基于FISH和GISH技术的芝麻栽培种和野生种染色体组特征比较分析

为揭示胡麻属物种进化特征,探究胡麻属基因组结构演变及物种进化,促进野生资源的开发利用,以芝麻栽培种豫芝11号和2n=26类型野生种S.alatum 3651为试验材料,采用荧光原位杂交(FISH)和基因组荧光原位杂交(GISH)技术对芝麻栽培种和野生种染色体组特征进行分析。结果表明,芝麻栽培种和野生种均为2n=2x=26类型;rDNA-FISH杂交结果显示,栽培种的13对染色体中,3对染色体(第7、8、9对染色体)的短臂端部携带45S rDNA特异信号,显示为随体特异染色体;2对染色体(第5、11对染色体)的短臂携带5S rDNA特异信号,5S rDNA与45S rDNA信号位于不同染色体上。野生种的13对染色体中,有2对染色体(第4、7对染色体)携带45S rDNA杂交信号,1对染色体(第4对染色体)携带5S rDNA特异信号,5S rDNA与45S rDNA信号位于同一染色体不同位置,表明栽培种与野生种的染色体组特征差异较大。GISH杂交结果显示,分别以栽培种和野生种的基因组DNA作探针与自身染色体杂交,每条染色体上携带不同强弱的杂交信号,而与对方染色体杂交,均表现出极少的杂交信号。芝麻栽培种和野生种具有相同的染色体数目,但染色体rDNA数量、分布及其GISH信号均存在明显差异,说明栽培种和野生种亲缘关系较远。

粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

超声联合染色体筛查在Down’s综合征诊断中的应用

目的探究超声联合染色体非整倍体无创DNA产前检测(Non-invasive prenatal genetic testing,NIPT)在Down’s综合征(DS)诊断中的应用。方法回顾性收集2020年6月-2023年6月太康县人民医院收治的疑似DS高危患者210例为研究对象,通过超声、NIPT及两项联合对DS进行诊断,与羊水细胞染色体核型分析结果进行对比,采用ROC曲线分析三者诊断敏感度、特异性、准确性与诊断价值。结果在210例疑似DS患者中,经羊水细胞染色体核型分析证实,DS患者26例(12.38%,26/210),非DS患者184例(87.62%,184/210)。以羊水细胞染色体核型分析结果作为金标准,超声诊断DS的敏感度为69.23%(18/26),特异度为92.93%(171/184),超声诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性一般(Kappa=0.574);NIPT诊断DS的敏感度为84.62%(22/26),特异度为97.83%(180/184),NIPT诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.806);两项联合诊断DS的敏感度为92.31%(24/26),特异度为98.37%(181/184);两项联合诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.892)。两项联合检出率明显高于超声检查,且两项联合、NIPT检查诊断误诊率均明显低于超声检查(P<0.05)。ROC曲线分析显示,超声、染色体筛查、两项联合检查诊断DS的AUC为0.811、0.871、0.953,提示两项联合检查对DS的诊断价值更高。结论超声联合染色体筛查进行DS诊断具有高准确性,利于提高孕妇接受度,具有较高临床价值,值得临床推广应用。

