内源性禽白血病病毒的RT-PCR检测与基因序列分析

为了解贵州省是否存在内源性禽白血病病毒(ALV)感染情况,试验选取无明显ALV症状的送检病料,采用RTPCR方法对ALV进行扩增。结果:扩增出1条744 bp左右的目的条带。对扩增产物进行测序和基因序列分析,同源性分析结果表明:序列与E亚型ALV中的ev-1、ev-3株同源性最高(99.5%),与J亚型ALV中的HPRS-103株同源性较低(42%)。系统进化树中该序列与内源性ALV中的ev-1、ev-3株属同1个分支,亲缘关系最近,说明其属于内源性ALV。

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序列测定

明确保定肾综合征出血热疫区型别。［方法］采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测急性期肾综合征出血热病人血清汉坦病毒ＲＮＡ，并进行分型及部分核苷酸序列测定和与国内外汉坦病毒的代表株进行比较。［结果］３１份急性期病人血清经分型，２４份为家鼠型（ＳＥＯ）型，２份为野鼠型（ＨＴＮ）型，测得ＳＥＯ型Ｃ_３株Ｍ基因（１９８５到２３１４位），ＨＴＮ型ＬＢＹ株Ｍ基因（１９９６到２３１４位）核苷酸序列与国内外代表株比较：Ｃ３与７６－１１８、Ａ_９、ＬＢＹ核苷酸同源性分别为６８．７９％、６７．５％、６８．０３％；氨基酸同源性分别为７７．２７％、７７．２７％、７８．３％。Ｃ_３与Ｓｅｏｕｌ、Ｒ_(２２)相比，核苷酸同源性分别为９５．１５％、９３．９４％；氨基酸均为９７．２７％。ＬＢＹ与７６－１１８、Ａ_９、Ｓｅｏｕｌ、Ｒ_(２２)核苷酸同源性分别为９８．７５％、８７．１５％、６８．３４％、６８．０３％；氨基酸同源性分别为 １００％、９６．２３％、７８．３％。［结论］首次发现与韩国 ７６－１１８同亚型ＨＴＮ型汉坦病毒在我国的存在，首次证实 ＨＴＮ型汉坦病毒在保定的存在，明确保定疫区为混合性疫区。

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序列测定

为明确保定肾综合征出血热 (HFRS)疫区的型别 ,采用RT PCR方法 ,检测急性期HFRS病人血清的汉坦病毒(HV)RNA ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定 ,并与国内外HV的代表株进行比较。结果 31份急性期病人血清经RT PCR分型 ,2 4份为汉城型 (SEO型 ) ,2份为汉滩型 (HTN型 ) ,并测得SEO型C3株M基因 (位于 1985— 2 314位 ) ,HTN型LBY株M基因 (位于 1996— 2 314位 )核苷酸序列与国内外代表株的核苷酸和氨基酸序列相比较 :C3与 76 118、A9、LBY核苷酸同源性分别为 :6 8 79%、6 7 5 8%、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :77 2 7%、77 2 7%、78 3%。C3与Seoul、R2 2相比 ,核苷酸同源性分别为 :95 15 %、93 94% ;氨基酸均为 97 2 7%。LBY与 76 118、A9、Seoul、R2 2核苷酸同源性分别为 :98 75 %、87 15 %、6 8 34 %、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :10 0 %、96 2 3%、78 3%、78 3%。首次发现与韩国 76 118株同型(HTN型 )HV在保定的存在 。

