海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠p53/p21/Caspase-3通路表达的影响

目的:探究海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对治疗甲状腺肿大的作用和p53/p21/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:Wistar大鼠128只,随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))、海藻玉壶汤组(12.06 g·kg^(-1))、去海藻组(9.90 g·kg^(-1))、去甘草组(10.26 g·kg^(-1))、去海藻甘草组(8.10 g·kg^(-1))、海藻甘草组(3.96 g·kg^(-1)),每组16只。除空白组其余各组给予PTU复制甲状腺肿大病理模型,将优甲乐用作阳性药,其余各组给予相应药液,末次给药后12 h进行取材。观察各组甲状腺形态;计算各组大鼠甲状腺系数;检测各组大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察甲状腺病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测甲状腺组织p53、p21、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞周期蛋白D_(1)(Cyclin D_(1))、Caspase-3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺组织凋亡相关信号通路p53、p21、Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组甲状腺系数显著增高(P<0.01),T3、T4、FT3、FT4水平均降低(P<0.01),TSH升高(P<0.01),甲状腺组织病理形态变化明显(P<0.05),p53、p21、Cyclin D_(1)、Caspase-3 mRNA表达均降低(P<0.05);与模型组比较,全方组甲状腺系数显著降低(P<0.01),T3、T4、FT3、FT4水平均上升(P<0.05),TSH下降(P<0.01),甲状腺组织病理形态明显恢复(P<0.05),p53、p21、Caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05),p53、p21、Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,含海藻和甘草反药组合于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠的甲状腺系数、甲状腺激素及甲状腺组织形态有显著的改善效果,其作用机制可能与升高p53、p21、Caspase-3相关表达从而促进细胞凋亡相关。

海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响

目的:观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法:将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))、海藻玉壶汤(HYT)组(12.06 g·kg^(-1))、HYT去海藻(HYT-H)组(9.90 g·kg^(-1))、HYT去甘草(HYT-G)组(10.26 g·kg^(-1))、HYT去海藻甘草(HYT-HG)组(8.10 g·kg^(-1))、海藻甘草(HG)组(3.96 g·kg^(-1)),空白组给予去离子水灌胃,其余各组灌胃丙硫氧嘧啶(PTU)复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性药,其余各中药组给予相应药液灌胃,在末次给药后12 h进行取材。检测各组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平;肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织氧化应激相关信号通路Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT水平、肝脏组织中MDA和ROS含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA表达显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,HYT组大鼠血清AST、ALT、ALP水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中MDA和ROS含量显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P<0.01),Keap1、p53、Caspase-3 mRNA表达显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,海藻甘草反药组合于HYT中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激产生了不同的影响,含有海藻和甘草的HYT对甲状腺肿大模型大鼠肝脏起到了一定的保护作用,效果优于HG组、优甲乐组及各拆方组,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路以减轻肝脏氧化应激,抑制p53/Caspase-3信号通路以减少肝细胞凋亡有关。