Glycoproteomics analysis of plasma proteins associated with Opisthorchis viverrini infection-induced cholangiocarcinoma in hamster model

Objective: To apply lectin affinity chromatography and glycoproteomics-based LC-MS/MS to preliminarily investigate the possible potential plasma biomarkers of Opisthorchis viverrini(OV)-associated CCA in OV/dimethylnitrosamine(DMN)-induced CCA hamster model. Methods: Nine Syrian hamsters were divided into 3 groups as follows(n=3 each): normal(healthy control group); OV group; and OV/DMN group(CCA group). Pooled plasma samples collected from animals in each group at the 6th month post-infection with OV metacercarae were subjected to glycoproteomics analysis. Glycoproteins in the pooled sample from each group were initially isolated by concanavilin A(Con A)-based affinity chromatography. The expression of glycoproteins isolated by both enrichment methods were determined using LCMS/MS. Results: Among the 24 Con A-binding glycoproteins isolated, two proteins, N-myc downstream regulated gene 1(NDRG1) and fetuin-B(FETUB) were found up-regulated only in the samples from the OV and control groups, but not in the OV/DMN(CCA) groups. On the other hand, one protein, i.e., NSFL1 cofactor p47 isoform x3(NSFL1C) was found only in the samples from OV/DMN(CCA) and control groups, but not in the OV group. The remaining 21 proteins were upregulated in the samples from all groups. Conclusions: NDRG1, FETUB and NSFL1 C glycoproteins isolated by Con A-based affinity chromatography could be potential biomarkers for CCA. Plasma samples with negative for NDRG1 and FETUB proteins but positive for NSFL1 C are likely to be OV-associated CCA. Nevertheless, this conclusion remains to be confirmed whether this battery test can discriminate OV-associated CCA from other risk factors.

金黄地鼠生物净化及其应用

金黄地鼠被用于研究人类相关疾病已有60多年,广泛应用于新型冠状病毒、代谢性疾病发病机制、疫苗和治疗性药物效果评价的研究中。WTO规定用于疫苗生产和检定的金黄地鼠必须达到无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级,而目前国内使用的多为普通级。通过生物净化提升金黄地鼠种群微生物等级势在必行。本文概述了金黄地鼠在新型冠状病毒、代谢性疾病研究中的应用及相关生物净化技术工作进展。

几种高脂血症动物模型的比较

为建立更合理而实用的高脂血症动物模型 ,比较了SD大鼠、Wistar大鼠和金黄地鼠的血清和肝脏脂质对高脂饲料的反应。大鼠高脂饲料配方为 1%胆固醇、10 %猪油、10 %蛋黄粉和 79%基础饲料 ;金黄地鼠高脂饲料配方为 0 2 %胆固醇、15 %猪油和 85 %基础饲料。结果显示 ,经过高脂饲料喂养 5周后 ,SD大鼠、Wistar大鼠和金黄地鼠高脂组血清甘油三酯水平分别比对照组高 194 4 %、86 2 %和 84 3 % (P <0 0 5 ) ,血清总胆固醇水平分别比对照组高 76 8%、4 8 3 %和 13 4 8% (P <0 0 5 )。提示金黄地鼠是一种良好的高胆固醇血症模型 ,而SD大鼠可能是一种较好的高甘油三酯血症模型。

UPLC-Q/TOF-MS法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素在高脂血症鼠体内的药代动力学

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS)的高分辨多反应监测扫描模式(MRMHR),建立同时测定虎杖中指标性成分虎杖苷、白藜芦醇和大黄素血药浓度的分析方法,并研究其在高脂血症模型鼠体内的药代动力学特征。方法:以乙酸乙酯液液萃取法前处理血浆样本,采用乙腈-0.1%甲酸水二元梯度洗脱系统,经Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分析,进行MRMHR定量。采用DAS软件估算高脂血症模型鼠灌服虎杖提取物后指标性成分的药代动力学参数。结果:虎杖苷血药浓度在1~1000 ng·mL^(-1),白藜芦醇和大黄素的血药浓度在0.5~500 ng·mL^(-1)范围内,线性关系均良好。批内和批间精密度、准确度、稳定性以及基质效应均符合生物样本检定要求。高脂血症模型鼠灌服虎杖提取物后,3个指标性成分可快速达到血药浓度峰值,其中虎杖苷体内暴露量最大;大黄素血药浓度-时间曲线呈现双峰现象,且体内暴露量最小。结论:该方法灵敏度高、准确性好、专属性强,成功应用于高脂血症模型鼠体内虎杖指标性成分的药代动力学研究。