RT-PCR扩增汉滩病毒及其核苷酸序列的发生树分析

目的 用RT PCR方法扩增肾综合征出血热病人血样品中的汉滩病毒RNA ,对扩增产物进行测序并分析汉滩病毒基因组的变异。方法 用引物PⅠ PⅡ对 2 2例血样品中的汉滩病毒RNA进行第一次PCR扩增 ,PⅠ PⅡ扩增样品再用PⅠ 1 PⅡ 2引物进行槽式RT PCR扩增 ,将扩增效果良好的PCR产物进行测序 ,对测序结果用生物化学软件进行同源性比较和进化树分析。其中HV2 2 6样品用引物P1 P2进行RT PCR扩增。结果 2 2例肾综合征病人血样品用PⅠ PⅡ和P1 P2引物扩增有 19例阳性 ,其中编号W6 13、W1141样品用PⅠ 1 PⅡ 2进行槽式扩增后对其扩增产物直接进行测序。HV2 2 6号样品用引物P1 P2进行扩增后 ,其扩增产物也直接进行测序。对该 3株序列测定结果进行比较分析发现 ,编号W6 13、W1141样品核苷酸序列与HV114株的同源性为 84% ,而与HTN76 118株的同源性为 99%。HV2 2 6号样品与HV114有 95 %的同源性 ,而与HTN76 118有 82 %的同源性。进化树分析表明 ,W6 13,W1141与HTN76 118株位于同一分枝 ,而HV2 2 6与HV114、A9株处于同一分枝。结论 湖北地区汉滩病毒至少存在 2个亚型 ,其中W6 13、W1141与HTN76 118的核苷酸序列高度同源 ,属于同一亚型。而HV2 2 6与HV114属于另一亚型。

广东1株H3N2亚型犬流感病毒的分离与鉴定

本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种SPF鸡胚,分离到一株流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性研究。结果表明,该毒株对1%鸡红细胞的血凝价为26,能被H3亚型流感病毒阳性血清中和,与H1、H5、H7、H9亚型阳性血清和阴性血清无交叉反应。序列分析显示,该毒株的HA和NA基因核苷酸序列分别与犬流感病毒(CIV)H3和N2亚型的病毒株同源性最高。确定该毒株为H3N2亚型CIV,并将其命名为A/canine/Guangdong/01/2011。

汉滩病毒PS-6株的分离及其生物学性状研究

目的 从病人血清分离汉坦病毒Ⅰ型毒株 ,为双价疫苗的配伍提供更好的候选株。方法 从陕西HFRS患者血清 ,按常规法分离汉坦病毒。用系列单克隆抗体、空斑减少中和试验、RT PCR及部分核苷酸序列分析等检定 ,确证所分离毒株的血清 (或基因 )型别。结果 从 17份HFRS患者血清中成功地分离到 1株汉坦病毒 ,定名为PS 6株。经上述方法全面鉴定确定其为汉滩病毒 (即Ⅰ型病毒 )。该毒株有较强的繁殖力 (毒力 )及较好的抗原性 ,其免疫血清对来源于不同地区的Ⅰ型病毒有较好的中和活性。结论 PS 6毒株有可能成为Ⅰ型病毒疫苗候选株 ,为双价或多价疫苗配伍。

H9N2亚型禽流感病毒西藏分离株的全基因组遗传进化分析

根据GenBank登陆的H9N2亚型AIV全基因组序列,设计了8对引物,运用RT-PCR的方法获取了3株H9N2亚型AIV西藏分离株A/Chiken/Tibet/S1/2009、A/Duck/Tibet/S2/2009和A/Chiken/Tibet/S4/2009的8个基因序列,并对所得序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,分离毒株的各基因片段均有完整的开放阅读框,HA基因裂解位点处均为RSSR/G,符合低致病性禽流感的特征;3株西藏分离毒株之间同源性为98%~99%,可能起源于同一种系;各分离毒的HA、NS和NA基因与欧亚分支A/Chiken/Beijing/1/94分支中的A/Duck/HongKong/Y280/97遗传距离最近,而M、NP、PA、PB1和PB2基因与欧亚分支中另一分支A/Quail/HongKong/G1/97群系遗传关系近。由此可见3株分离株的各基因所属分支不具有统一性,说明本研究所分离的3株H9N2亚型AIV西藏分离毒株可能是来源于不同亚系AIV的毒株在感染同一种宿主时发生基因重排的产物。