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HAL1基因转化番茄及耐盐转基因番茄的鉴定 被引量:30
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作者 张荃 王淑芳 +2 位作者 赵彦修 赵可夫 张慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期658-662,共5页
采用PCR方法 ,从啤酒酵母中扩增得到可调节植物细胞离子均衡的HAL1基因 ,克隆后序列分析表明 :其开放读码框全长 879bp ,编码一个 2 94个氨基酸的多肽 (分子量 3 2kD)。构建含HAL1和NptⅡ嵌合基因的植物表达框架pRH ,三亲杂交后经农杆... 采用PCR方法 ,从啤酒酵母中扩增得到可调节植物细胞离子均衡的HAL1基因 ,克隆后序列分析表明 :其开放读码框全长 879bp ,编码一个 2 94个氨基酸的多肽 (分子量 3 2kD)。构建含HAL1和NptⅡ嵌合基因的植物表达框架pRH ,三亲杂交后经农杆菌介导的叶圆盘法转化番茄 (中蔬 5号 ) ,在含卡那霉素的培养基上进行转化体的筛选。转基因番茄的PCR、Southern杂交、RT PCR检测以及鲜重、干重和Na+ 、K+ 含量的测定表明 :HAL1基因确已整合到一些转基因番茄的基因组中 ;且转基因植株的耐盐性提高。 展开更多
关键词 hal1基因 基因番茄 耐盐性 鉴定
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农杆菌介导向玉米茎尖导入HAL1基因的初步研究 被引量:20
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作者 孙传波 曲文利 +7 位作者 姜志磊 韦正乙 麻鹏达 李晓辉 张举仁 刘德璞 郝东云 袁英 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期32-34,共3页
选用玉米优良自交系郑58的茎尖为受体,研究以玉米茎尖为受体进行农杆菌转化体系的可行性。用农杆菌介导法将耐盐碱基因HAL1转入玉米中,获得70株转化苗,经过300 mg/L的除草剂(Basta)筛选,共获得9株转基因植株。进一步进行PCR检测,其中6... 选用玉米优良自交系郑58的茎尖为受体,研究以玉米茎尖为受体进行农杆菌转化体系的可行性。用农杆菌介导法将耐盐碱基因HAL1转入玉米中,获得70株转化苗,经过300 mg/L的除草剂(Basta)筛选,共获得9株转基因植株。进一步进行PCR检测,其中6株表现阳性,转化率达8.57%。初步证明外源基因已经整合到玉米基因组中,以玉米茎尖作为受体孢子体的转化系统可用于基因转化。 展开更多
关键词 玉米 茎尖 农杆菌介导 hal1基因
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HAL1基因转化烟草及其耐盐性 被引量:8
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作者 李淑娟 杨传平 +2 位作者 刘桂丰 姜静 付畅 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期47-49,共3页
利用含HAL1基因的高效植物表达载体pAHF转化根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens,LBA4 4 0 4 ) ,用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草 (NicotianatabacumL .)叶片进行遗传转化。在含卡那霉素的MS分化培养基上选择转化体和植株再生 ,转化植... 利用含HAL1基因的高效植物表达载体pAHF转化根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens,LBA4 4 0 4 ) ,用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草 (NicotianatabacumL .)叶片进行遗传转化。在含卡那霉素的MS分化培养基上选择转化体和植株再生 ,转化植株可在含卡那霉素的生根培养基中生根。经PCR检测发现 ,在 8个转化子中有 6个转化子获得特异性扩增条带。耐盐试验表明 ,在被检测的 90 0株转化子中有 4 81株可在含 0 .80 %~ 1.5 0 %NaCl的生根培养基中生根 ,生根率为 5 3.4 5 % ,对照烟草植株只在低于 0 .80 %NaCl的生根培养基中生根 ,生根率为 73.75 %。由此证明HAL1基因的转入提高了烟草的耐盐性。 展开更多
关键词 hal1基因 遗传转化 耐盐性 烟草
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HAL1基因转化烟草提高烟叶含钾量研究 被引量:12
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作者 郭兆奎 杨谦 +2 位作者 姚泉洪 万秀清 颜培强 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2006年第5期46-51,共6页
