基于全基因组重测序分析大尾寒羊基因组变异特征和群体结构

旨在了解大尾寒羊基因组遗传变异特征和群体结构,可以为更好地保护和利用大尾寒羊提供指导。本研究对170只(66只公羊,104只母羊)大尾寒羊进行了全基因组重测序,利用GATK、Manta、Plink等软件对大尾寒羊基因组遗传变异、群体结构和连锁不平衡等进行了分析,以期了解大尾寒羊基因组变异特征和群体结构。测序共获得1599.56 G高质量数据(平均9.409 G·只^(-1))。大尾寒羊群体中共发现50276079个SNPs和7240540个InDel,它们多分布于基因间和内含子区域。群体的基因组结构性变异(SV)最多的类型为染色体间的易位(CTX),平均每只羊有415.82个CTX,主要分布在基因间区域;发生拷贝数变异(CNV)最多的区域在外显子,平均每只羊有175个。主成分分析显示,大尾寒羊个体较分散,聚集不集中。结合亲缘关系、系统发育树和群体结构,将大尾寒羊分为6个家系,各家系含量差别较大,体型有差异。群体聚类分析中发现有些个体祖先成分较为单一。群体连锁不平衡(LD)分析显示LD衰减速度快,群体遗传多样性较高。驯化中受选择的基因主要与脂质代谢和产热有关。综上,大尾寒羊群体包含6个家系,遗传多样性较丰富,保种效果良好,建议对小家系进行扩繁,大家系注意减少近交,确保家系结构平衡,同时注重大尾寒羊的开发和利用。

miR-150靶向AOC3调控绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在通过探究miR-150与AOC3的靶标关系,揭示miR-150在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化过程中的作用机制。本研究以3只5日龄发育正常且健康的广灵大尾羊公羊为试验材料,采用qPCR方法检测广灵大尾羊皮下、肾周和尾部脂肪组织中miR-150的表达量;采集广灵大尾羊的尾部脂肪组织并分离绵羊前体脂肪细胞;通过细胞免疫荧光技术鉴定细胞纯度;利用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告试验验证miR-150与AOC3的靶标关系;转染miR-150 mimics和inhibitors并检测AOC3和成脂分化标志基因的表达情况;构建并转染绵羊AOC3基因的过表达和干扰载体至绵羊前体脂肪细胞,利用qPCR和Western blotting检测miR-150与AOC3在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;油红O染色检测成脂能力,上述试验方法均设立3个生物学重复。结果表明,miR-150在3个不同部位脂肪组织中尾部脂肪表达量最高,差异极显著(P<0.001)。与对照组相比,过表达miR-150后,AOC3基因和成脂标志基因的表达显著下调(P<0.05),且脂滴生成减少,抑制了绵羊前体脂肪细胞分化;抑制miR-150后,结果相反。miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,miR-150极显著降低了AOC3野生型的相对荧光活性(P<0.001)。过表达AOC3后,成脂分化标志基因的表达极显著上调(P<0.01),脂肪细胞产生了更多脂滴,AOC3促进了绵羊前体脂肪的分化;干扰AOC3后,结果相反。本研究表明,miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,在绵羊前体脂肪细胞分化的过程中,miR-150与AOC3的表达量呈负相关性,miR-150通过靶向AOC3抑制脂肪分化,研究结果为microRNAs(miRNAs)在分子水平上的研究提供了一定的理论依据。

大尾寒羊和小尾寒羊尾部脂肪lncRNA差异表达分析

【目的】通过识别影响绵羊尾部脂肪沉积的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA),深入研究lncRNA参与绵羊尾部脂肪沉积的规律。【方法】采集大尾寒羊和小尾寒羊2个品种各3只公羊的尾部脂肪组织样本,通过Illumina NextSeq500高通量测序技术对样本RNA进行转录组测序,对所获得的reads进行lncRNA分析,筛选出差异表达lncRNA,通过GO和KEGG富集分析挖掘lncRNA靶基因参与的生物学过程和代谢途径。【结果】研究共筛选获得22个差异表达的lncRNA,对其进行靶基因预测,获得20个顺式靶基因。通过对靶基因功能分析,检测到包括调控血管生成、细胞迁移、胰岛素反应和MAPK级联反应正调控的4条生物学过程,以及胞外区、细胞外间隙的2条细胞组分。KEGG富集分析筛选到20个靶基因参与脂肪细胞因子信号通路、进入脂质代谢、代谢途径、AMPK信号通路和磷脂酶D信号通路等19条信号通路。【结论】本研究鉴定了影响绵羊尾部脂肪沉积的差异表达lncRNA及其靶基因,为进一步研究绵羊尾部脂肪沉积过程的作用机理奠定基础。

