蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导小鼠肝纤维化的预防作用

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导小鼠肝纤维化的预防作用。方法:94只Balb/c小鼠根据体质量采用随机区组法分为7组,正常组8只,模型组16只,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组,复方鳖甲软肝片组和秋水仙碱组各14只。采用尾静脉注射ConA制备小鼠肝纤维化模型,以蒿鳖养阴软坚方作为预防用药。采用HE染色及胶原染色法观察肝组织形态;盐酸水解法测定肝组织胶原蛋白的含量;放射免疫法测定血清透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平。结果:模型组肝纤维化程度分期及计分均高于正常组(P<0.01),中、低剂量组肝纤维化程度分期均低于模型组(P<0.05)。模型组肝组织胶原蛋白含量高于正常组(P<0.01),高、中、低剂量组肝组织胶原蛋白含量皆明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导小鼠肝纤维化具有预防作用。

蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组。除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40%CC14花生油混合溶液,隔日灌胃给予30%乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间(共6周)结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高(P<0.05);各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高(P<0.05)。结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用

目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot法检测collagenⅠ以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen Ⅰ、α-SMA的表达量显著升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagenⅠ和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagenⅠ和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg·kg^(-1)·d^(-1))、先水后醇95%提取方案低、高剂量组(2.59 g.kg^(-1)·d^(-1)、8.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、水提醇沉低、高剂量组(2.59 g·kg^(-1)·d^(-1)、8.2 g·kg^(-1)·d^(-1))及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量;Western blotting检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1)肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高(P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低(P<0.05)。(2)肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01)。(3)肝组织免疫组化染色结果:模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方制剂工艺的正交实验与药理筛选比较研究

目的:探讨药理筛选在完善以有效成分的正交实验结果为依据所确立的蒿鳖养阴软坚方制剂工艺中的作用。方法:以复方中辅药的水溶性(丹酚酸B、梓醇)和脂溶性(大黄素)有效成分为评价指标,按HPLC测定其含量,对溶剂倍量、提取次数、提取时间、乙醇浓度等因素各3个水平进行正交实验,据以制定提取工艺共10种方案。0.5mlCCl4/100gwt皮下注射16次(后15次注射用CCl4:橄榄油=4:6,V/V)辅以10%乙醇为饮料引起大鼠肝纤维化,成模后按体重随机区组法分组,分别以蒿鳖养阴软坚方10种提取方案各2个剂量(24.48g/kg,8.16g/kg)治疗用药,每日1次、每周6天灌胃共2个月,模型对照组和正常对照组则灌胃蒸馏水。以肝胶原蛋白含量、肝组织形态及血清中肝纤维化标志物评价疗效。结果:蒿鳖养阴软坚方按方案1-1(水提低含量和醇提低含量)提取,24.48g/kg能明显降低肝胶原蛋白及血清透明质酸和IV型胶原水平(P<0.05),按方案3-2(水提低含量和醇提高含量)提取,8.16g/kg能降低肝胶原蛋白及明显降低血清透明质酸和IV型胶原水平(P<0.05)。结论:对有效成分含量的正交实验基础上以疗效指标进行药理筛选应作为确立复方提取工艺方案的最终依据。