用ROC曲线确定Hb-A2在地贫诊断中的界值

目的 :确定血红蛋白 A2 (Hb- A 2 )在α地中海贫血和β地中海贫血 (地贫 )诊断中的临界值 ,并进行敏感性、特异性和准确性的评估。方法 :采用同步盲法对 383例门诊例行产检的育龄夫妇进行 Gap- PCR、反向斑点杂交基因(RBD)诊断和 Hb- A2的定量测定。 Gap- PCR确诊的α地中海贫血 2 4 6例 ,其中α地中海贫血杂合子 12 2例为病例组 ,12 4例正常者为对照组。 RBD确诊的β地中海贫血 135例 ,其中 10 0例β基因缺陷的杂合子为病例组 ,35例正常者为对照组。确定最适合的临界值 ,并进行准确性、敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比评估。结果 :诊断α地中海贫血 Hb- A 2最适临界值为≤ 2 .3% ,敏感性 5 9.8% ,特异性 5 7.3%。诊断β地中海贫血最适临界值为≥ 3.8% ,其敏感性为 95 % ,特异性77.1%。Hb- A2的受试者工作曲线显示 Hb- A2在β地中海贫血诊断时曲线下面积大于α地中海贫血诊断时的曲线下面积。结论 :Hb- A 2在α地中海贫血筛查时临界值为≤ 2 .3% ,在β地中海贫血筛查中为≥ 3.8%。 Hb- A2的含量变化对β地中海贫血基因缺陷的敏感性和特异性较高 。

MCH、MCV、RDW-CV、HbA_2和红细胞脆性试验在地中海贫血和缺铁性贫血鉴别诊断中的应用

目的:探讨平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、血红蛋白A_2(Hb A_2)和红细胞脆性试验在地中海贫血和缺铁性贫血鉴别中的价值。方法:以地中海贫血基因诊断和血清铁蛋白测定作为确诊地中海贫血和缺铁性贫血的分组依据,选择2012年1月1日至2014年12月31日广州军区总医院经分子生物学和血清铁蛋白检测的156例患者为研究对象,将其分为地中海贫血组115例(其中α地中海贫血77例,β地中海贫血37例,α地中海贫血复合β地中海贫血1例)和缺铁性贫血组41例;比较患者的MCH、MCV、RDW-CV、Hb A_2和红细胞脆性等血液学指标,采用ROC曲线评价鉴别地中海贫血和缺铁性贫血的血液学指标,试找出最适合鉴别这2种贫血的截断值(cut-off值),以截断值计算上述血液学指标鉴别这2种贫血的灵敏度、特异性、预测值与准确率。结果:地中海贫血患者与缺铁性贫血患者的MCH、MCV和红细胞脆性差异有统计学意义(P<0.05),RDW-CV差异无统计学意义(P>0.05)。MCH、MCV和红细胞脆性的ROC曲线下面积依次为0.641、0.654、0.778,其最佳截断值分别为23.65 pg、72.8 f L、43.5%;MCH、MCV和红细胞脆性试验在鉴别地中海贫血和缺铁性贫血中的灵敏度分别为89.84%、83.94%、80.42%。Hb A_2在α地中海贫血患者与缺铁性贫血患者间差异无统计学意义(P>0.05);Hb A_2在β地中海贫血患者与缺铁性贫血患者间差异有统计学意义(P<0.001),Hb A_2在ROC曲线下面积为0.925,最佳截断值为2.93%,鉴别β地中海贫血和缺铁性贫血的灵敏度为92.50%。结论:用MCH、MCV、Hb A_2、红细胞脆性试验最佳截断值对鉴别地中海贫血和缺铁性贫血有一定的价值;Hb A_2在鉴别α地中海贫血和缺铁性贫血中无意义;Hb A2鉴别β地中海贫血和缺铁性贫血的灵敏度高。

