黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌Hela细胞株体外生长的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)治疗人宫颈癌的可行性。方法配制含人宫颈癌细胞的细胞悬 液(4×105个／ml),取96孔板,每孔接种细胞悬液100μl,阴性对照组设6个孔均不点药,阳性对照药为5-氟尿嘧 啶(5-Fu),取0.01、0.1、1、10、100μg／ml5个浓度,SSTF选取浓度与5-Fu相同,每个浓度点3个孔,37℃5％CO2 培养48-72小时后采用MTT法在酶标仪上以570nm波长测定吸光度(A),计算SSTF和5-Fu抑制Hela细胞 株体外生长的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果 SSTF、5-Fu均可明显抑制肿瘤细胞的生长,其IC50分别为 20.5、10.5μg／ml。结论SSTF能抑制人宫颈癌Hela细胞体外生长,具有一定细胞毒性作用,可作为临床治疗宫 颈癌的药物进一步深入研究。

氯丙嗪对体外培养人宫颈癌Hela细胞株的生长抑制作用

目的:探讨氯丙嗪对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:采用MTT测定法,观察不同浓度氯 丙嗪(0μmol/L,3.0μmol/L,6.0μmol/L,12.5μmol/L,25.0μmol/L,50.0μmol/L,100.0μmol/L)作用后体外培养 的人宫颈癌Hela细胞的细胞增殖抑制率,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪 对Hela细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪浓度为3.0μmol/L即呈现明显的生长 抑制作用,抑制率为7.91%;浓度为100.0μmol/L时抑制率最高,达59.39%。用药4h后镜下即可见部分细胞贴 壁性降低,肿胀呈球形,核膜溶解,不见核的轮廓;部分细胞裂解呈碎片状;用药8h后碎片明显增多。结论:氯丙嗪 对人宫颈癌Hela细胞株具有体外生长抑制作用。

小白菊内酯对人宫颈癌Hela细胞株生长与迁移的影响及其相关分子机制的研究

目的探讨小白菊内酯对人宫颈癌Hela细胞株生长与迁移的影响及其相关分子机制，为小白菊内脂的进一步抗肿瘤药物研发提供实验基础。方法应用CCK-8检测细胞活性，HE染色观察细胞形态学变化，细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化；细胞免疫化学染色检测BCL-2和NF—κB基因在细胞内表达，Western—blot方法检测细胞迁移相关蛋白Twist—relatedprotein1（Twistl）表达的变化。结果小白菊内酯作用后的Hela细胞的生长受到抑制，并诱导细胞凋亡。肿瘤细胞的迁移能力受到明显的抑制，实验组和对照组差异显著（P〈0．05），但是24h和48h差别并不明显；BCL-2和NF—κB基因在细胞内表达明显下调，Twistl表达明显下调，和Oh比较区别显著（P〈0．05），但是24h和48h并无明显区别。结论小白菊内酯能够抑制Hela细胞株生长与迁移能力，可能和抑制BCL-2，NF—κB基因与Twistl表达有关。

人白介素17信号途径真核融合表达质粒的构建及稳定共表达Hela细胞株的筛选

细胞因子介导的自身免疫是引起自身免疫性疾病的一种重要的机制。白介素17（IL-17）是目前新发现的细胞因子,IL-17与自身免疫病和炎症性疾病关系密切。衔接蛋白ACT1是活化核转录因子NF-κB的重要蛋白分子。

大葱在体外对Hela细胞株的抗增殖作用

大葱在体外对Ｈｅｌａ细胞株的抗增殖作用韩正高，赵萍，王丽君（天津胸科医院营养科，天津３０００５１）关键词：大葱；Ｈｅｌａ细胞株；抗增殖作用ＨａｎＺｈｅｎｇｇａｏ；ＺｈａｏＰｉｎｇ；ＷａｎｇＬｉｊｕｎＴｈｅＡｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔ...

基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株

目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的:TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法:将HeLa细胞分为实验组加入PDTC(100μmol/L)及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果:辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05)也使凋亡指数大大增加(P<0.001)。结论:在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。

人宫颈癌紫杉醇耐药细胞株Hela/PTX的建立及其生物特性研究

目的:建立人宫颈癌紫杉醇耐药细胞株Hela/PTX,并考察其生物学特性。方法:以人宫颈癌Hela细胞为亲本细胞,采用低浓度持续诱导法建立紫杉醇耐药细胞株Hela/PTX。在显微镜下观察细胞形态学的变化;采用CCK-8法检测耐药细胞株对不同化疗药物的耐药性;采用高效液相色谱法测定细胞中药物的蓄积;采用Western blot法和实时荧光定量PCR技术分别检测细胞中P糖蛋白(P-gp)、Survivin蛋白和mRNA表达。结果:成功建立Hela/PTX多药耐药细胞株,其对PTX的耐药数是58.40,且对多西他赛和氟尿嘧啶有交叉耐药,耐药指数分别为8.11,4.62。Hela/PTX细胞中P-gp和Survivin的mRNA表达水平分别是Hela细胞的(9.93±0.90)倍(P<0.05)、(3.02±0.57)倍(P<0.05)。在耐药细胞中P-gp和Survivin的蛋白表达水平明显高于亲本细胞。结论:成功构建了人宫颈癌耐药细胞株Hela/PTX,具有多药耐药的基本生物学特性,可做为紫杉醇耐药机制研究的体外模型及为宫颈癌多药耐药机制的研究提供实验基础。

敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建

目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。

千金子对宫颈癌细胞株Hela增殖作用影响及对PTEN蛋白影响研究

目的：探讨中药千金子对宫颈癌细胞株Hela增殖作用的影响及对PTEN蛋白影响研究。方法：选用宫颈癌细胞株Hela,分为A组（空白对照）、B组（千金子水溶液5 mg/m L）、C组（千金子水溶液10 mg/m L）、D组（千金子水溶液20 mg/m L）,各组分别处理Hela细胞株。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,采用Western Blot法检测细胞Fas、Caspase3、Caspase7、PTEN蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测细胞PTEN m RNA表达水平。结果：（1）与A组比较,各浓度千金子水溶液在24 h、48 h、72 h对Hela细胞增殖抑制率较高,差异有统计学意义（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。（2）与A组比较,B、C、D组细胞核均有明显的凋亡形态学变化。（3）与A组比较,C、D组细胞凋亡率较高（P〈0.05）,C、D组G1期细胞比例较高（P〈0.05）,C、D组S期及G2期细胞比例较低,差异有统计学意义（P〈0.05）。（4）与A组比较,B、C、D组Caspase3、Caspase7蛋白表达水平较高（P〈0.05）,C、D组Fas蛋白表达水平较高,差异有统计学意义（P〈0.05）。（5）与A组比较,B、C、D组PTEN m RNA及PTEN蛋白表达水平较高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：中药千金子对宫颈癌细胞株Hela增殖有明显的抑制作用,其机制为上调PTEN抗原及Fas、Caspase3、Caspase7蛋白表达,促进细胞发生G1期阻滞,引起Hela细胞凋亡。

塞来昔布抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移的效应。方法选用宫颈癌细胞株Hela作为研究对象。选择适当浓度的Celecoxib,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和药物+照射组(R+D),细胞划痕试验观察Hela细胞的体外迁移力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2的含量。结果 D组较C组,D+R组较R组的细胞迁移力均明显下降,且随药物浓度增加,抑制细胞迁移力增强,R组较C组的细胞迁移力无明显改变;ELISA检测发现细胞培养上清液中MMP-2的含量D组较C组、R+D组较R组均明显下降(P<0.05),但R组与C组对细胞分泌MMP-2的抑制效应并无明显统计学差异。结论塞来昔布可能通过抑制宫颈癌细胞株Hela分泌MMP-2,从而抑制细胞体外迁移力。

掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。

掌叶半夏有效提取物对HeLa细胞的作用及机制

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(Pinellia extract,PE)对HeLa细胞的作用,并对可能的机制进行初步研究,为其临床用于防治女性宫颈病变提供科学依据。方法用倒置相差显微镜观察细胞生长并摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达,免疫荧光实验检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果PE对HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞出现凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加;免疫细胞化学实验和免疫荧光实验结果表明:PE作用24 h后HeLa细胞PCNA和Bcl-2蛋白表达均明显减少。结论PE对HeLa细胞有明显的抑制生长和促进凋亡的作用,其促凋亡机制是通过降低PCNA和Bcl-2蛋白表达来实现的,这为进一步研究PE的作用机制以及抗癌新药的研制开发奠定了初步的实验基础。

CXCR4/SDF-1α对宫颈癌HeLa细胞定向迁移及增殖的影响

目的了解CXCR4在HeLa细胞的表达情况，并借助细胞培养评价CXCR4／SDF-1α对HeLa细胞定向迁移及增殖的影响。方法CXCR4mAb免疫染色HeLa细胞。用Transwell侵袭转移模型评价HeLa细胞的迁移情况，其中，上室中加入预先用（或不用）CXCR4单抗预孵育的HeLa细胞，下室中加入含0～100ng／ml SDF-1α的培养基。为评价CXCR4、SDF-1α对HeLa细胞增殖的影响，将HeLa细胞接种于有（无）SDD-1α和（或）CXCR4的低血清环境72h。结果CXCR4在所有HeLa细胞上均有表达。HeLa细胞能顺SDF-1α浓度差定向迁移，且这一作用可被CXCR4mAb拮抗。SDF-1α能促进HeLa细胞在低血清环境中增殖。结论CXCR4／SDF-1α参与了HeLa细胞定向迁移的过程并影响其增殖．

siRNA介导hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞Caspase-3的影响

目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6-shRNA2和pmU6-shRNA3),由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和EM-SA法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过RT-PCR、W estern b lot和Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3表达和活化。结果3种pmU6-shRNA重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平均降低,Caspase-3 mRNA表达水平基本无变化,Caspase-3酶原水平降低,而Caspase-3酶活性增高。结论siRNA表达载体介导的RNA i能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达的抑制导致细胞Caspase-3活化。

蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞抑制作用的形态学观察

目的研究蛴螬粗提物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株抑制作用引起的形态学改变。方法应用MTT法、HE染色、油红O染色、透射电镜的方法检测蛴螬粗提取物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞抑制作用的影响及观察细胞的形态学改变。结果蛴螬3种粗提取物中以石油醚粗提物增殖抑制率最高。蛴螬石油醚粗提物对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01),同时呈时间依赖性(P<0.01)。倒置显微镜下蛴螬石油醚粗提物50μg/m l作用后早期细胞出现凋亡形态学变化;作用晚期细胞发生膜破裂坏死。HE染色和透射电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化。油红O染色和透射电镜观察到细胞发生脂肪变性。结论蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬3种粗提物中以石油醚粗提物抑制增殖作用效果最佳。蛴螬石油醚粗提物对Hela细胞抑制增殖作用在粗提物50μg/m l作用48 h之前主要以诱导凋亡为主,在其后时间以诱发肿瘤细胞脂肪变性和坏死为主。

掌叶半夏有效提取物对宫颈癌细胞株增殖的抑制作用

目的既往的临床研究证实中药掌叶半夏可有效治疗宫颈癌。在此基础上,课题组观察了中药掌叶半夏有效提取物(Pinellia Extract,PE)对宫颈癌细胞株CaSki和HeLa细胞增殖的作用,先前采用MTT法检测细胞活性以及倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,初步显示了PE对CaSki和HeLa细胞的增殖有抑制作用;本文将对PE的增殖抑制作用进行进一步的研究。方法采用扫描电镜和透射电镜观察PE作用后CaSki和HeLa细胞表面及内部超微结构的变化,In-cell Western blot检测不同浓度PE作用15min后CaSki和HeLa细胞磷酸化ERK的表达。结果0.15mg/mlPE作用24h后CaSki和HeLa细胞表面结构及内部结构均发生了显著的变化,提示细胞增殖受到抑制;不同浓度PE作用15min后CaSki和HeLa细胞磷酸化ERK的表达随PE浓度的增加逐渐下降。结论PE对CaSki和HeLa宫颈癌细胞株的增殖有明显抑制作用,表现在细胞表面及内部超微结构的变化;增殖抑制作用之一是阻断ERK的磷酸化。实验结果为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的理论依据和实验基础。

靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响

目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P<0.01)和(35.29±2.02)%(P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。

光敏剂叶酸-卟啉对宫颈癌HeLa细胞的靶向性和光动力活性

目的评价光敏剂卟啉Ⅰ对宫颈癌HeLa细胞的肿瘤靶向性和光动力活性。方法采用荧光测定法和激光共聚焦扫描显微镜观察宫颈癌HeLa细胞对卟啉Ⅰ的吞噬作用;采用MTT试验观察卟啉Ⅰ在有或无光照条件下对人正常肝L-02细胞、肺腺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用。结果孵育24 h后HeLa细胞对卟啉Ⅰ的吞噬量是前体卟啉A的35倍,且这种吞噬作用可被过量叶酸的加入明显抑制;卟啉Ⅰ对HeLa细胞呈现出很低的暗毒性和明显的光毒性,光照下在卟啉Ⅰ浓度为5.0×10-5mol/L时,HeLa细胞的生长抑制率达到84.6%;并且这种光毒性具有明显的叶酸受体阳性细胞选择性,在相同条件下,对正常L-02肝细胞和叶酸受体阴性A549细胞无光毒性。结论卟啉结构中引入叶酸单体后,由于叶酸受体的介导作用明显改善了该光敏剂的肿瘤靶向性和光动力活性。

三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其机制。方法MTT法观察生长抑制情况;双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及测定Hela细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Bcl-2表达。结果As2O3可显著抑制Hela细胞生长增殖,且剂量—效应关系显著(P<0.01)。Hela细胞经As2O3处理后可发生凋亡,As2O3能显著下调PCNA表达(P<0.01),但对Bcl-2表达无影响。结论As2O3在体外可显著抑制人宫颈癌Hela细胞生长,其机制可能与诱导细胞凋亡、降低PCNA蛋白表达有关。