姜黄素通过抑制乙酰转移酶P300表达促进HeLa细胞凋亡

目的:探讨姜黄素(Cur)通过下调HeLa细胞腺病毒E1A相关300 kD蛋白(P300)调控HeLa细胞的活力及凋亡。方法:将对数生长期的HeLa细胞分别采用20、40、60和80μmol/L Cur处理,并以未处理组细胞作为对照,用CCK-8法检测细胞活力;选取20和40μmol/L Cur处理细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR、Western blot法检测E6基因的mRNA和蛋白表达及凋亡相关蛋白、P300和组蛋白的表达;构建沉默质粒shE6和阴性对照质粒shNC转染HeLa细胞,设置shNC,shNC+Cur(40μmol/L),shE6以及shE6+Cur(40μmol/L)四组,以CCK-8、流式细胞术以及Western blot法分别检测细胞活力、凋亡以及凋亡相关蛋白的表达;构建沉默质粒siP300和阴性对照质粒siNC转染HeLa细胞,RT-PCR、Western blot法分别检测P300的mRNA和蛋白表达、E6的蛋白表达。结果:与未处理组相比,用不同浓度Cur处理HeLa细胞后能显著抑制其活力并可使早期凋亡率增高(P<0.05);Cur处理HeLa细胞后,E6的mRNA及蛋白表达均下调,而敲减E6与未敲减E6的Cur处理组相比,敲减组的早期凋亡率以及促凋亡相关蛋白表达均低于未敲减组(P<0.05);敲减P300后,HeLa细胞中E6蛋白表达降低;而单以Cur处理HeLa细胞后,P300及相关组蛋白表达均下调(P<0.01)。结论:Cur抑制HPV18阳性宫颈癌细胞的活力并促进其凋亡,机制可能与其下调P300而抑制E6蛋白乙酰化有关。

HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达

目的:检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义。方法:通过细胞免疫组化、Westernblot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异。结果:免疫组化显示:He-La细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035)。Westernblot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍;而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是HeLa细胞中表达的2.7倍。RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P=0.002)。结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平。

扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa和Siha细胞辐照后DNA损伤水平的影响

为研究青蒿琥酯联合照射对人宫颈癌HeLa和Siha细胞DNA损伤的影响,取对数生长期细胞,通过MTT比色法测定不同浓度青蒿琥酯作用24 h对HeLa和Siha细胞生长的抑制效应,将细胞分为单纯照射组和联合治疗组,每组分别给予0、2、4、6 Gy四个剂量的60Coγ射线照射,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)法检测青蒿琥酯对HeLa和Siha细胞照射后DNA损伤的影响。MTT结果表明,青蒿琥酯对宫颈癌HeLa和Siha细胞的生长抑制呈剂量依赖性。单细胞凝胶电泳法检测发现:联合治疗组HeLa细胞经0、2、4和6 Gy 60Coγ射线辐照后彗星细胞的尾部DNA百分数及Olive尾矩明显大于单纯照射组,差别有统计学意义(P<0.05),而Siha细胞联合治疗组与单纯辐照组相比,无明显差异。实验结果表明,青蒿琥酯对p53突变型子宫颈癌HeLa细胞具有明显的放射增敏作用,而对p53野生型子宫颈癌Siha细胞没有明显的放射增敏作用。

中药砒霜上调E-钙黏蛋白抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移机制研究

目的:研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷(As_(2)O_(3))抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机制,观察As_(2)O_(3)对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1抑制剂伏立诺他(SAHA)的协同作用。方法:以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况。结果:随着各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞活性均低于空白对照组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的细胞数量少于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的细胞数量少于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的Hela细胞迁移百分比低于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。结论:As_(2)O_(3)抑制Hela细胞的最佳浓度为8μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4μmol/L。As_(2)O_(3)可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生长、侵袭、迁移。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

