小柴胡汤联合5-氟尿嘧啶治疗Hca—f肝癌小鼠实验研究

[目的]研究中医经典方剂小柴胡汤（以下简称xcht）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（以下简称5-Fu）对小鼠Hca—f肝癌的抑瘤作用及其免疫作用机制。[方法]无菌条件下抽取Hca—f腹水为瘤源，用生理盐水稀释为4x10。个瘤细胞／mL，每鼠予0．2mL于其右侧腋窝皮下接种。24h后随机分成单纯肿瘤组、xcht组、5-Fu组、xcht＋5-Fu组，给药10天后，处死小鼠，剥离并称量瘤重，计算抑瘤率；光镜下观察肿瘤细胞的形态；电镜下观察凋亡小体。[结果]xcht能抑制Hca—f小鼠体内肿瘤的生长，并能提高5－Fu对Hca—f肝癌小鼠的疗效。[结论]小柴胡汤与5－Fu联合用药对小鼠体内Hca—f肝癌细胞的生长有较好抑制作用，且疗效优于单独用药。

姜黄素对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)生物学行为的影响

目的研究姜黄素对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)生长和转移行为的影响.方法体外实验中用15～250 μmol/L姜黄素分别处理HCa-F细胞48 h,以MTT法检测HCa-F细胞的生长活性;以生长曲线评估姜黄素对细胞增殖的影响;以流式细胞仪检测姜黄素对细胞周期分布的影响.体内实验中,于615小鼠腹腔、足垫接种HCa-F细胞,通过ip给药的方法,观察姜黄素对腹腔接种HCa-F细胞的615小鼠生存率的影响和对HCa-F细胞在615小鼠淋巴道转移的影响.结果姜黄素可抑制HCa-F细胞的生长,对HCa-F细胞生长抑制率为7.23%～82.23%,呈剂量依赖性,IC50为51.48 μmol/L.以非细胞毒性最大剂量15 μmol/L姜黄素作用48 h后,HCa-F细胞的群体倍增时间增加,生长速度受到抑制,细胞周期被重新分布,阻滞于S期.姜黄素ip给药50mg/kg抑制小鼠腹水瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期,使瘤细胞淋巴道转移率从70%下降到40%.结论姜黄素可抑制小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)的增殖与转移.

膈下逐瘀汤联合环磷酰胺诱导Hca-f肝癌小鼠细胞调亡的实验研究

目的:研究膈下逐瘀汤联合环磷酰胺(CTX)对Hca-f肝癌小鼠的抑瘤作用及其机制。方法:无菌条件下抽取Hca-f肝癌小鼠腹水,予生理盐水稀释,调细胞浓度为2×107个瘤细胞/mL,分别接种于每只小鼠右腋下皮部0.2 mL,24 h后随机分成模型组、CTX组、中药组、中药+CTX组,每组10只,给药8天后处死小鼠,剥离并称量瘤重计算抑瘤率。光镜下观察肿瘤细胞形态变化,电镜下观察凋亡小体。结果:膈下逐瘀汤联合环磷酰胺抑瘤率达到47.75%,能够有效诱导肿瘤细胞凋亡。结论:膈下逐瘀汤联合环磷酰胺对Hca-f肝癌小鼠有明显的抑瘤作用,其抑制肿瘤的可能机制是诱导肿瘤细胞凋亡。

L-选择蛋白可能介导小鼠肝癌HCa-F细胞经淋巴道转移的研究

目的 观察L 选择蛋白是否介导小鼠肝癌HCa F细胞与淋巴结黏附 ,探讨HCa F细胞特异性向周围淋巴结转移的分子机制。 方法 应用免疫细胞化学方法验证小鼠肝癌HCa F细胞为非淋巴细胞来源 ;用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测L 选择蛋白在HCa F细胞的表达 ;并用L 选择蛋白的抗体抑制HCa F细胞与冰冻淋巴结切片间的黏附实验 (Stamper Woodruffmethod)检测L 选择蛋白的功能。 结果 HCa F细胞为非淋巴细胞来源的肝癌细胞 ,在其表面有L 选择蛋白的表达 ,且HCa F细胞与淋巴结之间的黏附可被L 选择蛋白的抗体抑制。结论 非淋巴细胞来源的HCa F细胞表面表达功能性L 选择蛋白分子 ,并可协助其与淋巴结黏附 ,从而可能介导HCa F细胞向淋巴道转移。

