盐胁迫下盐穗木DNA聚合酶λ基因的克隆和表达分析

【目的】开展盐胁迫下DNA损伤修复基因的表达研究,有助于揭示DNA损伤修复与盐生植物耐盐的相关性。【方法】根据盐胁迫下盐穗木转录组测序结果,利用RACE技术克隆获得了盐穗木DNA损伤修复基因HcDNA聚合酶λ(HcDNA polλ)基因,开放阅读框1 335 bp,编码444个氨基酸。【结果】保守结构域分析显示,HcDNA polλ基因属于DNA聚合酶X家族成员,系统进化分析显示HcDNA polλ为独立的分支,亚细胞定位于细胞核,无信号肽且不含跨膜区域的亲水蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,随着NaCl胁迫浓度的增加,同化枝的HcDNA polλ基因的表达逐渐上调,在300 mmol/L NaCl处理7和14 d时,HcDNA polλ的表达分别增加3和5倍。最后在700 mmol/L NaCl处理14 d时,HcDNA polλ的表达增加20倍,达到峰值。【结论】HcDNA polλ基因的表达受盐胁迫的诱导。

重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较

目的采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较。方法分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA,再进行核酸提取及qPCR检测。比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性。结果采用DNase处理的方式,DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量,DNase处理组为错误包装HCDNA量,二者差值为游离HCDNA残留量。DNase未处理和处理组回收率均为75%以上,重复性RSD小于30%。采用亲和提取方式,填料偶联亲和配基,结合rAAV,检测错误包装HCDNA回收率为75%以上,检测游离HCDNA回收率仅为36%。结论DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA,可为后续研究奠定基础。