单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

在制备针对猪附红细胞体病的特异性单克隆抗体的基础上,建立了单抗捕捉快速检测猪附红细胞体病抗体的ELISA方法,并对影响ELISA结果的各项反应条件进行了优化。结果表明,猪附红细胞体腹水单抗的最佳稀释度为1∶20 000,猪附红细胞体病抗原工作质量浓度为4.088 mg/L,血清稀释度为1∶40,HRP标记的兔抗猪IgG的工作浓度为1∶5 000。待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;底物在室温显色时间为10 min。已建立的ELISA方法与PCR平行检测50份样本,总符合率为92%,表明该方法特异性强、快速、敏感性高。用该法检测了各地采集的171份血清,阳性率为40.4%,与镜检的符合率为59.2%;阴性率为47.4%,与镜检的符合率为66.7%,总符合率为67.3%。

犬附红细胞体的体外连续培养

犬血样经Giemsa染色镜检及PCR检测，证实感染附红细胞体。选择添加新生牛血清（BS）、酵母浸出液、葡萄糖等成份的PPLO肉汤（PPLO—S—BS）为培养液，将染虫红细胞稀释后接种到细胞培养板，置37℃、5％CO2的培养箱中培养。24～72h后红细胞溶血变为带虫血影（ghost）；在PPLO-S-BS中虫体生长较好，并能连续培养180d；除首次接种外不添加任何红细胞。对PPLO-S-BS中培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验，结果表明其特征与接种物相同。