改良的Sihler's染色法显示成人输尿管和回肠壁内神经分布

目的探讨改良的Sihler’s染色法显示成人输尿管和回肠壁内神经分布的应用。方法选取教学解剖尸体中输尿管和回肠6具,最终获得12条输尿管和6段回肠进行改良的Sihler’s染色法整体染色,于X线阅片灯下、组织压片、免疫组化观察输尿管和回肠壁内神经分支、分布、走形总结两者肌内神经分支、分布规律及形态学特征。结果大体解剖很难辨认输尿管的神经来源,可见回肠系膜内一些纤细的白色神经支进入肠壁。Sihler’s染色后,见输尿管和回肠呈透明胶冻状,壁内神经支呈深蓝色,浆膜面更为清晰。输尿管外膜层内的神经与血管伴行,近似垂直进入管壁,逐渐向肌层延伸并沿纵轴分布;整体见管壁上、中段神经稀少,分支逐渐变细,相邻分支间交叉较少;输尿管下段神经较为密集,见经膀胱输尿管连接部成簇状进入输尿管下段向近端延伸的粗大神经支,分布密集,向上逐渐分出初级及次级神经支,相邻神经间有分支交错及伴行,每根神经的分支不在一个平面上固定,可观察视野内未发现神经节。回肠外形完整,浆膜层神经分支呈现深蓝色,与动脉伴行,并向肠壁分出初级及次级神经支,部分直接跨越血管网分布至肠系膜侧壁,到达肠壁的壁内神经环形、垂直分布于肠管壁,呈树枝状。相邻的神经分支相互交叉,每根神经束的分支不在一个平面上固定,可观察视野范围内未见明确神经节。Sihler’s染色透明的输尿管、回肠切取组织压片:见两者神经纤维均由外向内至黏膜层分布,输尿管壁内沿纵轴走向,肠壁呈近似垂直向对系膜侧走向,呈网状分布,分支逐渐变细,神经纤维间明显交叉,均未见明确神经节样结构。免疫组化见输尿管肌内神经纤维呈束状、纵行分布,交叉较少;回肠壁内肌间有神经纤维网格状分布,肌间见有大量的神经节结构。结论成人输尿管和回肠壁内神经能被染色,神经分布各具特色。壁外神经均伴随其支配动脉走行,壁内由外向内至黏膜层走行,分支逐渐变细,未见明确神经节。除黏膜下层外,管壁结构类似,环肌与纵行平滑肌均受内脏神经支配,器官壁外神经走向沿其动脉伴行,壁内神经有类似节段性分布规律,此结果可能为临床上回肠代输尿管类似原输尿管蠕动节律性及排尿的神经解剖提供参考。

绿色复合还原剂在靛蓝染色中的应用

靛蓝是纺织工业中最重要的还原染料之一,靛蓝染色时,必须在还原剂作用下转化为水溶性隐色体形式。该研究旨在寻找一种复合绿色还原剂,以替代靛蓝染色中使用的对环境不利的连二亚硫酸钠(sodium dithionite,SD)。首先,比较了三种还原剂,SD、二氧化硫脲(thiourea dioxide,TD)和葡萄糖(glucose,GS)的稳定性。采用TD作还原剂剧烈搅拌2h仍能保持靛蓝染色所需还原电位,而SD和GS剧烈搅拌1h达不到靛蓝染色所需的还原电位,靛蓝染色性能下降。鉴于GS的环境友好性,选择TD与GS复合物作为靛蓝染色的复合绿色还原剂。其次,分析复合还原剂不同质量比对棉织物靛蓝染色的还原电位、pH值和K/S值的影响。当TD与GS的质量比为7:3,体系具有稳定的还原电位,可获得较好的染色性能。