血红蛋白F与血红蛋白A2之间的交叉互作

目的我们曾经用淀粉-琼脂混合凝胶电泳证明成人血红蛋白A1与A2发生交叉互作,当时未对胎儿血红蛋白F进行研究。现在,再用这种方法研究血红蛋白F与血红蛋白A2是否也有相互作用。方法由脐带血分离红细胞,再用淀粉-琼脂糖混合凝胶电泳制备纯的血红蛋白F,然后让血红蛋白F穿过成人红细胞溶血液,观察穿过溶血液后血红蛋白A2区带变形情况。结果血红蛋白F穿过成人红细胞溶血液中的血红蛋白A2时,后者变形,与游离血红蛋白F相比,进入溶血液中的血红蛋白F泳速稍慢。结论血红蛋白F与血红蛋白A2也能发生交叉互作。

红细胞外HbA_2与HbA间的相互作用

1.为了阐明血红蛋白A_2现象的发生机制,研究了红细胞外Hb A_2与HbA有无相互作用。结果表明,这些血红蛋白在离开红细胞后仍能发生相互作用。 2.我们是用交叉电泳来验证这个问题,主要实验结果如下: (1)单向交叉电泳结果表明,溶血液HbA穿过另一溶血液的Hb A_2时,出现明显的交叉电泳图象。 (2)双向交叉电泳实验使上述结果更加明确。 (3)用提纯的Hb A做实验,证实了Hb A与Hb A_2间的相互作用。 (4)血浆白蛋白穿过Hb A_2、Hb A及CA时,没有看到交叉电泳图象。说明Hb A与Hb A_2之间的作用是特异的。 4.初步结论,不仅在缸细胞中Hb A_2是与Hb A结合存在,就是在离开红细胞的条件下,这两种血红蛋白之间仍能发生相互作用。我们认为,这就是血红蛋白A_2现象的发生机制,很可能如此。

人红细胞内血红蛋白与硫氧还蛋白过氧化物酶2的相互作用

目的研究人红细胞内硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prx2)与血红蛋白(Hb)的相互作用。方法首先利用红细胞Hb再释放试验分离红细胞和溶血液电泳释放的4个区带,即Hb A、Hb A2、Hb A与Hb A2之间(Hb A-A2)及再释放Hb,将这些区带分别切下,通过反复冻融获得各区带所含蛋白;用葡聚糖G-25浓缩后再利用SDS-PAGE分离各区带所含蛋白组分,并用抗-Prx2做免疫印迹分析;最后用微量热泳动试验(MST)分别检测Prx2蛋白与Hb A和Hb A2之间的结合常数。结果红细胞电泳释放的区带Hb A、Hb A2、Hb A-A2及再释放Hb中均有Prx2;而溶血液电泳释放的Hb区带中,除Hb A2外其余各Hb区带中均有Prx2。MST检测显示,Prx2蛋白与Hb A的结合常数(Kd值)为(14±1.08)μmol/L,而与Hb A2之间的Kd值未被检测到。结论 Prx2与Hb A之间存在相互作用,但与Hb A2之间可能没有相互作用。

血红蛋白E病中血红蛋白A2和血红蛋白F水平及其分布研究

目的了解血红蛋白E(Hb E)病中血红蛋白A2(Hb A2)和血红蛋白F(Hb F)水平及其分布规律。方法选择Hb E病样本170例,以基因分析结果分为Hb E杂合子组、Hb E纯合子组、Hb E合并α地中海贫血(简称地贫)组和Hb E合并β地贫组。采用毛细管电泳法分析Hb A2及Hb F的水平及其在各组的分布情况。结果Hb E杂合子组125例,Hb E纯合子组5例,Hb E合并α地贫组21例,Hb E合并β地贫组19例,四组的Hb A2平均水平分别为(3.66±0.38)%、(9.64±0.76)%、(3.70±0.37)%和(5.83±1.49)%。Hb E纯合子组和Hb E合并β地贫组的Hb F水平分别为(5.22±3.90)%和(36.81±13.97)%。Hb E合并β地贫组和Hb E纯合子组Hb A2水平主要落在高值区域(Hb A2≥4.0%),其他两组主要是低值(2.5%<Hb A2≤3.5%)或中值(3.5%<Hb A2<4.0%)区域。Hb E合并β地贫组的Hb F水平分布在高值区域(Hb F≥10.0%),其他三组的Hb F水平在低值区域(Hb F≤3.0%)。结论在Hb E病中,Hb A2和Hb F的水平及其分布频率因基因型不同而不同,一般随着疾病严重程度而升高。