仓鼠艰难梭菌相关性腹泻动物模型的建立和评价

目的探索建立仓鼠艰难梭菌相关性腹泻动物模型的方法和评价指标。方法以克林霉素皮下注射为诱导(术前1 d),24 h后以临床分离株KH1(10~6~10~8CFU/mL,核糖体型027)或SH9(10~8~10^(10)CFU/mL,核糖体型001)灌胃。观察不同建模方式下仓鼠的全身情况、腹泻和体重变化。至观察终点(第7天或死亡)行结肠组织病理学检查。结果克林霉素100 mg/kg皮下注射,24 h后分别以艰难梭菌KH1或SH9活菌混悬液灌胃后,KH1 10~8CFU/mL剂量组仓鼠全部出现腹泻,至第5天全部死亡;SH9 10^(10)CFU/mL剂量组亦全部发生腹泻,死亡率为66.7%。其他实验组仅1只仓鼠出现腹泻死亡或无腹泻。腹泻仓鼠有稀便及湿尾现象,体重减轻,结肠黏膜充血水肿伴炎性细胞浸润。结论以100 mg/kg克林霉素皮下注射,24 h后10~8~10^(10)CFU/mL艰难梭菌活菌混悬液灌胃,可建立艰难梭菌相关性腹泻模型。

金黄地鼠高血脂模型的建立

目的建立高血脂金黄地鼠动物模型,研究红葡萄酒预防高血脂的作用。方法用含有2%胆固醇的高脂饲料喂养金黄地鼠,设正常对照组和模型组,饲养15 d。期间观察金黄地鼠对高脂饲料的耐受性,试验结束时,测量血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)值,并对肝脏进行光镜和电镜观察。结果金黄地鼠对高脂饲料具有较强的耐受性。经过15 d之后,模型组TC、TG、HDL-C、LDL-C、VLDL-C极显著升高(P<0.01),分别为对照组的9.06、4.19、2.43、6.21、18.88倍,而HDL-C/(LDL-C+VLDL-C)显著降低(P<0.05),光镜和电镜观察表明模型组动物的肝脏出现脂肪肝样改变。结论本造型方法时间短,取血方便,血量充足,是一个较好的高血脂模型建立方法。

一种实用的仓鼠微血栓形成模型的建立

目的建立一种实用的金色仓鼠微血栓模型。方法将仓鼠颊囊外翻后内套入玻璃片，从仓鼠颈静脉注入鱼精蛋白中和内皮细胞抗血栓功能，再注入凝血酶，显微镜下可见明显的血栓形成。以仓鼠颊囊内直径为10-50μm的微动脉作为观察对象，计算形成血栓的微动脉的百分率，观察阿司匹林药物对血栓形成的影响。结果在镜下可观察到清晰的仓鼠颊囊微血管中的血液流动，注入凝血酶后形成明显微动脉血栓，阿司匹林能降低形成血栓的微动脉百分率。结论该文提供了一种直观的仓鼠微血栓形成模型，适用于抗血栓药物的筛选和研究。