硼替佐米对裸鼠人宫颈癌SiHa细胞移植瘤作用的研究

目的 :探讨硼替佐米对裸鼠人宫颈癌SiHa细胞移植瘤生长的作用及其与Janus激酶2(Janus kinase2,JAK2)、信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)表达的关系。方法:建立裸鼠人宫颈癌SiHa细胞移植瘤模型,成瘤后随机分为对照组和给药组,每组8只。观察裸鼠体质量变化及移植瘤体积。干预结束后处死裸鼠,剥取瘤体称重,计算抑瘤率。将肿瘤组织行HE染色作病理观察,RT-PCR检测肿瘤组织JAK2、STAT3基因表达,Western blot印迹法检测肿瘤组织中JAK2、STAT3总蛋白及磷酸化的JAK2、STAT3蛋白表达。结果:(1)干预前及干预2周后两组裸鼠体质量无明显差异,但在干预后3周及4周给药组裸鼠体质量小于对照组(均P<0.05)。(2)干预后各时间段给药组肿瘤体积小于对照组(均P<0.05),给药组抑瘤率为21.4%。(3)对照组中肿瘤细胞侵袭结缔组织、脂肪组织区域,给药组中肿瘤组织与结缔组织、脂肪组织之间边界完整、规则;(4)两组JAK2和STAT3基因表达的差异无统计学意义(P>0.05)。(5)两组JAK2和STAT3总蛋白表达量的差异均无统计学意义(P>0.05),但给药组磷酸化JAK2和STAT3蛋白表达量低于对照组(均P>0.01)。结论:硼替佐米能抑制宫颈癌SiHa细胞移植瘤的生长及侵袭,其机制可能通过抑制磷酸化JAK2和STAT3蛋白表达,降低JAK2/STAT3信号通路活性。

敲减ARHGAP30基因对宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的影响

目的探究敲减Rho鸟苷三磷酸酶激活蛋白30(Rho GTPase-activating protein 30,ARHGAP30)后,宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的变化。方法设计特异性shARHGAP30引物并连接pLKO.1载体,转化到大肠杆菌感受态细胞中,再与慢病毒辅助质粒转入HEK-293T细胞,收集细胞上清获得的病毒过滤后感染Siha细胞,RT-qPCR和Western blot检测敲减效率,以及转染后Bax及Bcl-2的表达变化;CCK-8法检测敲减后细胞的增殖水平。结果成功构建敲减ARHGAP30基因的慢病毒质粒,并建立Siha稳转细胞,ARHGAP30在Siha细胞中的转录和翻译减少(P<0.01),Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01),凋亡减少,细胞增殖水平升高(P<0.01)。结论ARHGAP30参与Siha细胞的增殖与凋亡,调控ARHGAP30基因或将干扰宫颈癌的发生和发展。

MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响

探讨MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响。方法 将宫颈癌Hela细胞进行培养;扩增MACC1基因;检测MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9、caspase-3基因表达水平、凋亡特异核酸酶水平、Hela细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭水平以及Hela细胞的周期(G1期、S期、G2期)。结果 siRNA;MACC1组的MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9基因表达水平低于siRNA;NC组;caspase-3基因表达水平高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中凋亡特异核酸酶水平为(1.85±0.18);显著高于siRNA;NC组(1.01±0.09)(P<0.05)。siRNA;于细胞侵袭及细胞迁移数量和Hela细胞A值、等方面,相比siRNA,MACC1组更低;NC组;细胞凋亡率高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中G1期细胞比例高于siRNA;NC组;S期细胞、G2期细胞的比例低于siRNA;NC组(P<0.05)。结论 MACC1的表达能够改善宫颈癌Hela细胞的凋亡特异核酸酶水平,调控细胞周期,将Hela细胞阻滞在G1期,诱导细胞凋亡。

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组(P<0.01),miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组(P<0.01);划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义(P<0.01),miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。

斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

新疆阿魏含药血清对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究新疆阿魏含药血清对HeLa细胞凋亡及相关蛋白Survivin和Caspase-3的影响。方法大鼠灌胃新疆阿魏获得含药血清,用含药血清处理HeLa细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,采用Hoechst33258染色联合流式细胞仪检测细胞凋亡,运用Western Blot法检测Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果各浓度含药血清对细胞增殖抑制率分别为(11.4%±2.3%)、(14.9%±3.1%)、(25.3%±3.2%),细胞凋亡率分别为(29.4%±9.9%)、(35.8%±5.3%)、(43.1%±4.7%),各浓度含药血清组细胞中Survivin蛋白降低、Caspase-3蛋白升高(P<0.05)。与空白对照组比较,上述结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论新疆阿魏含药血清促进HeLa细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达和提高Caspase-3蛋白表达有关。