葡萄染色体制片技术优化及14个葡萄品种rDNA分布特征分析

【目的】优化葡萄染色体制片技术并分析14个葡萄品种rDNA分布特征,为葡萄染色体鉴定、变异分析及葡萄品种间的细胞遗传学背景差异解析研究提供参考依据。【方法】以14个葡萄品种当年生半木质化枝条水培长出的根尖为试验材料,以冰水混合物处理根尖24 h后1 MPa笑气(N2O)处理30 min为对照,设0.2μmol/L的甲基氨草磷溶液(APM)浸泡根尖2 h后1 MPa N2O不同时长(0、30和60 min)处理,筛选染色体制片条件并计算各处理下形态良好的中期分裂相占比;比较酶解滴片法及火焰干燥法的染色体制片效果。以45S rDNA和5S rDNA为探针采用双色荧光原位杂交(FISH)技术分析rDNA在14个葡萄品种染色体上的分布特征。【结果】对照中葡萄根尖材料形态良好的中期分裂相占比仅为32.22%,FISH后易产生背景信号且信号模糊,采用APM处理2 h后1 MPa N2O处理30 min得到的染色体制片形态良好的中期分裂相占比最高,达80.00%,且染色体浓缩适当,FISH信号质量良好。采用火焰干燥法获得的制片细胞分散程度适中,中期分裂相多。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上始终呈连锁状态;5S rDNA信号与染色体组数目相关,在二、三、四倍体中的数量分别为2、3和4个。45S rDNA信号在二、三、四倍体中的数量分别为4、6和7个,在红香蕉葡萄中只有3个;5S rDNA信号位于17号染色体上,45S rDNA位于17和15号染色体。意大利和碧香无核葡萄例外,意大利葡萄2个未与5S rDNA连锁的45S rDNA位于15和16号染色体,碧香无核葡萄1个与55 rDNA连锁的45 rDNA位于15号染色体,1个未与55 rDNA连锁的45S rDNA位于17号染色体上。【结论】制作葡萄根尖中期染色体制片较优方法是APM预处理2 h后1 MPa N2O处理30 min,使用火焰干燥法制片。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上呈连锁排列,在二、三、四倍体中数量不同。14个葡萄品种的45S rDNA和5S rDNA在染色体上呈L形排列,5S rDNA位点数量比45S rDNA位点数量更稳定。

尼龙染色宝TF-217N的应用性能

介绍了尼龙染色宝TF-217N的应用性能,其可以替代匀染剂用于深色尼龙酸性染料及金属络合染料染色工艺中。实验表明:尼龙染色宝TF-217N对酸性染料具有较好的缓染性,优于常规的酸性匀染剂,而且还可以提高织物的水泡牢度、耐皂洗色牢度及耐汗渍色牢度等各项色牢度至4级或以上。尼龙染色宝TF-217N还能够提升织物后道的防水和柔软整理效果。经尼龙染色宝TF-217N处理后,织物不含苯酚、双酚F,双酚S含量小于10 mg/kg,能够满足客户的环保要求。因此,尼龙染色宝TF-217N的应用可以直接省去后道固色工艺,缩短工艺流程,实现节能降耗,提高效率。

5S rDNA在百合染色体上的定位及其联会特点研究

利用FISH技术追踪不同倍性百合中5S rDNA在染色体上的位置,发现5S rDNA位点稳定位于3号染色体长臂近端部。通过观察铁炮百合小孢子母细胞减数分裂过程中染色体的联会配对特点,发现不同染色体联会特点不同,以5S rDNA重复序列为探针的FISH结果可发现铁炮百合3号染色体上5S rDNA区域在减数分裂过程中不发生联会,这是5S rDNA能稳定在3号染色体遗传的主要原因。

Steedman’s wax包埋切片DAPI染色法证实铝诱导花生根尖细胞程序性死亡

【目的】检验Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是否适用于观察花生根尖细胞核形态。【方法】分别采取100μmol/L AlCl3处理不同时间(0、4、8、12 h)后两个花生品种(铝敏感型中花2号和耐铝型99-1507)的根尖,经过Steedman’s wax包埋切片等一系列过程,利用荧光染料DAPI染色观察细胞核形态变化。【结果】100μmol/L AlCl3可引起花生根尖细胞核形态发生改变,核质浓缩、核边缘化、呈新月状等,具有明显的PCD特征。花生根尖细胞在铝胁迫下发生PCD,PCD程度与花生耐铝性呈负相关,与处理时间呈正相关。【结论】Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是一种快速、高效的适用于观察花生根尖细胞核形态的方法。

