盐穗木miR397a增强转基因拟南芥的低温耐性

盐穗木(Halostachys caspica)是耐盐性极强的苋科藜属盐生植物.miRNA是长度为21∼24 nt的内源性非编码小RNA,通常在转录后水平负调控靶基因的表达介导多种生物学过程.从盐穗木高盐胁迫下根的小RNA文库和转录组数据中,克隆盐穗木miR397a(HcmiR397a)前体序列和漆酶HcLACs(Laccase,LAC)为预测的靶基因.通过实验的方法鉴定HcmiR397a与HcLACs的靶向关系及HcmiR397a在多种非生物胁迫下的表达和HcmiR397a的转基因拟南芥在低温胁迫下的功能.研究结果表明:(1)烟草瞬时表达体系和5’RLM-RACE技术确定HcmiR397a与HcLAC17之间存在靶向切割,具体的切割位点位于HcmiR397a的第10∼11碱基处;(2)qRT-PCR检测的结果显示盐、干旱和低温胁迫下,盐穗木同化枝HcmiR397a受到显著诱导;(3)异源表达HcmiR397a的转基因拟南芥表现出较强的低温耐性.