提取酿酒酵母总RNA进行RT-PCR反转录,根据HAL1基因(GeneID:856113)序列设计阅读框引物,对反转录产物进行PCR扩增,并进行全序列测定,构建筛选标记为带内含子的Km抗性基因的植物双元表达载体,经根癌农杆菌介导法将HAL1基因导入烟草品种龙... 提取酿酒酵母总RNA进行RT-PCR反转录,根据HAL1基因(GeneID:856113)序列设计阅读框引物,对反转录产物进行PCR扩增,并进行全序列测定,构建筛选标记为带内含子的Km抗性基因的植物双元表达载体,经根癌农杆菌介导法将HAL1基因导入烟草品种龙江911和K326中,进行卡那霉素抗性筛选、GUS染色、目的基因扩增和HAL1基因mRNA荧光定量PCR检测,并对T1代各转化烟草材料烟叶含钾量进行化验分析。测序结果证实PCR扩增得到的DNA与酿酒酵母HAL1基因序列相同,获得抗卡那霉素、GUS阳性的转化植株12株。经PCR扩增检测证实HAL1基因已整合入转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析结果表明HAL1基因已在烟苗根系表达,烟叶含钾量化验结果证明HAL1基因可使烟叶含钾量提高30%。 展开更多
关键词 酿酒酵母 hal1基因 烟草 K^+含量
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转HAL1基因番茄的耐盐性 被引量:25
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作者 田吉林 杨玉爱 何玉科 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第5期409-414,共6页
利用农杆菌介导的叶盘法 ,把HAL1基因转入番茄 ,Southern杂交检测得到转基因植株。耐盐实验表明 ,T1代转基因番茄在 15 0mmol/L的NaCl胁迫下仍有 4 3%的发芽率 ,2 0 0mmol/L的NaCl胁迫下发芽率为 6 % ,而对照种子在 10 0和 15 0mmol/L的... 利用农杆菌介导的叶盘法 ,把HAL1基因转入番茄 ,Southern杂交检测得到转基因植株。耐盐实验表明 ,T1代转基因番茄在 15 0mmol/L的NaCl胁迫下仍有 4 3%的发芽率 ,2 0 0mmol/L的NaCl胁迫下发芽率为 6 % ,而对照种子在 10 0和 15 0mmol/L的NaCl胁迫下发芽率分别为 11.0 %和 0。转基因番茄的电解质相对外渗率小于对照 ,而根冠比和叶绿素含量大于对照 ,转HAL1基因显著提高了番茄的耐盐性。盐胁迫下Na+ 、K + 的累积状况表明 ,转基因番茄根、茎、叶的K+ /Na + 均有所提高 ,根系的SK/Na 增大 ,茎、叶的RSK/Na和RLK/Na减小 ,说明根系对K + /Na+ 离子的选择吸收和运输能力加强。不但选择吸收K + /Na+ ,而且表现出整株水平上的有利于耐盐的K + /Na+ 展开更多
关键词 hal1基因 番茄 耐盐 离子吸收 分子生理
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HAL1基因转化苜蓿再生植株及其耐盐性 被引量:8
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作者 刘艳芝 韦正乙 +3 位作者 邢少辰 谭化 高明 董英山 《吉林农业科学》 CSCD 2008年第6期21-24,共4页
用根癌农杆菌介导法将克隆于酵母的HAL1基因转化龙牧803苜蓿胚性愈伤组织,经2 mg/L的Basta抗性筛选及PCR检测,该基因已整合到受体基因组中,共获得了11株转基因植株。培养基耐盐性实验结果:在添加NaCl的MSO培养基上,非转基因植株在NaCl... 用根癌农杆菌介导法将克隆于酵母的HAL1基因转化龙牧803苜蓿胚性愈伤组织,经2 mg/L的Basta抗性筛选及PCR检测,该基因已整合到受体基因组中,共获得了11株转基因植株。培养基耐盐性实验结果:在添加NaCl的MSO培养基上,非转基因植株在NaCl浓度高于0.6%时不能生根,逐渐死亡;转基因植株在NaCl浓度0.6%~1.0%范围内仍能生根并正常生长。由此初步证明HAL1基因已在龙牧803苜蓿中表达,并且提高了耐盐性。 展开更多
关键词 hal1基因 遗传转化 耐盐性 苜蓿
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酿酒酵母HAL1基因的克隆及植物表达载体的构建 被引量:2
7
作者 付畅 杨传平 +2 位作者 刘桂丰 李淑娟 姜静 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期433-436,共4页
HAL1基因是酵母中重要的耐盐基因。以酿酒酵母AS2 .375菌株的DNA为模板 ,根据已发表的序列设计引物 ,经PCR扩增得到约 90 0bp的HAL1基因片段 ,连接到 pMD1 8 T载体上 ,转化大肠杆菌JM 1 0 9,筛选重组质粒进行酶切分析和序列测定 ,结果... HAL1基因是酵母中重要的耐盐基因。以酿酒酵母AS2 .375菌株的DNA为模板 ,根据已发表的序列设计引物 ,经PCR扩增得到约 90 0bp的HAL1基因片段 ,连接到 pMD1 8 T载体上 ,转化大肠杆菌JM 1 0 9,筛选重组质粒进行酶切分析和序列测定 ,结果显示已克隆到完整的可读框 ,该基因的序列与已知序列同源性达 99%。将HAL1基因从T 载体上切下连接到pAM 1 94载体上构建了HAL1基因的植物表达载体 ,用于烟草的转化获得了耐盐性提高的转化植株。 展开更多