Carnoy's预固定剂量对中期染色体分散度的影响

目的定量研究Carnoy's预固定剂量变化对外周血淋巴细胞中期染色体分散度的影响。方法用0．075 mol／L KCl对经培养的外周血淋巴细胞于37℃低渗处理35 min;在预固定环节,Carnoy's液的量分别控制在1．25％、2．50％、3．75％、6．25％和12．25％(终体积浓度);常规制备中期染色体标本,Giemsa染色后观察不同预固定剂量下淋巴细胞及中期染色体的分散质量,计算中期染色体铺展的面积及染色体的分散质量。结果当预固定剂量占总体积的1．25％、2．50％或3．75％时,染色体的分散质量较好,可用核型多,当预固定剂比例≥16．25％后,细胞间相互黏连的程度和染色体间相互积聚的倾向愈发明显。对染色体铺展面积的定量结果显示,预固定剂比例为1．25％、2．50％和3．75％时,分裂相核型的平均分布面积分别为1 246±236 mm2、1 143±178 mm2和1 017±163 mm2,均显著高于预固定剂用量为6．25％和12．25％时中期分裂相核型的平均分布面积:876±81 mm2和518±65 mm2,双侧t检验显示组间比较差异显著(P<0．05)。结论在染色体标本制备过程中,预固定剂的用量是最终影响染色体分散质量的重要因素之一。

鲤45S rDNA的染色体荧光原位杂交定位

应用荧光原位杂交技术,通过设计位于5.8S rDNA、18S rDNA和非转录IGS区域的3条探针CAAG1191、CAAG1845和CAAG3602,分别对散鳞镜鲤Cyprinus carpio var.scattered mirror和松浦鲤Cyprinuscarpio Songpu的45S核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)进行染色体定位及共定位。结果表明:45S rDNA均位于两品种鲤一对近端着丝粒染色体的短臂末端,具有染色体特异性,表明45S rDNA序列的探针能够在鲤细胞遗传学研究中用于标识其所在染色体,并与鲤遗传连锁图谱中长度为227 cM的1号连锁群相对应;两品种鲤的染色体数目均为2n=100,45S rDNA在鲤基因组内仅定位于一对同源染色体,不存在复制位点,证实了鲤基因组在全基因组复制事件之后又经历了重新二倍化过程。

Calretinin、S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠诊断中的应用价值研究

目的探讨钙视网膜蛋白(Calretinin)、S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠(HD)诊断中的应用价值。方法选取2016年5月至2018年5月西安市儿童医院收治的HD新生儿46例,并选取同期无HD的新生儿18例。取HD患儿近端扩张段和远端狭窄段肠壁及无HD患儿手术部位结肠组织,分别行Calretinin和S100免疫组化染色检测,随后观察Calretinin和S100免疫组化染色情况,分析Calretinin联合S100免疫组化染色在新生儿HD诊断中的灵敏度和特异度,并采用Kappa一致性检验验证该方法与传统诊断方法及单独采用Calretinin染色或S100染色的一致性。结果HD患儿结肠扩张段均可见Calretinin染色的神经节细胞、未见S100染色的增粗神经纤维,非HD患儿中17例可见Calretinin染色的神经节细胞、2例S100染色的增粗神经纤维,与HD患儿狭窄段染色情况(1例Calretinin染色神经节细胞、44例S100染色增粗神经纤维)均存在统计学差异(P<0.05)。Calretinin联合S100免疫组化染色诊断新生儿HD,灵敏度为97.83%,特异度为100.00%,与传统诊断方法的一致性较高(Kappa=0.962,P=0.038),优于单独使用S100染色(Kappa=0.886,P=0.064;灵敏度为95.65%,特异度为88.89%),但是与单独使用Calretinin染色相当(Kappa=0.962,P=0.038;灵敏度为97.83%,特异度为94.44%)。结论Calretinin联合S100免疫组化染色检测在新生儿HD诊断中具有较高的灵敏度和特意度且优于单独使用S100染色,但并不优于单独使用Calretinin染色;进行HD病理学诊断时,应注意取材深度以及取材部位。