榄香烯诱导肝癌腹水瘤细胞系Hca-F_(25)/CL-16A_3凋亡的实验研究

研究了榄香烯诱导肝癌腹水瘤细胞系ＨｃａＦ２５／ＣＬ１６Ａ３凋亡的作用。结果表明：凋亡抑制基因ｂｃｌ２在对照组呈高度表达，榄香烯作用后，可使强表达ｂｃｌ２细胞数显著减少（Ｐ＜０．０１）；ＤＮＡ凝胶电泳结果表明榄香烯可使ＨｃａＦ２５／ＣＬ１６Ａ３ＤＮＡ出现凋亡特征（呈慧星状或梯形条带）。提示榄香烯可能通过使ＤＮＡ断裂及抑制ｂｃｌ２表达而诱导该细胞株凋亡，榄香烯诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一。

巨噬细胞在榄香烯复合瘤苗对HCa-F的免疫效应中的作用

目的 :研究巨噬细胞 (Mφ)在榄香烯复合瘤苗 (EC -TCV)对小鼠肝癌HCa-F的免疫保护效应中的应用。方法 :榄香烯复合瘤苗主动免疫 3次 ,体内用多聚甲醛固定的HCa-F致敏后 3d检测腹腔巨噬细胞 (Mφ)的抗肿瘤细胞毒活性、一氧化氮 (NO)、细胞增殖活性的功能变化。结果 :与对照组比较 ,腹腔巨噬细胞(PEMφ)对HCa -F的细胞毒活性增强 ,而在NO产生和细胞增殖方面无明显差异。结论

L-选择蛋白在小鼠肝癌细胞高低转移株HCa-F、HCa-P的表达及与肿瘤转移潜能的相关性

目的 探讨经淋巴道转移的小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P淋巴道转移能力及与淋巴细胞归巢受体L 选择蛋白的相关性。方法 应用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测小鼠肝癌HCa F、HCa P细胞表面L 选择蛋白的表达情况 ,再通过E 、P 、L 选择蛋白的抗体对细胞粘附实验的影响检测HCa F、HCa P细胞淋巴道转移潜能与L 选择蛋白的相关性。结果 L 选择蛋白在HCa F、HCa P细胞表面均有表达 ,且HCa F细胞的表达量明显高于HCa P细胞 (P <0 .0 1) ,HCa F细胞与淋巴结之间的粘附可被抗L 选择蛋白的抗体所阻断。结论 小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P细胞均表达L 选择蛋白 。

榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca-F_(25)/CL-16A_3抗肿瘤作用机理的实验研究 Ⅲ.榄香烯对小鼠血清脂肪酸组分相对百分浓度变化的影响

用气相色谱法测定了正常及荷瘤小鼠血清脂肪酸组分的相对百分浓度，同时研究了榄香烯对荷瘤小鼠血清脂肪酸的影响。结果表明，荷瘤小鼠血清中十六碳一烯酸、十八碳二烯酸、十八碳三烯酸、二十碳五烯酸相对百分浓度均显著低于正常小鼠，榄香烯腹腔注射可使荷瘤小鼠血清中十八碳三烯酸含量显著增高，提示榄香烯可能通过影响血清中脂肪酸成分比例而影响肿瘤的生长。

硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤组织凋亡相关蛋白表达情况的研究

研究硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤组织凋亡相关抗体表达情况的影响。以615近交系小鼠右脚垫皮下注射肝癌细胞Hca-F建立实体瘤动物模型,设空白组、模型组、治疗组和预防组,检测小鼠肿瘤的生长以及硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤Bcl-2蛋白、细胞因子CyclinD1和p21蛋白、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9蛋白表达情况的影响。结果表明,硒酸软骨多糖对小鼠的肿瘤生长有抑制作用;治疗组和预防组Bcl-2蛋白的阳性表达率显著低于模型组,治疗组和预防组的CyclinD1、MMP-9和MMP-2蛋白的阳性表达率较模型组相比显著降低,而p21则显著升高。通过对Hca-F实体瘤组织凋亡相关蛋白表达的检测,说明硒酸软骨多糖能够有效地抑制小鼠肿瘤的生长,能够在一定程度上预防癌症的发生,对癌症的治疗有一定的效果。