硫酸软骨素纳米硒的结构表征及其对Hela细胞迁移和侵袭的影响

对硫酸软骨素纳米硒(selenium-chondroitin sulfate nanoparticles,SeCS)的结构进行鉴定,并考察其对Hela细胞迁移和侵袭的影响。以硫酸软骨素为模板,采用亚硒酸钠-维生素C氧化还原法制备SeCS,并运用透射电镜、扫描电镜、X射线光电子能谱仪和傅立叶红外光谱仪对SeCS进行结构表征;通过划痕实验和细胞迁移侵袭实验(Transwell)检测SeCS对Hela细胞迁移及侵袭的影响;通过Western blot免疫印迹法检测SeCS对细胞内基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)表达水平的影响。实验结果表明,制备所得的SeCS是零价态的分散良好的球形纳米粒,表面光滑。Hela细胞经20μg/mL SeCS处理后,细胞的迁移率和侵袭率分别从对照组的100%下降到(59.19±7.74)%和(82.43±4.21)%,表明SeCS能够抑制细胞的迁移和侵袭。进一步的研究发现,SeCS下调了MMP-2和MMP-9蛋白的表达量,表明SeCS通过降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达来抑制细胞的迁移和侵袭。

利用CRISPR/Cas9技术构建ACBD3基因敲除Hela细胞系

利用CRISPR/Cas9技术敲除Hela细胞的乙酰辅酶A结合结构域3(ACBD3),构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,便于后续研究ACBD3对肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)生长发育的影响及相关信号通路。根据CRISPR/Cas9设计原则,设计向导RNA(sgRNA),将sgRNA与Cas9蛋白即RNP复合物通过电转染至Hela细胞,挑取单克隆细胞进行培养鉴定,利用Western blot和免疫荧光法检测ACBD3蛋白表达情况。测序显示成功构建敲除细胞株,Western blot和免疫荧光结果显示ACBD3蛋白不表达。利用CRISPR/Cas9技术成功构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,为进一步研究该基因对Cpn生长发育的作用及相关信号通路奠定了基础。

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响

目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。

基于HeLa细胞模型探究植物乳杆菌CY1-2的抗氧化机理

建立植物乳杆菌CY1-2保护偶氮二异丁脒盐酸盐(ABAP)损伤HeLa细胞模型,利用细胞增殖试验、细胞形态学观察及免疫印迹试验探究植物乳杆菌CY1-2的细胞保护机制。结果表明,当菌液浓度为108 CFU/mL的植物乳杆菌CY1-2保护细胞3 h后,再用浓度为110 mmol/L的ABAP损伤细胞3 h。在此模型条件下,植物乳杆菌CY1-2菌体及无细胞提取物均能有效提高HeLa细胞的存活能力,细胞存活率分别提高9.41%和25.71%。通过显微镜观察发现,与损伤组相比,经植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物保护的HeLa细胞大而饱满,边缘清晰且伸展性好。免疫印迹试验表明,与损伤组相比,植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物能够正向调控HeLa细胞的kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2-相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达量,分别提高了18%,47%和58%。植物乳杆菌CY1-2保护ABAP氧化损伤HeLa细胞的机制是激活细胞Keap1-Nrf2-ARE信号通路,提高其抗氧化能力。本研究结果为开发乳酸菌抗氧化剂提供一定的理论依据。