关键词 酵母 克隆 耐盐 hal1基因 植物表达载体
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酵母HAL1基因转化水稻及其耐碱性研究 被引量:3
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作者 于志晶 王岭 +2 位作者 金永梅 林秀峰 马瑞 《吉林农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第6期17-20,共4页
利用农杆菌介导的遗传转化法,将从啤酒酵母中克隆出能调节细胞K+/Na+的基因HAL1导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉粳83中,经PCR、Southern杂交检测,获得246株转基因阳性植株。转基因水稻在p H值为11.0的Na OH和Na2CO3碱性胁迫下,吉粳83... 利用农杆菌介导的遗传转化法,将从啤酒酵母中克隆出能调节细胞K+/Na+的基因HAL1导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉粳83中,经PCR、Southern杂交检测,获得246株转基因阳性植株。转基因水稻在p H值为11.0的Na OH和Na2CO3碱性胁迫下,吉粳83的转基因植株耐盐碱性为1级的有7株,3级的有29株;吉粳88的转基因植株耐盐碱性为1级的有6株,3级的有8株。 展开更多
关键词 hal1基因 水稻 耐盐碱
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基因工程根瘤菌表达融合蛋白GST-HAL1条件的优化及耐盐水平的提高
9
作者 于志晶 韦正乙 +1 位作者 邢少辰 蔡勤安 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2007年第6期64-70,共7页
利用原核表达载体pGEX-4T-1构建重组质粒载体pGEX-HAL1,三亲本杂交转化根瘤菌,表达融合蛋白GST-HAL1。结果表明,与空白菌和未诱导工程根瘤菌相比,诱导后工程根瘤菌的耐盐水平有明显提高。通过检测不同温度、不同诱导时间和不同IPTG诱导... 利用原核表达载体pGEX-4T-1构建重组质粒载体pGEX-HAL1,三亲本杂交转化根瘤菌,表达融合蛋白GST-HAL1。结果表明,与空白菌和未诱导工程根瘤菌相比,诱导后工程根瘤菌的耐盐水平有明显提高。通过检测不同温度、不同诱导时间和不同IPTG诱导浓度条件下融合蛋白的表达量,优化各个参数。在28℃的温度条件下,融合蛋白GST-HAL1表达量明显增加;在IPTG浓度为1.0 mmol.L-1,诱导时间为3 h的条件下,融合蛋白的表达量最高,培养基产生的融合蛋白为3.02 mg.L-1,占可溶性蛋白质的39.34%。本研究对今后利用基因工程技术研制新型生物肥料做了有益的尝试。 展开更多
关键词 hal1基因 融合蛋白 表达 根瘤菌
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耐盐基因Hal1的克隆及表达载体的构建
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作者 沈雁 陈霞 +2 位作者 陈燕 龚毅 陈宇光 《现代农业科技》 2009年第7期243-244,共2页
以酵母菌株BWG1-7A基因组DNA为模板,利用PCR方法,扩增出耐盐基因Hal1,测序表明该基因全长为885个核苷酸,与已发表的序列NC_001148比较,同源性99.3%。将该基因插入表达载体pYES2的BamHI和EcoRI酶切位点之间,构建表达载体pYES2-Hal1,序列... 以酵母菌株BWG1-7A基因组DNA为模板,利用PCR方法,扩增出耐盐基因Hal1,测序表明该基因全长为885个核苷酸,与已发表的序列NC_001148比较,同源性99.3%。将该基因插入表达载体pYES2的BamHI和EcoRI酶切位点之间,构建表达载体pYES2-Hal1,序列测定完全正确,为植物表达载体的构建打下基础。 展开更多
关键词 耐盐性 hal1基因 克隆
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HAL1 mediate salt adaptation in Arabidopsis thaliana 被引量:13
11
作者 YangSX ZhaoYX 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期142-148,共7页
