双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.

StxB/HlyA(CT)融合蛋白的分泌表达和StxB在小鼠内的特异免疫反应

本文将志贺氏毒素B亚单位(StxB)与大肠杆菌溶血素A的C末端(HlyA(CT))相融合,蛋白StxB/HlyA(CT)不仅能在大肠杆菌中分泌到胞外,而且也能从aroA突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌中分泌出去。当用高拷贝质粒pUC18作载体时,上述融合蛋白对宿主细胞有毒性,但以低拷贝质粒pBR322取代之后,该融合蛋白不再对宿主细胞产生任何不利影响。融合蛋白StxB/HlyA(CT)无论是在aerobactin启动子、或是在β-内酰胺酶启动子的控制下,均能在大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌中恒定地表达,并能输送至胞外。以表达StxB/HlyA(CT)的aroA突变的鼠伤寒沙门氏菌SL3261免疫小鼠,引起了显著的B亚单位特异的粘膜和血清抗体反应。首次报道了融合至大肠杆菌溶血素A的C末端的外源多肽能从沙门氏菌中分泌至胞外,这种分泌多肽且能刺激抗原的特异性免疫反应。

蘑菇子实体内杀虫蛋白质的研究(英文)

许多蘑菇都对昆虫表现出毒性。为了证实与杀虫毒性有关的化合物 ,对 14种蘑菇的毒性在水溶性、热敏性和可透析性等方面进行了研究。研究数据表明 ,蛋白质对大多数蘑菇子实体的杀虫活性起着重要作用 ,也许是一种可以用于植物抵抗害虫的基因源。在数种蛋白质中 ,凝集素和溶血素因不受蛋白酶的影响而成为良好的杀虫剂候选材料。

人源抗创伤弧菌溶血素蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定

目的 从天然单链（scFv）大容量噬菌体抗体库中筛选特异性抗创伤弧菌溶血素蛋白（vibrio vulnificus haemolysin,VVH）的scFv并进行初步鉴定.方法 以表达纯化后的VVH为靶抗原,采用酸洗脱的方法从天然大容量噬菌体抗体库中筛选人源抗VVH噬菌体单链抗体,并将噬菌体抗体的上清梯度稀释后感染HB2151菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后获得抗VVH蛋白可溶性单链抗体,ELISA检测其与抗原结合活性,DNA序列测定鉴定抗体序列.结果 经过4轮筛选,共筛选到22株可以与VVH结合的噬菌体阳性克隆,其中8株获得可溶性表达,DNA序列分析表明获得3株可变区基因型不同的单链抗体.结论 利用大容量噬菌体抗体库筛选技术获得抗创伤弧菌溶血素蛋白的可溶性抗体,为创伤弧菌感染的治疗奠定了基础.

河弧菌paar基因功能研究

目的研究河弧菌85003 VI型分泌系统VflT6SS2核心基因簇上游paar基因(AL536_RS29530)编码蛋白的结构特征、功能及其对河弧菌VflT6SS2功能的影响。方法利用自杀质粒介导的同源重组技术构建paar基因缺失株,PCR扩增并克隆paar基因于pSRKTc表达载体获得回补质粒,导入相应缺失株得到回补株。Western Blot(WB)检测缺失株和回补株中T6SS效应蛋白Hcp的表达和分泌,细菌杀菌实验检测菌株杀菌毒力变化。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测tssB2和hcp mRNA表达水平。启动子-Lux报告系统的冷光表型检测确定VflT6SS2核心基因簇启动子及hcp启动子在野生株和缺失株背景下的活性差异。结果成功构建河弧菌85003的paar基因的精确缺失株和相应的回补株;WB检测缺失株中Hcp的表达和分泌较野生株明显降低,同时其对大肠埃希菌的菌间杀伤能力也降低,导入相应回补质粒可使缺失株Hcp的表达、分泌和杀菌表型恢复到野生株水平;hcp和tssB2的mRNA水平检测显示缺失株低于野生株,差异有显著性,但VflT6SS2核心基因簇的启动子活性和hcp启动子活性在野生株及缺失株中无明显差异,提示paar基因可能在转录后水平调控VflT6SS2。结论河弧菌中paar(AL536_RS29530)基因编码产物是河弧菌VflT6SS2的组成部分,为其功能所需,缺失该基因导致VflT6SS2的分泌和杀菌能力缺陷,但其具体的调控机制有待进一步研究。

鲍曼不动杆菌Ⅵ型分泌系统溶血素-联合调节蛋白研究进展

鲍曼不动杆菌是一种革兰氏阴性的非发酵致病菌,在医院环境中广泛存在,并且已经成为医院获得性感染的重要病原体之一。近年来,由于抗菌药物的广泛应用,导致多重耐药鲍曼不动杆菌引起的感染和暴发流行,给临床治疗带来了极大的挑战。有研究表明,细菌Ⅵ型分泌系统与细菌的致病性相关。本文综述了鲍曼不动杆菌Ⅵ型分泌系统及主要功能蛋白(溶血素-联合调节蛋白)的研究进展,以期为进一步研究鲍曼不动杆菌的致病机制提供基础。