河南大尾寒羊染色体核型与G-带分析

【目的】研究河南大尾寒羊染色体核型和G-带。【方法】分离培养河南大尾寒羊外周血淋巴细胞,制备染色体标本和G-带标本,分析河南大尾寒羊的染色体核型和G-带。【结果】河南大尾寒羊二倍体染色体数目为2n=54,公羊核型54,XY;母羊核型54,XX。27对染色体中包括26对常染色体和1对性染色体,常染色体中有3对为中着丝粒染色体,23对为端着丝粒染色体;性染色体中,X染色体为最大的端着丝粒染色体,Y染色体为最小的中着丝粒染色体。河南大尾寒羊G-带与其他绵羊品种的G-带基本一致。【结论】河南大尾寒羊的染色体数目为:2n=54,公羊核型54,XY;母羊核型54,XX。河南大尾寒羊G-带与其他绵羊品种的G-带基本一致。

大尾寒羊体重与体尺的回归分析

运用SAS软件分析了河南大尾寒羊体尺与体重间的表型相关,体尺对体重的直接和间接影响,并建立了最优回归模型。研究结果表明,体高和胸围是影响大尾寒羊体重的最主要体尺因素,应在选择河南大尾寒羊体重的同时,加强对体高和胸围的选择力度。

大尾寒羊妊娠期蛋白质维持需要量及代谢规律的研究

选用大尾寒羊妊娠及空怀母羊各６只，进行氮平衡试验。结果表明，大尾寒羊妊娠并不能导致其采食量显著提高；妊娠大尾寒羊与空怀母羊相比，蛋白质的沉积效率显著提高（Ｐ＜０．０５）；大尾寒羊妊娠期可消化粗蛋白的维持需要量（ＲＤＣＰｍ）可以由下述公式求得：ＲＤＣＰｍ＝２．４３Ｗ０．７５（ｇ／ｄ）式中：Ｗ０．７５为代谢体重（ｋｇ）

河南大尾寒羊血液生理指标的测定

对河南大尾寒羊的血液生理指标进行了测定,结果表明:大尾寒羊公母间RBC、WBC、PCV、Hb、MCV、MCH、MCHC均无显著性差异。大尾寒羊的红细胞脆性较大,而ESR值较小。

大尾寒羊羔皮品质的研究

本文系统分析了山东大尾寒羊４个年龄组（小毛、中毛、大毛和１８０日龄）的２４只个体羔皮的主要品质性状。测定表明：毛股粗细为６．３５～８．１３ｍｍ，毛股根部面积为６３．０６～９４．１４ｍｍ２；毛股自然长为２．６４～５．９５ｃｍ，伸直长为４．８８～８．５３ｃｍ；毛股弯曲数为２．６０～６．４５个；羔皮总面积为２２６８．００～５２２１．３３ｃｍ２，有花面只占总面积的６３．４５％～９０．５６％。中、大毛羔皮，毛股弯曲明显和较明显的均占１００％，上等花穗的串字花和软大花均占１００％。由此证明：山东大尾羊毛股较长，弯曲较多而明显，并呈平波状，花穗美观；羔皮总面积较大，有花面积所占比例较高，羔皮品质较好。

河南大尾寒羊主要血液生化指标的测定

对41只河南大尾寒羊(母19只,公22只)血清总蛋白,血清白蛋白,血清球蛋白,血清总胆固醇,血糖,血清钾,血清钠,血清钙,血清尿素氮和肌酐共10项血液生化指标进行了测定。结果表明:除血清胆固醇指标公羊极显著高于母羊外(P<0.01),其它各项指标公母羊均无显著差异(P>0.05)

提高河南大尾寒羊产肉性能配套技术研究

经数据处理和屠宰分析，河南大尾寒羊的初生重、断奶重、６月龄活重等群体平均数与对照组的３个群体平均数之间存在着极显著的差异，即初生重提高２０．３０％，断奶重提高１１．３２％，６月龄活重提高１１．１０％；屠宰率、净肉率分别提高１．４８％和１．７２％，出栏期由原来的２７０天缩短到１８０天（习惯是９～１１个月出栏）

利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究

利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。

基于线粒体基因探讨甘肃地区4种绵羊的系统发育关系

研究旨在分析兰州大尾羊、小尾羊、滩羊和藏羊的系统发育关系,并与国内外其他绵羊品种进行比较。试验分别对甘肃地区兰州大尾羊、小尾羊、滩羊和藏羊等4种绵羊品种进行线粒体基因COX1与Cytb基因序列的扩增和产物的测序,并基于COX1与Cytb基因与国内外其他绵羊品种构建发育树,分析种群遗传现状和系统发育关系。结果显示,4种绵羊品种与国内外其他物种间存在基因流,且在Cytb基因中藏羊T10与外群盘羊亲缘关系较近。研究表明,对甘肃地区4种绵羊的种质资源保护需要避免与其他物种间的基因流。

郏县大尾寒羊产肉性能配套技术研究

在调查研究的基础上,对郏县大尾寒羊进行了配套技术研究。经数据处理和屠宰分析,初生重、断奶重、6月龄活重等群体平均数与对照组的3个群体平均数之间存在着极显著的差异,即初生重提高20.3％,断奶重提高11.32％,6月龄活重提高11.10％,同时屠宰率、净肉率也分别提高了1.48％和1.72％,出栏期由原来的270天缩短到18O天(习惯是9～11个月出栏)。出栏率郏县也有明显的提高。