青藤碱PLGA-TPGS纳米粒对HCa-F细胞在小鼠淋巴管内增殖及异位移植瘤的抑制作用研究

目的:研究青藤碱乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(SPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴管转移细胞HCa-F在小鼠淋巴管内增殖及异位移植瘤的抑制作用。方法:将HCa-F细胞悬液分别加入生理盐水、5-氟尿嘧啶溶液(FS)、青藤碱溶液(SS)、青藤碱PLGA纳米粒(SPN)和SPTN,使终质量浓度均为80μg/ml,采用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记;经小鼠一侧足垫注射各细胞悬液50μl,每组15只,分别于3、6、9、12、24 h用荧光倒置显微镜观察上述悬液对HCa-F细胞在小鼠体内淋巴管内增殖的抑制作用。取小鼠分为正常对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、生理盐水组、SPTN组、SPN组、SS组和FS组,每组10只,后6组小鼠建立荷HCa-F细胞的肝癌异位移植瘤模型,尾iv相应药物15 mg/kg,每日1次,连续给药10 d;检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)的含量;取出实体瘤,称量瘤质量和瘤体积,计算抑瘤率。结果:对HCa-F细胞增殖的抑制作用强弱依次为SPTN>SPN>FS>SS>生理盐水。与生理盐水组比较,SPTN组、SPN组、SS组和FS组小鼠血清中ALT、AST、γ-GT、TBIL水平降低,ALB水平升高(P<0.05);SPTN组、SPN组和FS组小鼠的瘤体积增长量和瘤质量明显降低(P<0.05),抑瘤率依次为49.62%、40.53%、33.90%。结论:SPTN可抑制HCa-F细胞在小鼠淋巴管内的增殖,能改善荷HCa-F细胞小鼠肝癌异位移植瘤,且效果优于SPN和FS。

NF-κB抑制剂PDTC对小鼠肝癌细胞生长的影响

[目的]观察核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对小鼠肝癌Hca-F细胞生长的影响。[方法]用含PDTC的完全培养基体外培养Hca-F细胞,用MTT法测Hca-F细胞增殖抑制率。体内实验中所有小鼠均接种Hca-F并随机分为两组:攻击对照组腹腔注射生理盐水,PDTC治疗组腹腔注射PDTC溶液,每天测量肿瘤体积和体重。治疗后第10天处死小鼠,取肿瘤组织。用MDA试剂盒测定瘤组织MDA含量,用放射免疫法测定肿瘤组织TNF-α的含量。[结果]PDTC在体外可抑制Hca-F增殖,浓度为25μg/mL时细胞增殖抑制率为85.4%。体内实验中PDTC治疗组小鼠肿瘤体积及重量、瘤组织匀浆MDA和TNF-α含量,与对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。[结论]PDTC在体外对肝癌细胞增殖有抑制效应。

应用表达芯片筛选小鼠肝癌淋巴道转移相关基因

目的采用表达芯片比较高、低淋巴道转移力小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F和Hca-P的基因表达谱,以筛选出与肿瘤淋巴道转移相关的基因。方法分别提取Hca-F和Hca-P细胞的总RNA,反转录合成生物素标记的cRNA探针,并与A ffy-m etrix GeneCh ip MOE430A(包括22 690个转录本,对应于约14 500个小鼠已知基因和4 371个EST)杂交,检测结果利用生物信息学进行分析。结果Hca-F和Hca-P相比,在14 500个已知基因中,有901个(6.2%)表达上调幅度≥2倍;在4 371个EST中,有129个(3%)上调幅度≥2倍。公布了差异表达≥8倍的37个基因并根据Gene Ontology(GO)分类和TreeV iew分析,按照其参与的生物学过程和具有的分子功能进行了功能分类。其中有19个基因参与了组织发生、细胞黏附、信号转导、细胞生长、分化及代谢等的生物学过程,29个基因分别具有转运、移动、蛋白激酶、蛋白结合及受体活性等分子功能,7个基因的生物学功能尚不清楚。结论表达芯片检测与肿瘤淋巴道转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供新方法、新思路,一些过量表达的基因将为肿瘤转移机制的研究提供新线索。