蛇葡萄素通过调控Beclin-1/Bcl-2靶点对人宫颈癌SiHa细胞噬与凋亡的影响

目的 探讨蛇葡萄素诱导人宫颈癌SiHa细胞发生自噬与凋亡的影响。方法 设置对照组、 3-MA (5 mmol/L)组、 Z-VAD-FMK (50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、 3-MA+蛇葡萄素组、 Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;设置对照组、 3-MA (5 mmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、 3-MA+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,电子显微镜下观察细胞形态变化,Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况;设置对照组、 Z-VAD-FMK (50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、 Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,MDC法和透射电子显微镜观察自噬和细胞超微结构变化;设置对照组、 3-MA (5 mmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、 3-MA+蛇葡萄素组或对照组、 Z-VAD-FMK (50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、 Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养12 h,Western blot法检测cleaved-PARP、 cleaved-Caspase3、 Bax、 Bcl-2、Atg13、 Beclin-1、 LC3、 P62蛋白表达。结果 与对照组比较,蛇葡萄素对SiHa和C-33A细胞的增殖抑制作用均增强(P<0.01);与蛇葡萄素组比较,3-MA+蛇葡萄素、 Z-VAD-FMK+蛇葡萄素对2种细胞的增殖抑制作用增强更显著(P<0.01),且活细胞数减少。与蛇葡萄素组比较,3-MA+蛇葡萄素组SiHa细胞中亮蓝色荧光增多,凋亡率升高(P<0.05),cleaved-PARP、 Bax、 P62蛋白表达升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、 Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01)。与蛇葡萄素组比较,Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组SiHa细胞中绿色点状荧光、自噬小体和自噬溶酶体数量均增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、 Atg13、 Beclin-1蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),P62、 cleaved-PARP、 cleaved-Caspase3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 蛇葡萄素可诱导宫颈癌SiHa细胞自噬和凋亡,两者呈相互拮抗关系,且Beclin-1/Bcl-2可能为其关键作用靶点。

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

藻岩黄质对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨藻岩黄质对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。方法:体外培养HeLa细胞,设为给药组和空白对照组,空白对照组采用常规细胞培养,给药组加入一定浓度的藻岩黄质培养。采用MTT法检测不同浓度(0.1、0.5、1μmol/L)藻岩黄质处理HeLa细胞24 h及0.5μmol/L藻岩黄质处理HeLa细胞12、24、48 h后,HeLa细胞存活率的变化;采用Annexin V/PI流式细胞仪分别检测0.1μmol/L、0.5μmol/L藻岩黄质刺激HeLa细胞24 h及48 h后的凋亡情况;测定0.1、0.5、1μmol/L的藻岩黄质刺激HeLa细胞后培养基中ATP的生成和总氧摄取量。结果:与空白对照组相比,随着药物浓度增加,HeLa细胞生长逐渐缓慢(P<0.05);随着药物浓度和刺激时间增加,HeLa细胞凋亡率显著增加(P<0.05);随着药物刺激浓度增加,HeLa细胞ATP的产生率也显著下降(P<0.05)。结论:藻岩黄质能够抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导其凋亡。

槲皮素对索拉非尼耐药Hela细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin, QU)联合索拉非尼(Solafenib)对索拉非尼耐药Hela细胞的作用及其机制。方法:MTT法测定不同浓度索拉非尼(0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 15.0, 20.0 µmol/L)对细胞的增殖的影响;细胞划痕实验检测各组细胞的迁移水平;PCR实验检测各组凋亡基因Bax、Bcl-2及自噬基因LC3-B、Beclin-1的表达水平;Western-blot (WB)检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3的相对表达量。结果:随着药物浓度的增加,耐药细胞和亲本细胞的抑制率逐渐升高,且对亲本细胞的抑制率明显高于耐药细胞。联合用药组抑制耐药细胞的迁移率,并且联合用药组的Bax和LC3-B基因相对表达量降低,Bcl-2、Beclin-1基因相对表达量、Bax/Bcl-2的值以及caspase-3蛋白相对表达量升高,与空白对照组和索拉非尼组相比,联合用药组细胞凋亡显著升高。结论:槲皮素与索拉非尼联合用药是通过上调Bcl-2、Beclin-1、Bax/Bcl-2基因相对表达量、下调Bax、LC3-B基因相对表达量同时上调caspase-3蛋白相对表达量的途径,抑制耐药细胞的迁移率、促进耐药细胞凋亡、抑制细胞自噬,从而起到逆转耐索拉非尼Hela细胞耐药性的作用。