构建ROC曲线确定Hb A2筛查β地中海贫血的临界值

目的:通过构建ROC曲线,探讨血红蛋白(Hb)A2筛查β地中海贫血的临界值。方法:分析河源市妇幼保健院2016年1月至2017年8月进行地中海贫血筛查和地中海贫血基因诊断的1274例数据,将其分为正常对照组、α地中海贫血组、β地中海贫血组和α复合β地中海贫血组。以Hb A2不同的临界值计算筛查β地中海贫血敏感度、特异度,再绘制Hb A2筛查β地中海贫血的受试者工作曲线。结果:本研究中有184例β地中海贫血,平均Hb A2含量为(5.29±0.66)%,基因类型分布频率由高到低依次为IVS–Ⅱ–654、CD4–42、CD28、CD17、CD26、CD27–28、CD14–15、CD29,5例Hb E病毛细管电泳结果出现Hb E,且Hb E含量较高;α地中海贫血复合β地中海贫血主要表现为Hb A2增高,平均Hb A2的含量为(5.29±0.62)%。通过构建ROC曲线获得本实验室Sebia全自动毛细管Hb电泳系统对β地中海贫血筛查的最佳临界值为≥3.85%。结论:从ROC曲线下面积可知,Sebia全自动毛细管电泳系统对于β地中海贫血的筛查具有较高的准确性,其Hb A2的截断值为≥3.85%。

应用NCCLS EP5-A2文件对AU5811全自动生化仪进行精密度性能评价

目的对AU5811全自动生化仪进行精密度性能评价,以确定其是否满足临床需要。方法利用配套试剂的校准品和质控品,根据NCCLS EP5-A2文件的要求对AU5811全自动生化仪测定糖化血红蛋白的项目进行精密度性能评价。结果 AU5811全自动生化仪测定糖化血红蛋白的项目的高值和正常水平校准品的批内精密度CV%分别是0.83%、1.1%;批间精密度CV%分别是1.25%、2.19%;日间精密度CV%分别是1.5%、2.74%;总精密度CV%分别是1.66%、3.29%。结论所有精密度CV%均在可接受范围内,AU5811全自动生化仪精密度性能可满足临床需要。

血液学指标联合HPLC方法在育龄人群地中海贫血筛查中的价值

目的探讨联合应用血液学指标和高效液相色谱(HPLC)方法对育龄人群进行地中海贫血(简称地贫)筛查的价值。方法选取2013-2015年参加广州市出生缺陷干预工程的育龄夫妇4 471例,经地贫基因检测,地贫携带者2 388例作为地贫组,其余2 083例为非地贫组,比较MCV、MCH和Hb A2单项指标和联合指标在地中海贫血筛查中的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率。结果地贫组的MCV、MCH水平低于非地贫组,差异有统计学意义(P<0. 05)。以MCV、MCH和Hb A2单独作为筛查指标时,Hb A2的筛查灵敏度低于MCV和MCH,差异有统计学意义(P <0. 05);MCV和MCH的灵敏度比较差异无统计学意义(P> 0. 05);MCH的阳性预测值和诊断符合率均高于MCV,差异有统计学意义(P <0. 05)。MCV+MCH+HbA2联合筛查,在筛查β地贫时灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均高于α地贫,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 MCV和MCH是筛查地贫的有效方法,简单、经济、有效,适合基层医院开展地贫筛查。Hb A2是地贫分型的主要指标,MCV+MCH+HbA2是筛查β地贫的最佳指标。血液学指标联合HPLC方法适合用于大人群筛查。