一种快速检测HbCS和HbQS点突变的PCR新方法

【目的】建立一种快速的PCR基因诊断方法,用以检测中国人常见的非缺失型α地中海贫血HbCS和HbQS。【方法】根据突变扩增系统(ARMS)的基本原理,自行设计了一套含4条等位特异性引物的PCR反应体系(4P-ASPCR法),分别用以检测中国人常见的HbCS和HbQS的点突变类型。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法和DNA序列分析对检测结果进行验证。【结果】该方法检测到的HbCS突变、HbQS突变,与PCR-酶解法和DNA序列分析得出的结果一致。【结论】该新型PCR法检测HbCS和HbQS点突变快速、准确,适于推广应用,该设计思路亦可用于检测其它点突变。

低温条件下沉积的氮化硅薄膜对非晶硅薄膜钝化性能的影响分析

采用微波远程等离子体增强化学气相沉积(PECVD)设备,开展低温条件下(≤200℃)氮化硅(SiNx)薄膜沉积工艺的研究。在n型单晶硅片双面沉积i型非晶硅(a-Si:H)和n型微晶硅(μc-Si:H)薄膜后,再双面沉积SiNx薄膜。研究了SiNx薄膜沉积工艺中加热温度、硅烷(SiH4)与氨气(NH3)比例、微波功率等工艺参数对硅片少子寿命和一个标准太阳强度下潜在的开路电压(one sun implied open circuit voltage,iVoc)的影响,得到了最佳工艺参数:加热温度160℃、SiH4与NH3比例0.33、微波功率3600W。在该工艺条件下,沉积SiNx薄膜后,硅片平均少子寿命从4261μs上升至6570μs,提升幅度54.2%; iVoc从0.7513V上升至0.7603V,提升了0.009V;将沉积了SiNx薄膜的硅片浸入质量分数10%的氢氟酸(HF)溶液中进行耐腐蚀性测试,腐蚀速率约为1.25nm/s。

CS型血红蛋白H病复合β地中海贫血的实验研究

目的 探讨血红蛋白H病复合β地中海贫血 ( β 地贫 )的实验诊断。 方法 用血红蛋白电泳对患者作血红蛋白组份定量测定 ,红细胞形态观察协助鉴别诊断 ,PCR扩增作α与 β地贫基因分型 ,DNA测序用于检测αCS 基因突变位点。结果 先证者血红蛋白电泳检出微量HbBart’s与HbConstantSpring(HbCS) ,但未发现HbH带 ,常法PCR扩增仅检测 SEA基因与ⅣS Ⅱ 6 5 4位点突变双杂合子 ,DNA测序结果显示 ,无缺失的α珠蛋白基因上αCS 位点存在T→C突变 ,临床表现为血红蛋白H病。结论 血红蛋H病复合β 地贫时可检测不到HbH( β4 )区带。HbA2 的准确定量分析与红细胞形态的仔细观察有助于该病的分析。该病的发现 ,为认识我国地贫的高度异质性提供了新的资料 。

抗HBc时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的 用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)方法。方法 以基因重组HBcAg包被板 ,Eu3 + -异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 (Eu3 + DTTA)标记抗HBc IgG单克隆抗体 ,建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果 方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 6 30 % ,回收率为 96 72 % ,灵敏度为 0 2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应 ,Eu3 + 标记物稳定 6个月以上。结论 TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗HBc

以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体的构建

目的 构建以HBVHBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达质粒 ,以探讨HBV基因免疫的新途径。方法 PCR扩增HBc第 1～ 72aa及 93～ 183aa编码序列并定向克隆至pcDNA3.1的NheⅠ /XhoⅠ位点 ,构建真核表达载体pHBcdM。合成HBV多表位基因并插入HBc原脊区基因位点 ,构建HBc Mep融合基因真核表达质粒。经PCR、酶切及序列测定等方法筛选阳性质粒。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 885bp、编码HBc与HBV多表位的复合基因。结论 成功构建了以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体pHBc Mep ,为研究pHBc Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。

内标荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒定量中的应用

目的 建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA ,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制。方法 在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上 ,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率。结果本检测方法具有很好的特异性、重复性 ,检测敏感度达到 1× 10 3 copies/ml。经过对 382例乙肝患者标本测定证实 ,标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出率为 10 0 % ,标志物为HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出率为 72 .0 % ,与Roche试剂比较 ,两者的相关系数为 0 .987。结论 本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度。