植物45S rDNA的染色体位置的CPD染色和FISH分析

采用PI和DAPI组合(CPD)染色结合45SrDNA探针的荧光原位杂交(FISH)对分属6个科的16种植物的45S rDNA的染色体位置进行了分析。在所有供试植物中,共检测到53个45S rDNA位点。大多数45S rDNA位点分布在染色体的短臂;位于染色体臂内和染色体末端的位点的比例大体相当;多数位于染色体臂内的45S rDNA位点有次缢痕形成,但rDNA重复单位簇所处的位置存在差异。根据45S rDNA所处的染色体臂的不同、距着丝粒远近的差异、形成次缢痕与否以及rDNA重复单位簇相对于次缢痕的位置等特征,将植物的45S rDNA位点划分为12种染色体分布类型。基于我们的结果和其他的报道对45S rDNA位点、核仁组织区(NOR)、次缢痕和随体相互之间的关系进行了分析。

广东汉族群体Y染色体DYF155S1基因座3'端多态性研究

【目的】揭示广东汉族人群Y染色体小卫星DYF155S1基因座3'端多态性。【方法】采用Amp-FLP和荧光MVR-PCR方法扩增,PCR产物用ABI377电泳或中性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染方法分析。【结果】155例无关男性个体的4型核心序列MVR图谱第1条DNA片段大小均为133bp。155例共检出有24种等位基因,有7个等位基因仅出现1次,频率最高的为9号等位基因,DNA条带数为连续的13个,频率为0.1355;基因多样性(h)为0.9226。155人中有3人表现为连续DNA谱带中有1个DNA条带的缺失(nullrepeat),序列分析证明缺失的DNA条带位置对应于3型核心序列。【结论】揭示了DYF155S1位点3'端多态性及其等位基因频率,为群体遗传学研究及法医学应用提供了基础资料。

45S和5S rDNA序列在20种葫芦科植物染色体上的定位

【目的】了解45S和5S rDNA序列在20种葫芦科Cucurbitaceae植物基因组中位点数目和分布特点,为研究葫芦科植物核型、遗传育种和进化分类等提供依据。【方法】采用改进的荧光原位杂交(FISH)法,在45S rDNA和5S rDNA的5′端进行荧光修饰,对20种葫芦科植物中期染色体进行45S和5S rDNA的物理定位,在Nikon 80i荧光显微镜下观察,冷CCD收集图像并分析。【结果】确定了金瓜Gymnopetalum chinense、波棱瓜Herpetospermum pedunculosum、葫芦Lagenaria siceraria、木鳖子Momordica cochinchinensis、云南木鳖Momordica dioica、西葫芦Cucurbita pepo、蛇瓜Trichosanthes anguina、糙点栝楼Trichosanthes dunniana、全缘栝楼Trichosanthes ovigera、钮子瓜Zehneria maysorensis、红瓜Coccinia grandis和佛手Sechium edule等12种植物45S rDNA和5S rDNA荧光位点在中期染色体上的数量、位置和特征,在这些植物中分别检测到3、7、2、4、2、5、3、3、5、1、2和2对45S rDNA,检测到2、1、1、1、1、2、1、1、1、1、1和1对5S rDNA。20种植物中,45S rDNA和5S rDNA在染色体短臂、短臂顶端和着丝点等位置均有分布。【结论】FISH是葫芦科植物构建精细核型的有效工具,可帮助判断随体、鉴别染色体和鉴定同源染色体,是核型分析的有力佐证。

45S rDNA在多种植物中期染色体上的定位(英文)

