基于黄鲫蛋白肽制备南美白对虾多酚氧化酶复合生物抑制剂的研究

目的 以黄鲫蛋白肽(half-fin anchovy hydrolysate peptides,HAHp)为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备南美白对虾多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)复合生物抑制剂(composite biological inhibitor, CBI)。方法 以南美白对虾PPO抑制率为检测指标,分别研究HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠盐(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt, EDTA-2Na)单独抑制PPO活性,选取HAHp、抗坏血酸和茶多酚进行三因素三水平正交优化实验优化CBI配方组成,通过酶促动力学研究CBI对南美白对虾PPO的抑制模式。结果 HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和EDTA-2Na对南美白对虾PPO都有一定的抑制作用,且有一定的剂量依赖性,但单一抑制剂对PPO的抑制作用有限。HAHp与天然抗氧化剂抗坏血酸和茶多酚复配,经(L933)正交实验优化CBI的最佳配方为:0.7%HAHp、0.02%抗坏血酸和0.20%茶多酚。经测定CBI对南美白对虾PPO抑制率达到94.71%±0.46%,酶促动力学结果表明CBI是一种混合型抑制剂,通过降低南美白对虾PPO对底物亲和力实现抑制PPO活力。结论 以HAHp为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备的CBI能够有效地抑制南美白对虾PPO活性,有望开发成一种防虾黑变的天然抑制剂,为南美白对虾天然保鲜剂的研究奠定了理论基础。

Antioxidative activity of protein hydrolysates from anchovy

Alcalase hydrolyzed protein from Anchovy under controlled condition, and the hydrolysates were rich in active peptides. The peptide content was determined by TCA-biuret method, and amino acid was determined by Ninhydrin. The antioxidative activity of the hydrolysates was investigated by measuring the reducing ability, the inhibition of lipoxygenase activity, and antioxidative ability in linoleic acid oxidation system. The hydrolysates exhibited high antioxidative activity. In addition, the hydrolysates scavenged 58.38% on hydroxyl radical and 46.88% on superoxide radical.

酶解鳀鱼可溶性肽分子组成结构及营养评价

本文叙述了用胃蛋白酶、胰蛋白酶水解的鱼是鱼可溶性肽类水解物 ,经凝胶高效液相色谱和氨基酸分析仪分析测定其肽类分子组成结构和氨基酸组成成分。测得水解产物中肽类相对分子质量在 74 0 0以下 ,其中相对分子质量 660 0～ 74 0 0、由 5 2～ 5 8个氨基酸组成的较长肽链占 1.74 % ;相对分子质量 2 5 0 0～ 5 30 0、由 2 0～ 4 1个氨基酸组成的中长肽链占 2 9.75 % ;相对分子质量在 10 0 0以下的由 2～ 10个氨基酸组成的寡肽占5 0 %。水解物的总氮与氨基酸态氮比为 2 5 .9:1,约有 96%的氨基酸以肽类形式存在 ,4 %为游离氨基酸。测得可溶性肽的总氨基酸含量为 73.98% ,必需氨基酸为 32 .39% ,占总氨基酸的 4 3.78% ,与 FAO/ WHO相比 ,苯丙氨酸为第一限制性氨基酸 ,氨基酸分值为 61。根据分析结果 ,深入探讨了鱼是鱼可溶性肽氨基酸组成的平衡性及其有关寡肽在动物机体的生理功能作用。

采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性

以黄鲫蛋白抗菌肽(HAHp)为底物,通过美拉德反应提高其抑菌活性。以大肠杆菌为指示菌,在100℃水浴加热条件下,比较HAHp-葡萄糖、HAHp-蔗糖、HAHp-麦芽糖和HAHp-乳糖的美拉德反应物抑菌活性;选用葡萄糖为添加糖,测定HAHp-葡萄糖美拉德反应初始pH值、加糖量、加热温度和加热时间对美拉德反应物的抑菌活性影响。结果表明:提高反应初始pH值(大于pH6.0)会降低HAHp美拉德产物的抑菌活性,选择葡萄糖适宜加入量,控制加热温度和时间可以提高HAHp-葡萄糖美拉德反应物对大肠杆菌的抑菌活性。

鳀鱼多肽-铜离子螯合工艺优化及其影响因素探索

以鳀鱼为原料,研究多肽与铜离子螯合的影响因素。通过比较在不同多肽与硫酸铜添加比例、pH值、温度和时间条件下的螯合率及进行正交试验,确定最佳工艺条件,并在最佳条件下探索多肽分子量对螯合率的影响。结果表明,最佳螯合条件为多肽与硫酸铜的添加比例6∶1、pH 6、温度50℃、时间50 min,在此条件下螯合率为61.3%。多肽分子量小于300 u时螯合率较低,在(600～1 000) u时螯合率最高为72.6%,大于1 000 u时,铜离子螯合率下降。