仓鼠胰腺癌细胞株移植性肝癌模型的建立及其生物学特性

目的:建立仓鼠胰腺癌细胞株(pGHAM-1)移植性肝癌模型,并研究其生物学特性.方法:将pGHAM-1培养后配成4×1010/L,取0.5mL接种于仓鼠皮下,成瘤后,接种于仓鼠肝脏.分别于第20、30、40天用B超仪检测肝脏肿瘤大小.于接种后第40天处死动物,观察肿瘤的生长、转移及腹水量.解剖取出肝脏,用游标卡尺测量肿瘤大小,切开肝脏直接观察肿瘤,再进行HE染色的组织病理学检查,免疫组织化学检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)及肿瘤转移相关蛋白(nm23-H1)的表达.结果:pGHAM-1种植性肝癌模型成功率达100%.B超仪检测仓鼠肝脏,第20、30、40天肿瘤体积分别为84.1±21.9mm3,413.7±208.4mm3,2187.3±1882.8mm3,与10d前者相比,有非常显著性差异(P<0.01);接种后第40天处死动物,解剖观察肿瘤,直接测量肿瘤体积为2948.0±2188mm3,其大小与第40天B超仪测量结果无显著性差异(P>0.05).部分仓鼠可见血性腹水;肝内未见肿瘤卫星结节;HE染色组织病理学检查为低分化胰腺癌;免疫组织化学检测结果显示VEGF及nm23-H1蛋白低表达.结论:pGHAM-1种植性肝癌模型建立方法简便,易复制,是理想的肝癌研究模型.

金黄地鼠高脂血症动物模型的应用研究

目的 :建立金黄地鼠高脂血症模型。方法 :按血浆 TC将 6～ 8周龄雄性金黄地鼠随机分成普通组和高脂组 ,分别饲以胆固醇含量为 0 .0 2 2 %和 0 .2 %、脂肪含量为 4 %和 2 0 %的饲料。每周采血一次 ,测定血浆 TC、TG。结果 :第三至四周动物 TC、TG达到较稳定水平 ,与普通组比较 ,高脂组动物 TC升高了近 2倍 ,TG升高近 1倍。结论 :建立金黄地鼠高脂血症模型所用饲料胆固醇含量低、造模时间短 ,是研究人类脂代谢的理想模型之一。

高温致神经管畸形动物模型的建立及其形态发生的研究

将妊娠第８ｄ的金黄地鼠腹部置４２℃水浴２０ｍｉｎ，建立了一个致畸率高、致死率低、效果稳定、操作简便的高温致畸动物模型，并在此模型上，探讨了高温致ＮＴＤ的形态发生机理。结果表明：高温有明显的胚胎毒和致畸作用，且与高温值和持续时间明显相关。

转化生长因子-β_2在糖尿病仓鼠视网膜中的表达意义

目的:探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子-β(2TGFβ2)产生的关系以及TGF-β2的作用机制。方法:链脲佐菌素制备仓鼠糖尿病模型,用免疫组织化学法检测正常对照组和糖尿病动物模型(16周)视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。结果:糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。结论:提示TGF-β2与糖尿病视网膜病变(DR)形成过程有关。

中国地鼠高糖高脂动物模型的实验研究

目的高脂膳食结合小剂量链脲佐菌素建立中国地鼠的高糖高脂模型。方法采用高脂膳食喂养中国地鼠38周,结合链脲佐菌素(STZ)20 mg·kg-1腹腔注射。将中国地鼠分3组:普通饮食组(KB)、普通饮食STZ组(KSTZ)、高脂膳食STZ组(HSTZ),定期观察体重、血糖的变化,38周后取血清测定TC、LDL、HbA1c、NO活力和GSH水平。结果在4周、19周时HSTZ组血糖较KB组明显升高;38周时KSTZ组血糖、HbA1c较KB组显著升高,KSTZ组TC较KB组明显升高,HSTZ组TC、LDL均显著高于KB组和KSTZ组。NO活力KSTZ组明显高于KB组和HSTZ组,GSH水平HSTZ组显著高于KB组和KSTZ组,但后2组间无差异。结论多次低量STZ有缓慢升高中国地鼠血糖,高脂饲养升高血脂但未加重高血糖,该模型具有一定的氧化应激损伤。

