DH-332促进TRIM40的表达及其通过ERK信号通路重塑代谢抑制胃癌细胞增殖迁移

目的 探讨DH-332促进TRIM40的表达及其通过ERK信号通路重塑代谢抑制胃癌细胞增殖迁移的机制。方法 选择胃上皮细胞系GES-1、GC细胞系BGC-823作为研究对象,Western blot检测TRIM40的表达情况。构建过表达TRIM40 BGC-823细胞,分为空载组、空载+TRIM40组(TRIM40组)、空载+DH-332组(DH-332组,DH-332浓度为8μmol/mL)、空载+TRIM40+DH-332组(实验组,DH-332浓度为8μmol/mL),采用CCK-8检测细胞的增殖情况;Transwell迁移实验检测细胞的侵袭情况;qRT-PCR法检测TRIM40、GLUT1、PKM2 mRNA水平;Western blot检测TRIM40、GLUT1、PKM2、p-ERK1/2、ERK1/2的表达;ELISA检测乳酸含量、葡萄糖摄取率、ATP浓度。结果 (1)TRIM40在GES-1、BGC-823细胞的表达分别为0.68±0.09和0.24±0.05,差异有统计学意义(P<0.01);实验组的增殖速率明显低于空载组(P<0.01),实验组迁移的细胞数量较空载组相比,显著降低(P<0.01)。(2)实验组GLUT1 mRNA相对表达水平与空载组相比,显著降低(P<0.01),PKM2 mRNA相对表达水平较空载组明显降低(P<0.01)。(3)实验组在蛋白水平上TRIM40表达量显著高于空白对照组(P<0.01),GLUT1、p-ERK1/2蛋白表达量明显低于空载组(P<0.01);ERK1/2蛋白表达量在4组间差异均并无统计学意义(P>0.05)。(4)实验组乳酸含量、葡萄糖摄取率均低于空载组(P<0.01)。结论 DH-332能促进TRIM40表达通过ERK信号通路来抑制胃癌细胞的糖酵解反应,从而抑制胃癌的增殖侵袭及迁移,进而参与胃癌的治疗。

去氢骆驼蓬碱衍生物DH-332对人结肠癌细胞株HCT116体外侵袭能力的影响

目的:探讨去氢骆驼蓬碱衍生物DH-332对人结肠癌细胞株HCT116体外侵袭能力的影响。方法:不同浓度去氢骆驼蓬碱衍生物DH-332作用于人结肠癌细胞株HCT116后,采用细胞划痕,细胞黏附,Tran-swell侵袭实验检测去氢骆驼蓬碱衍生物DH-332对HCT116细胞体外迁移和侵袭力的影响。结果:不同浓度去氢骆驼蓬碱衍生物DH-332作用于HCT116细胞后,细胞划痕实验显示细胞迁移能力较对照组低;细胞黏附实验和Transwell侵袭实验显示DH-332作用后,细胞的黏附,侵袭能力降低,并呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。结论:去氢骆驼蓬碱的衍生物DH-332可以抑制人结肠癌细胞HCT116体外侵袭能力。

DH-332通过TRIM40/Raf-1/ERK1/2轴在胃癌中的作用和机制研究

目的:探讨DH-332通过TRIM40/Raf-1/ERK1/2调节胃癌(GC)的发生以及机制研究。方法:首先,检测了新疆医科大学第四附属医院30例GC患者及相应的癌旁组织和GCMKN-45细胞及正常胃上皮GES-1细胞中TRIM40 mRNA及其蛋白的表达水平;然后构建了干扰TRIM40的MKN-45细胞系,将DH-332处理MKN-45细胞或干扰MKN-45细胞的TRIM40后,通过qPCR、Western blotting检测TRIM40、Raf-1、ERK1/2和细胞周期关键蛋白CyclinD1、CDK2及糖酵解相关蛋白GLUT1、PKM2、HKII、LDHA mRNA及其蛋白的表达,通过糖酵解相关试剂盒检测细胞内葡萄糖、乳酸及ATP的含量,CCK-8检测MKN-45细胞的增殖能力,最后通过集落形成、TranswellTM和划痕实验检测MKN-45细胞的侵袭和迁移能力。结果:与相邻的癌旁组织和GES-1细胞相比,TRIM40 mRNA和蛋白在GC组织及GC细胞中低表达;与MKN-45细胞相比,DH-332能够促进MKN-45细胞TRIM40 mRNA及其蛋白的表达,抑制Raf-1、CyclinD1、CDK、GLUT1、PKM2、HKII、LDHA mRNA及其蛋白的表达,抑制ERK1/2蛋白的表达;与TRIM40-shN对照组相比,干扰TRIM40后,Raf-1、CyclinD1、CDK、GLUT1、PKM2、HKII、LDHA mRNA及其蛋白的表达升高,ERK1/2蛋白的表达升高;与MKN-45细胞相比,DH-332能够抑制MKN-45细胞葡萄糖的摄取、乳酸和ATP的生成,抑制其增殖和侵袭迁移能力;与TRIM40-shN对照组相比,干扰TRIM40后,MKN-45细胞葡萄糖的摄取、乳酸和ATP的生成增加,增殖和侵袭迁移能力也升高。结论:DH-332通过促进GC细胞中TRIM40的表达,抑制Raf-1/ERK1/2通路的发生,并且抑制糖酵解的发生及细胞的增殖和侵袭迁移,减缓GC的进展。