Hath1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的:构建携带Hath1基因的真核表达载体并转染神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),观察其在SH-SY5Y细胞中的表达。方法:从人全血中提取DNA,克隆Hath1基因,同时扩增绿色荧光蛋白(GFP)gfp基因;利用引物GFP-R和Hath1-F扩增融合基因gfp-Hath1,克隆至pMD18-T中;经XhoⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶酶切,构建重组表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1;转染SH-SY5Y细胞。结果:PCR扩增,融合基因gfp-Hath1扩增条带大小为2 023bp,表明成功扩增gfp-Hath1融合基因。经双酶切鉴定,成功构建真核表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1。采用间接免疫荧光技术在荧光显微镜下观察到5H-SY5Y细胞中有GFP表达。结论:本研究成功地使Hath1基因在SH-SY5Y细胞中得到表达,为转染耳蜗组织的实验及探索治疗耳聋新方法奠定基础。