极度高甘油三脂高胆固醇血症动物模型的建立

建立高脂血症以及联合高脂血症和糖尿病的金黄地鼠模型,为深入研究高脂症在动脉粥样硬化和糖尿病合并动脉粥样硬化等疾病中的作用提供耗时短、效果稳定的动物模型。试验组金黄地鼠(90～110 g)连续3 d腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)(30 mg.kg-1)。于注射后9 d,检测空腹血糖,选择血糖大于200 mg.dL-1的个体,给予高脂饲料(HF),对照组同时给予普通饲料(chow)或高脂饲料(HF),检测4周血浆葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等指标。结果表明,地鼠注射STZ后血糖升高并维持在300～400 mg·dL-1。在喂饲高脂饲料4周后,糖尿病高脂组血脂极度升高,TG达20 000 mg·dL-1,TC达4 500 mg·dL-1;不注射STZ组饲喂高脂饲料后TG和TC也明显升高至1 000 mg·dL-1左右。利用高脂饲喂或联合STZ注射的方法,可以成功制造出稳定的高脂血症以及联合糖尿病的金黄地鼠模型。

被动吸烟对胚胎致畸作用的研究和致畸动物模型的建立

目的探讨被动吸烟对胚胎的致畸作用,并建立一个理想的被动吸烟致畸的动物模型方法采用自制的半封闭式被动吸烟染毒箱,对不同孕期的金黄地鼠以不同时间及不同剂量的分组组合,给予烟熏处理后,进行致畸效果的观察分别计数各组孕鼠的胚胎植入数活胎、吸收胎、死胎及致畸率,并进行统计学分析。结果被动吸烟对胚胎有明显的致畸作用(χ2=86.23,P<0.05或P<0.01),孕6、7、8d期间,每日3次,共6h的烟熏,其致畸率最高,为41.6%,吸收胎数相对较低,活胎平均体重最低。结论孕6、7、8d的金黄地鼠,每日3次,共6h的烟熏,致畸率高,吸收率较低,可产生严重的畸形,是一个比较理想的被动吸烟致畸动物模型。

BOP诱导叙利亚仓鼠胰腺癌动物模型建立和相关生物学特性的研究

目的:探讨N-亚硝酸2-双丙基胺[bis-(2-oxopropyl)-N-nitro samine,BOP]诱导建立叙利亚仓鼠胰腺癌动物模型的可行性和建模过程特点,初步分析模型胰腺癌的相关生物学特点,为胰腺癌动物模型研究提供一个可控性强、动态、全面的基础。方法:73只叙利亚仓鼠随机分为实验组和对照组,实验组予以生理盐水稀释成20 mg/ml的BOP按照20 mg/kg体重腹壁皮下注射每周1次,连续4周;相同条件注射生理盐水为对照组。连续监测各组仓鼠体重,注射结束后4周开始每2周依次收集两组叙利亚仓鼠组织标本,观测其形态特点。结果:注射后20周实验组开始出现胰腺肿瘤,注射后28周开始成瘤明显增加,病理观测为低分化腺癌,复种实验成功,部分实验结果与既往报道不一致。结论:BOP可以成功构建叙利亚仓鼠胰腺低分化腺癌动物模型,在注射后第28周后收集标本时间最佳,部分实验结果值得进一步深入研究。

两种建立金黄地鼠颊囊癌模型方法的对照研究

目的二甲基苯并蒽丙酮注射法建立金黄地鼠颊囊癌动物模型,并与传统涂抹法相比较,为颊囊癌研究提供理想的动物模型。方法随机将81只金黄地鼠分为注射组、涂抹组和空白对照组。DM-BA丙酮注射组60只地鼠,将注射浓度预设为0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%5个组,每组12只地鼠,每周两次,于注射后每周进行大体观察、监测体重并计算肿瘤生长率,至3、6、9、12周麻醉后各处死3只,进行组织学观察;涂抹组15只地鼠,以0.5%DMBA丙酮涂抹,每周三次,至6、9、12、15、18周后麻醉处死3只;空白对照组不做任何处理,于12周全部处死行组织学观察。结果注射浓度组0.4%、0.3%、0.2%、0.1%分别在13,9,12,16周时出现约为0.8 cm×0.6 cm×0.5 cm大小的肿瘤;12周时成瘤率分别为25%、87%、42%、58%;死亡率分别为48%、11%、13%、10%;相比0.5%DMBA丙酮涂抹组,12周时成瘤率为48%,死亡率为37%,至18周时才出现颊黏膜高分化鳞癌。结论经筛选采用0.3%DMBA丙酮液注射法可诱发形成口腔鳞癌动物模型,缩短建模周期,降低建模成本,能为科学研究提供较为理想的动物模型。