双阳性孕妇的婴儿经母婴联合阻断后血清乙型肝炎病毒标志物的表现模式

目的 探讨双阳性孕妇的婴儿经母婴联合免疫阻断后血清乙型肝炎病毒标志物 (HB VM)的模式及意义。方法 2 5 0例HBsAg(+) /HBeAg(+)孕妇自孕 2 8周起注射高效价乙肝免疫球蛋白 (HBIG) 2 0 0IU ,共 3～ 6次 ;新生儿 0、15d各注射HBIG 2 0 0IU ,然后于 1、2、7个月龄各接种乙肝疫苗 (HBVac) 2 0 μg。母儿血清HBVM检测采用美国Abbott酶联免疫试剂 ,婴儿于出生后 0、1、7、12个月抽血检查HBVM。结果 138例婴儿随访满 1年 ,宫内感染 4 4例 ,其中免疫失败 8例 ,占5 80 % ,HBVM均表现为HBsAg、HBeAg、抗HBc三项阳性。而免疫成功者共 12 4例 ,HBVM模式可有多种表现。其中抗HBs、抗HBc两项阳性者最多 ,占 5 3 6 2 % ;其次为单项抗HBs(+) ,占 2 8 98% ;再次为抗HBs、抗HBe、抗HBc三项阳性 ,占 7 2 5 %。HBsAg低滴度伴抗HBs(+)和HBVM全阴性者为数极少。结论 经母婴联合阻断免疫失败的主要原因是宫内感染。获免疫成功的婴儿的HB VM可有多种模式 ,只有具体分析各种模式的意义 ,才能客观评价阻断效果 ,并及时对婴儿加强疫苗接种或进行免疫干预治疗。

HBC低热高抗裂大坝混凝土的开发研究

在"九五"国家科技攻关项目"高贝利特(HBC)新型胶凝材料研究"的基础上,进行了HBC低热高抗裂大坝混凝土的开发研究,通过与三峡二期大坝中热水泥(MHC)混凝土的平行对比试验,初步论证了HBC大坝混凝土具有良好的工作性、力学性能和耐久性能。HBC大坝混凝土在相同配合比下的绝热温升将降低3～5℃;抗裂性分析表明,HBC大坝混凝土具有良好的抗裂能力,是一种可以在水工大体积混凝土工程中推广应用的新型低热高抗裂大坝混凝土。

斑点金免疫渗滤法测定人全血中抗HBc抗体

目的：建立一种适合斑点金免疫渗滤法（Ｄｏｔ Ｉｍｍｕ ｎｏ ｇｏｌｄＦｉｌｔｒａｔｉｏｎＡｓｓａｙＤＩＧＦＡ）特点的快速全血诊断方法。方法：选择可瞬间分离血中细胞和血清的膜，依据ＤＩＧＦＡ的原理对３３份ＨＢｃＡｂ阳性血样和４８份阴性血样进行了全血抗ＨＢｃＡｇ抗体的检测。结果：测定阳性标本符合率为９６．７％，阴性标本符合率为１００％。结论：提供了一种简便、快速、可行的全血检测抗ＨＢｃＡｇ抗体的方法。

乙型肝炎患者血清中抗HBc-IgM的临床意义

抗HBc-IgM在鉴别急性乙肝、慢性乙肝及慢性乙肝急性发作中的意义。应用亚培试剂盒检测抗HBc-IgM,追溯120例抗体阳性患者的临床诊断和各临床类型的抗体滴度水平分布,同时统计急性乙肝、慢性乙肝和慢性乙肝急性发作共240例患者的抗HBc-IgM检测结果,比较其抗体阳性率和滴度水平之间的差异。抗HBc-IgM阳性率,急乙肝组明显高于慢乙肝组和慢乙肝急性发作组。抗体滴度<2.0者,慢乙肝组和慢乙肝急性发作组的百分率明显高于急肝组。抗体滴度的检测对鉴别急乙肝和慢乙肝急性发作有较大的意义。

淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。

蓝舌病毒HbC株与不同种系细胞相互作用及群特异性抗原特征

BTV HbC株和蓝舌病毒标准株BTV 10分别接种在不同种系细胞如猴肾传代细胞 (Vero)、人宫颈癌细胞(Hela)和小鼠神经胶质瘤细胞 (C6)等细胞株上 ,比较研究了BTV HbC在不同种系细胞上的增殖特征 ,BTV HbC与BTV 10在相同细胞上的复制增殖特征 ,病毒与细胞相互作用的显微和超微结构特征。用免疫交叉反应研究了BTV HbC株与BTV 10型标准株之间的血清学关系。本研究结合本室对BTV HbC株基因组图谱分析和蓝舌病毒群特异性抗原编码基因S7的RT PCR分析 ,进一步证实了BTV