应用荧光原位杂交技术首次确定了日本小檗(B erberis thunberg ii DC)、车前(P lantag o m ajor L.)、野芹菜(S an icu la lam ellig era H ance)、荔枝(L itch i ch inensis Sonn.)、槭树(A cer buerg erianum M iq.)、天目琼花(V iburnum sarg entii K oehne.)、丹参(S a lv ia m iltorrh iza Bunge.)、榆树(U lm us pum ila L.)中45S rDNA在中期染色体上的位置.根据rDNA的位点数和位置的变化,分为四种类型:①在日本小檗、车前和野芹菜中,荧光信号正好位于随体染色体的次缢痕或端部;②荔枝和槭树,分别有1对和3对染色体具随体,但荧光原位杂交却检测到3对和5对染色体上具有杂交信号;③天目琼花,具有4对随体染色体,但仅在其中一对随体上显示了杂交信号;④在丹参和榆树中,有的杂交信号位于着丝粒部位或长臂的末端,杂交信号的数目成奇数.黄瓜(Cucum issa tivus L.)的染色体45S rDNA信号正好位于6条染色体的着丝粒部位,这与D a l-Hoe和Hosh i等人的结果是一致的.上述结果表明:45S rDNA可以作为染色体的一个识别指标,对识别染色体的个体性具有一定的参考价值.另外还对45S rDNA位点分布的多态性进行了讨论.

云南白族人群Y染色体DYF155S1基因座多态性研究

揭示云南白族 136例无关男性个体Y染色体小卫星DYF15 5S1基因座多态性。用已建立的Amp FLP和MVR PCR方法分析DYF15 5S1基因座长度多态性、5′端多态性、3′端多态性。DYF15 5S1基因座具有高度多态性 ,基因多样性 (h)达 0 9996。研究表明将Amp FLP和荧光MVR PCR结合起来更能充分揭示DYF15 5S1基因座多态性 ,可为遗传学、人类学及法医学的研究提供有效的工具和基础资料。

Sihler’s神经染色法再改良在中空器官中的应用

目的探讨Sihler’s肌内神经染色法再改良在中腔器官染色中的应用。方法使用再改良的Sihler’s肌内神经染色法整体染色人的食管、胃、膀胱。结果各器官染色后,不需要剪开器官,支配食管、胃、膀胱的神经在器官壁内清晰可见,神经的分支以及分支间的联系可见。结论 Sihler’s肌内神经染色法不仅适用于骨骼肌肌内神经染色,也适用于平滑肌,只要处理得当较大的器官不剪开的情况下也适用。

不同倍性柳枝稷45S rDNA的染色体定位研究

以3个四倍体和6个八倍体栽培品种的根尖为材料,利用荧光原位杂交技术,在核型分析的基础上,开展了不同倍性柳枝稷45S rDNA的染色体定位研究。研究结果表明,四倍体柳枝稷核型公式为2n=4x=36=32m(SAT)+4sm,且45S rDNA在四倍体柳枝稷染色体上分布稳定,位于3号染色体顶端。八倍体柳枝稷栽培品种以及同一栽培品种不同个体间45S rDNA信号分布位置和数目差异较大,可大致分为四类:第Ⅰ类为较强的45S rDNA信号分别分布于染色体两臂的顶端;第Ⅱ类为较强的45S rDNA信号位于染色体一臂内部,第Ⅲ类为较强的45S rDNA信号位于染色体一臂的顶端,第Ⅳ类为较弱的45S rDNA位于染色体一臂内部。八倍体柳枝稷不同栽培品种以及同一栽培品种不同个体间45S rDNA信号复杂性的成因可能与染色体同源重组以及染色体结构变异密切相关。

四种修复方法对p504s免疫组化染色效果的比较

寻找p504 s免疫组化染色最适合的修复方法,以达到最佳染色效果。收集60例前列腺癌切片,分别对其进行EDTA修复、高压修复、微波修复及胃酶修复,然后进行免疫组化染色,比较何种修复方法修复后免疫组化染色效果最优。经微波修复阳性率(+++)者为80%,而背景(-)者达95%,综合效果明显优于其他三种方法(P<0.05)。由此可见,对p504 s免疫组化染色采用微波修复,可达到最佳染色效果。