非酶热反应对黄鲫蛋白抗菌肽的抗菌性和风味特性影响

以黄鲫蛋白抗菌肽为非酶热反应的前体物质,在湿热杀菌温度121℃条件下分别研究黄鲫蛋白抗菌肽与麦芽糖、乳糖和葡萄糖的非酶热反应物抗菌性和风味特征,其中黄鲫蛋白抗菌肽-乳糖热反应物的抗菌性和风味特征优于分别与麦芽糖、葡萄糖的热反应物。以乳糖作为黄鲫蛋白抗菌肽非酶热反应实验用糖,研究反应初始pH值、乳糖质量浓度和热反应时间对产物的抗菌性和风味特性影响。结果表明,非酶热反应pH4.0,乳糖质量浓度5～10mg/mL,热反应时间10～20min的条件有利于同时提高黄鲫蛋白抗菌肽非酶热反应物抗菌活性和风味特性。

磁性纳米Fe3O4对黄鲫蛋白抗菌肽的富集作用

[目的]以磁性Fe3O4粒子为基粒,采用溶胶-凝胶法在基粒表面键合二氧化硅,将基粒制成改性磁性纳米Fe3O4用于吸附黄鲫蛋白抗菌肽中的活性肽,从而达到对黄鲫蛋白肽中有效抗菌组分的快速分离富集。[方法]黄鲫蛋白肽经改性磁性纳米Fe3O4吸附后,测定抑菌率、肽含量、蛋白质含量和氨基酸含量指标,再结合透射电镜分析和高效液相分析结果,比较黄鲫蛋白肽在吸附前后的变化。[结果]透射电镜结果显示,改性磁性纳米Fe3O4吸附黄鲫蛋白抗菌肽,可在粒子表面形成“冕层”。经改性磁性纳米Fe3O4吸附后,黄鲫蛋白抗菌肽液对大肠杆菌的抑菌作用显著降低,其中黄鲫蛋白肽中的肽含量、蛋白质含量分别由吸附前的7.249mg和416.221μg降低至6.297mg和346.183μg,而吸附后肽液中氨基酸含量则略有提高。高效液相分析结果表明,黄鲫蛋白肽经改性磁性纳米Fe3O4吸附后主要分离峰的保留时间和峰面积均发生改变。[结论]改性磁性纳米Fe3O4能有效吸附黄鲫蛋白肽中的抗菌肽,实现对抗菌组分的分离富集作用。

黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物对小鼠肠黏膜氧化性的影响

[目的]研究黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物对肠黏膜氧化作用的影响。[方法]以小鼠为动物模型,透射电镜分析显示,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物微观为形状不规则的聚合物,将该聚合物注射到小鼠空肠中吸收30 min,分别测定肠黏膜的髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性,脂质过氧化物(LPO)和丙二醛(MDA)含量变化。[结果]试验表明,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物显著提高了MPO活性,但是GPx活性则显著地降低;同样,在脂质氧化程度上,LPO含量显著地降低,而MDA含量则是显著地增加。[结论]该研究说明,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物能改变小肠黏膜关键酶MPO和GPx活性,但是不同酶对其敏感性不同,MPO活性增强可能与LPO含量降低有关,而GPx活性降低则导致了MDA含量增加。

黄鲫蛋白活性肽及其热反应物的风味特征研究

分别采用电子鼻分析法和顶空固相微萃取-气质联用法对黄鲫蛋白活性肽(HAHp)及其热反应物(HAHp-H)的风味特征进行分析。电子鼻载荷分析结果表明:对氮氧类、醇类及烷烃类化合物敏感的传感器在区分HAHp和HAHp-H的风味性中贡献率大,线性判别分析效果优于主成分分析法。从HAHp中检测到酮类、醇类、酯类、烯类、呋喃类、醛类、烷类及其他类化合物20个,其中酮类和醇类总相对含量达到88.26%。HAHp-H中化合物种类和相对含量与HAHp明显不同,新生成的6-甲基-5-庚烯-2-酮、3,3,6-三甲基-1,5-庚二烯-4-酮、3-甲基-丁醛具有提升风味的作用,而癸醛和壬醛则未被检出或含量降低。HAHp-H的风味性优于HAHp,该研究可为HAHp和HAHp-H在食品中的应用提供参考。

鳀鱼活性肽制备及其α-糖苷酶抑制活性初步研究

以鳀鱼为原料,分别采用酶工程法和生物发酵工程法进行处理。酶法以水解蛋白酶和风味蛋白酶为工具酶进行深度酶解,生物发酵按照1.5%米椛添加量固态发酵6个月。以微量板半定量法检测该酶解液和发酵液对α-糖苷酶的抑制作用,利用HPLC分析鳀鱼活性肽的相对分子量分布。结果显示,鳀鱼原料除水分外,粗蛋白含量最高为18.62%;其酶解液和发酵液均具有良好α-糖苷酶抑制作用,在0.25~2 mg/m L范围内,随着浓度增加抑制作用逐渐增强,酶解液抑制活性略高于发酵液,酶解液浓度在0.25,0.50,1.00和2.00 mg/m L时,其抑制率分别为17.58%,22.63%,25.54%和33.94%。其分子量在219.86~3708.26 Da范围之间,具有分子量小、易吸收的特点。以鳀鱼为原料开发降血糖功能食品具有巨大潜力。