金黄地鼠胰腺癌动物模型的建立

目的:建立N-Nitrosobis(2-oxopropyl)amine(BOP)诱导性金黄地鼠胰腺癌动物模型。方法:将120只雌性叙利亚金黄地鼠随机分为实验组(80只)和对照组(40只)。按10 mg/kg体重分别给实验组金黄地鼠皮下注射BOP,每周1次,持续7周;对照组皮下注射生理盐水。第1次注射后第11周开始,每两周1次,处死实验组金黄地鼠10只,对照组5只。行组织病理学检查。结果:实验组部分动物出现黄疸及营养不良、远处转移,平均体重轻于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。剖腹肉眼观察,在18只实验组动物中发现23个胰腺肿瘤。其中,1只有3个胰腺肿瘤,3只有2个肿瘤,其余均为单发。其中,7个肿瘤直径<5 mm,16个肿瘤直径≥5 mm,最小肿瘤直径2.0 mm,最大肿瘤直径17 mm。肿瘤直径中位数6.8 mm,体积中位数178.71 mm3,质量中位数0.32 g。组织学检查共在26只实验鼠中发现31个胰腺癌,其中原位癌9个,浸润癌22个,均为胰腺导管腺癌。所有荷瘤鼠均伴有不同程度不典型增生,19周后,所有的实验组动物均发现不典型增生,共在65只实验组动物中发现胰腺不典型增生。实验组总成瘤率81.3%(65/80)。结论:经皮下注射BOP,成功建立诱导性金黄地鼠胰腺癌动物模型,操作方法简单,易复制,组织病理学与人胰腺癌相似,是胰腺癌体内研究理想的动物模型。

阿司匹林抵抗动物模型的制备及评价

目的:探索性建立阿司匹林抵抗(AR)的金黄地鼠动物模型,并进行评价。方法:选用健康雄性金黄地鼠130只,分为2组,造模组120只,普通饲料组10只。造模组采取高脂高糖高盐饲养12周,同时给予灌胃给药(0.74g/kg/d阿司匹林+2.22g/kg/d布洛芬)和吸烟4周,以建立阿司匹林抵抗(AR)模型。采用血小板聚集试验作为AR判定标准:腺苷二磷酸(ADP)诱导的血小板平均聚集率≥70%,花生四烯酸(AA)诱导的血小板平均聚集率≥20%,同时符合两项者为AR,符合其中一项者为阿司匹林半抵抗(ASR)。结果:多因素造模组,AR和ASR金黄地鼠的PAG均明显升高(P<0.01)。AR模型6只,发生率为5%;ASR模型28只,发生率为23%。结论:通过对AR产生的病理环境的模拟,多种危险因素的综合作用,实验成功制造出AR金黄地鼠动物模型。

多功能频谱治疗仪对金黄地鼠创伤性口腔溃疡治疗作用的研究

目的 :研究多功能频谱治疗仪 (简称WS频谱仪 )对金黄地鼠创伤性口腔溃疡的治疗作用。方法 :6～8周龄金黄地鼠 ,用机械方法制造动物口腔粘膜创伤性溃疡 ,用WS频谱治疗仪进行治疗 ,观察其促进溃疡愈合的作用。结果 :治疗组动物平均愈合时间明显少于对照组 ,特别是高能量组平均愈合时间较对照组缩短 2天 ,第 4、7、9天溃疡面积及第 4天溃疡临床观察值两个方面进行统计学分析均有显著性差异。结论