原发性肝癌与HBV感染的关系探讨(附220例分析)

目的 探讨原发性肝癌 (PHC)的发生与乙肝病毒 (HBV)感染之间的关系。方法 采用放射免疫法对福建泉州地区 2 2 0例原发性肝癌患者、2 2 0例良性肝病患者与 2 95例健康人群进行血清 HBV标志物 (HBVM)检测。结果 PHC组 HBV感染率达 94 .5 5 %、HBs Ag阳性率 89.0 9% ,P均 <0 .0 0 5 ;PHC组血清 HBVM感染模式以HBs Ag、抗 HBe和抗 HBc阳性模式多见 ,HBs Ag和抗 HBc阳性次之 ;HBs Ag、 HBe Ag和抗 HBc阳性相对较低 ;HB-s Ag阳性病例发生 PHC以 30～ 5 9岁居多 (77.5 % ) ;HBs Ag阴性病例 ,则多见于 5 0～ 6 9岁 (6 6 .6 7% )。结论 PHC的发生与 HBV感染关系密切 ,HBV感染是本地区发生 PHC的主要病原学因素之一。

乙型肝炎表面抗原检测技术演变及对隐匿性乙型肝炎病毒感染实验室检测的思考

乙型病毒性肝炎（简称“乙肝”）的临床类型包括急性和慢性乙型肝炎，并与肝硬化、肝癌和肝衰竭等并发症的发生密切相关，严重危害人类健康[1]。我国曾为乙肝的高流行区。为控制乙肝，我国自1992年开始实施新生儿乙肝疫苗免疫策略，并于2009～2011年开展对15岁以下人群乙肝疫苗的查漏补种工作。根据中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会统计，1992～2009年，我国共有9200万人通过接种乙肝疫苗免受了乙型肝炎病毒（HBV）的感染，其中预防慢性HBV感染2400万人，减少肝硬化和肝癌等引起的死亡430万人。然而，最新统计数字显示，我国乙型肝炎表面抗原（HBsAg）携带者仍约有9300万人，且每年新发HBV感染者达10万之多。全球每年乙肝相关死亡的病例中，近半数来自于中国。因此，在未来相当长时间内，乙肝及其相关疾病仍是我国面临的主要健康问题之一。

高贝利特水泥高性能混凝土性能的研究

本文对高贝利特水泥(简称HBC)混凝土的工作性能、力学性能和耐久性能进行了研究,试验结果表明,和通用硅酸盐水泥混凝土相比,HBC混凝土表现出良好的工作性能和耐久性能;在力学性能方面,HBC混凝土早期抗压、抗折和劈拉强度偏低,28d基本与之持平,90d则超过通用水泥混凝土,表现出较好的后期强度增进率和优异的抗折、抗拉性能。

HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株nepG2细胞内表达情况。方法将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞,通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光,而未转染质粒或转染pcDNA3.1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-hot结果显示表达产物约为33kDa,并能与抗preS2多抗特异性结合。结论HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。

对携带HCC表位的HBc病毒样颗粒负载的DC疫苗的免疫评价

目的:探讨携带肝细胞癌(HCC)表位的嵌合蛋白颗粒HBc-VLPs负载小鼠BMDCs制备的DC疫苗,免疫小鼠后诱导抗原特异的细胞免疫应答和抗肿瘤效应。方法:制备HLA-A2转基因小鼠来源的BMDCs,将三种带有高表达于HCC的HLA-A2限制的CTL表位的HBc-VLPs、三种抗原表位肽和不含HCC表位野生HBc-VLPs分别负载HLA-A2转基因小鼠BMDCs制备成DC疫苗,阴性对照组用PBS替代。将HLA-A2转基因小鼠分为四组,分别免疫上述DC疫苗并对其免疫效果进行评价:体外检测抗原特异性淋巴细胞内IFN-γ的产生和CTL细胞活性并观察不同方法处理的DCs对肿瘤生长的抑制情况。结果:与其他组相比,HBc-VLPs负载的DCs免疫小鼠后第8天,流式细胞仪即可检测到分泌IFN-γ的CD8+T细胞存在;用LDH法检测到较强的抗原特异性CTL活性;在肿瘤接种后的20天之前均未见到明显的肿瘤块,具有显著抗肿瘤作用。结论:利用携带HCC抗原表位的HBc-VLPs负载DCs后得到可强烈诱导免疫活性和明显抗肿瘤作用的DC疫苗,为DC疫苗的优化和评价提供了实验方法,也为进一步深入研究新型肝细胞癌治疗性疫苗的功能和应用奠定了基础。