm^2密度接种到ADM上,细胞长满支架的时间为5天。

白藜芦醇对UVA致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用(英文)

目的:探讨白藜芦醇对UVA照射后HaCaT细胞的光保护作用及其可能机制。方法:采用5J/cm2UVA照射HaCaT细胞后,分别加入0.01mmol/L和0.1mmol/L的白藜芦醇进行干预,同时设正常对照组与UVA照射组,分别用MTT法检测细胞增殖能力,用羟胺法、比色法、TBA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,电镜观察细胞超微结构的改变。结果:白藜芦醇能提高UVA照射后HaCaT细胞增殖能力、细胞SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量,且呈剂量依赖性增加或降低(P<0.05)。电镜结果显示白藜芦醇能减轻UVA对HaCaT细胞超微结构的损伤。结论:白藜芦醇能减轻UVA对HaCaT细胞增殖的抑制作用、超微结构和氧化功能的损伤,并有随剂量依赖性增加的保护作用,其机制可能与白藜芦醇提高氧化酶活性、清除自由基有关。

人参皂苷Rg1和Rb1对UVB照射引起的HaCaT细胞损伤的保护作用

Aim To investigate the survival rate and the level of HaCaT cells damage with ultraviolet B（UVB） radiation at various doses,and observe the protective effects of ginsenoside Rg1 and Rb1 in vitro.Methods MTT assay was employed to analyze the cell survival rate after UVB radiation of 30,60,90 and 120 mJ·cm-2.The damage of nucleolus and the protective effects of ginsenoside Rg1 and Rb1 were scanned by Hoechst 33258 staining and single cell gel electrophoresis assay（SCGE）.Results It was found that the cell survival rate decreased gradually and the damage of nucleolus aggravated as the radiation dose increased from 30 mJ·cm-2 to 120 mJ·cm-2.At the dose of 20 μg·mL-1,obvious protective effect of ginsenoside Rg1 and Rb1 can be observed against UVB radiation-induced HaCaT cells growth inhibition and nucleolus damage.Conclusion UVB radiation inhibits HaCaT human keratinocytes growth and ginsenoside Rg1 and Rb1 can relief the damage.