小鼠腹水型肝癌高低转移细胞株DARS2蛋白表达的差异

[目的]研究具有高、低转移潜能的小鼠腹水型肝癌细胞株Hca-F与Hca-P中线粒体的天门冬氨酰转移核糖核酸合成酶(DARS2)蛋白表达的差异。[方法]将Hca-F细胞与Hca-P细胞分别接种于615小鼠腹腔,抽取腹水,培养后收集细胞;用免疫印迹分析及免疫细胞化学方法检测Hca-F与Hca-P细胞的DARS2蛋白表达。[结果]DARS2在高转移细胞株Hca-F与低转移细胞株Hca-P表达量分别为(0.219±0.016)与(0.473±0.043),二者比较差异有显著性意义(P=0.01)。[结论]DARS2蛋白表达降低可能与小鼠肝癌转移相关。

顺铂对肝癌细胞凋亡及其细胞周期的影响

目的 :探讨顺铂对Hca F细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 :采用荧光 ,透射电镜及流式细胞术分析法检测肝癌细胞凋亡 ,细胞周期和增殖指数 (PI)的变化。结果 :CDDP可引起肿瘤细胞凋亡 ,并随着给药时间的延长、药物浓度的增高 ,细胞凋亡率随之增高 ,细胞凋亡形态结构越发典型 ,表现为核固缩 ,染色质边集 ,核小体形成等。同时药物浓度的升高 ,细胞周期S期比例下降 ,G0 /G1期比例上升 ,PI增殖指数下降。结论 :CDDP可引起细胞凋亡、细胞周期G0 /G1期阻滞 。

槲皮素PLGA-TPGS纳米粒对小鼠肝癌异位实体瘤治疗效果的研究

目的考察槲皮素PLGA-TPGS纳米粒(QPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞HCa-F小鼠异位移植实体瘤的治疗效果。方法建立荷HCa-F肝癌细胞小鼠模型后,随机分为阴性对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、槲皮素溶液(QTS)组、槲皮素PLGA纳米粒(QPN)组和QPTN组。尾静脉给药,每2 d 1次,连续给药20 d后处死小鼠,剥离肿瘤,称质量,测量肿瘤体积,根据公式计算肿瘤体积增长量和抑瘤率;行HE染色观察肿瘤,全面评价QPTN对荷瘤小鼠的治疗效果。结果小鼠体内给药10次后,QPTN组、QPN组、FS组的肿瘤体积增长量与阴性对照组相比明显减小(P<0.05或P<0.01),QPTN组抑瘤率(59.07%)明显高于QTS组(23.94%)、FS组(35.14%)和QPN组(46.14%)。HE染色结果也显示QPTN组对小鼠肿瘤的治疗效果最明显。结论与QPN、QTS和FS相比,QPTN对荷HCa-F肝癌细胞小鼠异位实体瘤具有较好的治疗效果。

枸杞多糖对肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其机制

目的研究枸杞多糖(LBP)对小鼠Hca-F肝癌的生长抑制作用及机制。方法建立小鼠Hca-F肝癌模型,腹腔注射不同浓度的枸杞多糖连续10d。称重检测枸杞多糖对肿瘤生长、脾脏和胸腺指数的影响;采用MTT法、ELISA法分析枸杞多糖对荷瘤小鼠脾巨噬细胞的吞噬活性、细胞因子分泌等免疫指标的影响。结果枸杞多糖对小鼠实体瘤生长具有抑制作用,枸杞多糖40mg·kg-1与对照组相比有显著差异(P<0.05);实验组小鼠脾指数和胸腺指数均高于对照组。枸杞多糖40mg·kg-1即可明显促进IL-2的产生,降低VEGF蛋白的表达。结论枸杞多糖对Hca-F肝癌小鼠肿瘤生长有抑制作用,可能与提高荷瘤小鼠细胞和分子免疫活性有关。

