嗜盐古菌染色体DNA片段在大肠杆菌中的启动子功能(英文)

以启动子探针质粒pKK232-8为载体,用微量量热法研究了源自盐生盐杆菌R1染色体的RM13DNA片段在大肠杆菌HB101中的真细菌启动子功能,该启动子RM13 DNA片段的大小为1000bp(碱基对),它能启动探针质粒pKK232-8上的氯霉素乙酰水解酶基因(即:氯霉素抗性基因Cm),氯霉素抗性水平可达到150 mg·L^(-1),抗性水平较高,启动活性较大.研究结果表明,在盐生盐杆菌染色体上可能存在具有双功能或多功能的启动子DNA片段,这对系统发育、微生物遗传学和生物热化学等均有重要的意义.

具有真细菌基因启动子活性的盐生盐杆菌质粒DNA片段

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体、用两组限制性内切酶ＢａｍＨＩ－ＳａｌＩ和ＨｉｎｄⅢ－ＳａｌＩ分别消化盐生盐杆菌Ｊ７（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）的质粒ｐＨＨ２０５，在体外进行重组，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子，并从随机挑选的２０株转化子中，获得抗氯霉素水平达到１１０μｇ／ｍｌ的转化子Ｔ１和Ｔ２，所含重组质粒分别被命名为ｐＪＨ和ｐＪＢ。经限制性酶切分析及杂交分析表明，ｐＪＨ质粒上插入了一段来源于ｐＨＨ２０５质粒的ＤＮＡ片段，其大小为８００ｂｐ左右。通过重新转化实验进一步表明，该ＤＮＡ片段在大肠杆菌中具有启动子功能，从而证明，在古细菌（盐生盐杆菌）的质粒ＤＮＡ中存在具有真细菌（大肠杆菌）基因启动子活性的ＤＮＡ片段。