The yeast HAL1 gene was introduced into Arabidopsis thaliana by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation with vacuum infiltration under the control of CaMV 35S promoter. Thirty-three individual kanamycin resi... The yeast HAL1 gene was introduced into Arabidopsis thaliana by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation with vacuum infiltration under the control of CaMV 35S promoter. Thirty-three individual kanamycin resistant plants were obtained from 75,000 seeds. Southern blotting analysis indicated that HAL1 gene had been integrated into all of the transgenic plants’ genomes. The copy number of HAL1 gene in transgenic plants was mostly 1 to 3 by Southern analysis. Phenotypes of transgenic plants have no differences with wild type plants. several samples of transformants were self-pollinated, and progenies from transformed and non-transformed plants (controls) were evaluated for salt tolerance and gene expression. Measurement of concentrations of intracellular K+ and Na+ showed that transgenic lines were able to retain less Na+ than that of the control under salt stress. Results from different tests indicated the expression of HAL1 gene promotes a higher level of salt tolerance in vivo in the transgenic Arabidopsis plants. 展开更多
关键词 Saccharomyces cerevisiae Proteins Adaptation Physiological Arabidopsis Dose-Response Relationship Drug Fungal Proteins Gene Expression Regulation Plant Genetic Engineering GERMINATION Homeostasis PHENOTYPE Plants Genetically Modified Potassium RNA Messenger Regeneration Research Support Non-U.S. Gov't Rhizobium radiobacter SALTS Sodium Sodium Chloride Transformation Genetic
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秦烟遗传转化体系的优化 被引量:1
12
作者 孔娜 朱锦辉 +2 位作者 陈耀锋 任慧莉 郭东伟 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第9期71-75,80,共6页
【目的】优化烟草的高效遗传转化体系。【方法】以陕西地区广泛种植的烟草品种秦烟98为试材,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将从酿酒酵母细胞中克隆到的具有较强耐盐表型的HAL1基因进行遗传转化,对农... 【目的】优化烟草的高效遗传转化体系。【方法】以陕西地区广泛种植的烟草品种秦烟98为试材,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将从酿酒酵母细胞中克隆到的具有较强耐盐表型的HAL1基因进行遗传转化,对农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素进行研究。【结果】用50mg/L卡那霉素(Kan)筛选转化外植体用800mg/L羧苄青霉素(Cb)除菌可以获得理想的筛选和除菌效果。以优化的农杆菌介导烟草叶片的遗传转化条件为:将未经过预培养(预培养0d)的外植体用稀释150倍的农杆菌菌液(OD600=0.5)浸泡15min,转至MS1培养基上共培养48h,用无菌水冲洗后于体积分数2%NaCIO中浸泡15min,用无菌水冲洗4~5次,置800mg/LCb+质量分数0.1%的甘露醇中浸泡约12h除菌。【结论】获得了农杆菌介导烟草叶片遗传转化的最佳优化条件,有效地减少了外植体的污染率,提高了抗性芽分化率。 展开更多
关键词 烟草 hal1基因 根癌农杆菌介导法 秦烟98
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