人参皂甙Rg3抑制小鼠肝癌淋巴道转移作用及其对免疫功能的影响

目的:观察人参皂甙Rg3抑制小鼠肿瘤生长及抗淋巴结转移的作用及对免疫功能的影响。方法:以Hca-F25//6A3-F(F)接种于615近交系小鼠,建立肝癌淋巴道转移动物模型,分为5组:Rg3预防组(接种肿瘤前给Rg3)、Rg3治疗组(Rg3)、阳性对照组(PDD)、联合治疗组(Rg3+PDD)和阴性对照组(生理盐水),比较各组的原发瘤抑制率和转移淋巴结抑瘤率,并通过流式细胞仪方法分析各组免疫指标CD4/CD8的变化。结果:联合治疗组原发瘤的抑瘤率明显提高,与阴性对照组相比具有统计学上明显差异(P<0·05);淋巴结转移抑制率含Rg3组均较阴性对照组高;Rg3预防组和Rg3治疗组CD4/CD8比值与阴性对照组相比升高,具有统计学上明显差异(P<0·05)。结论:人参皂甙Rg3具有明显的抗肿瘤作用,可以增强化疗药物PDD的抗癌作用,及抑制淋巴道转移作用,并提高荷瘤小鼠免疫功能。

脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒的体外细胞摄取及毒性研究

目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)体外被人肝癌Hep G2细胞、小鼠腹水型高淋巴道转移肿瘤HCa-F细胞的摄取情况和对Hep G2细胞的毒性。方法:制备包载RBG和荧光标记物香豆素6的PLGA-TPGS纳米粒(RCPTN),荧光倒置显微镜观察Hep G2、HCa-F细胞对RCPTN的体外摄取情况。将试验分为阴性对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、RBG溶液(RS)组、RBG/PLGA纳米粒(RPN)组、RPTN组,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同终质量浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/m L)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后Hep G2细胞在450 nm波长下的光密度,计算细胞存活率(CV)和半数抑制浓度(IC_(50))。结果:RCPTN分布在Hep G2、HCa-F细胞的细胞核周围。RPN组和RPTN组细胞的CV随RBG浓度增加而减小,随作用时间延长而减小;与FS组比较,RPTN组细胞的CV均减小(P<0.05或P<0.01)。FS、RS、RPN和RPTN作用于Hep G2细胞的IC_(50)随时间的延长而减小,且IC_(50)的大小依次为RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC_(50)明显小于FS与RS(P<0.05或P<0.01)。结论:RPTN可将RBG带入Hep G2、HCa-F细胞内部,其对Hep G2细胞具有抑制作用,且作用强于RPN、RS和FS。

温热顺铂对肝癌细胞的杀伤效应及其诱导凋亡的研究

目的 探讨温热 ＣＤＤＰ对 Ｈｃａ－Ｆ细胞的生长抑制、温度与药效的关系以及诱导凋亡的作用。方法 采用ＭＴＴ法，透射电镜，ＤＮＡ电泳以及流式细胞术分析法。结果ＣＤＤＰ对Ｈｃａ－Ｆ细胞有明显的细胞毒性，其ＩＣ５０值为０．５７μｇ／ｍｌ。ＣＤＤＰ合并高温（＞４１℃）加热明显提高了ＣＤＤＰ的杀伤力，二者之间存在着协同增敏作用。其作用强度呈现对药物浓度、作用时间与加热温度的正相关性，且在一定浓度范围内以谤导肿瘤细胞凋亡的发生为主。结论 加热（＞４１℃）顺铂提高了顺铂的细胞毒性。诱导细胞凋亡的发生是其抗肿瘤作用的主要机制之一。

IL-6治疗小鼠肝癌的实验研究

本实验采用ＩＬ－６及ＩＬ－６ＭＭＣ瘤苗联合治疗ＭＭＣ－Ｉ类抗原阴性的Ｈ２２高转移亚系Ｈｃａ—Ｆ。第０天给小鼠皮下接种１×１０６个Ｈｃａ—Ｆ，第３天起每日注射ＩＬ—６达７天，并于第３天和第８天注射ＭＭＣ－Ｈｃａ－瘤苗，结果Ｈｃａ－Ｆ的生长受到抑制，抑瘤率达５８．９％（Ｐ＜０．０５）。