抗真菌内切几丁质酶酶学性质及制备低聚壳寡糖功能分析

为开发几丁质及壳聚糖生物转化活性寡聚糖并实现几丁质酶在食品防腐及生防方面的应用,从金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)XZ-Sa62中分离纯化几丁质酶(ChiA-Sa62),并研究其生物转化及抗菌功能。本实验采用Q-Sepharose Fast Flow、Sephadex G-100层析和反相高效液相色谱纯化ChiA-Sa62,经纯化后ChiA-Sa62纯化倍数为41.3倍,比活力为1119.8 U/mg。并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱测得ChiA-Sa62是分子质量为62.55 kDa的单亚基蛋白。ChiA-Sa62在50℃和pH 5.0的条件下,活性最高,并在60℃以下及pH 3.0~9.0范围内有良好稳定性。金属盐离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)和Co^(2+)可激活酶活性。ChiA-Sa62对几丁质及脱乙酰度75%的壳聚糖具有专一内切水解活性,薄层色谱显示,水解产物分别为2~5个N-乙酰氨基葡萄糖单位的几丁寡糖和2~4个D-氨基葡萄糖单位的壳寡糖。ChiA-Sa62对底物胶体几丁质的米氏常数K_m和最大反应速率V_(max)值分别为2.75 mg/mL和64.52 U/mg。ChiA-Sa62可强烈抑制所试病原真菌菌丝生长;碘化丙啶染色显示,经ChiA-Sa62处理后的灰葡萄孢菌丝其细胞膜受到破坏。水解产物壳寡糖对致病性G^(-)菌(大肠杆菌和铜绿假单胞菌)和G~+菌(金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌)有抑制作用,并且LIVE/DEAD染色显示壳寡糖可致使金黄色葡萄球菌死亡。本实验结果表明,Chi A-Sa62几丁质及壳聚糖在生物转化以及食品防腐及生物防治方面具有较大的应用潜力。

血清几丁质酶-3样蛋白1与血液透析患者预后关系的研究

目的探讨血清几丁质酶-3样蛋白1(chitinase 3-like protein 1,CHI3L1)与血液透析患者全因死亡和心脑血管疾病死亡之间的关系。方法本研究为前瞻性队列研究,病例来自2014年9月北京大学第三医院肾内科维持性血液透析患者。测定基线血CHI3L1水平,并根据中位数将患者分为高CHI3L1组和低CHI3L1组,随访9年。用Kaplan-Meier生存分析高CHI3L1组和低CHI3L1组患者生存率的差异,用限制性立方样条(restricted cubic spline,RCS)曲线描述CHI3L1与全因死亡率的剂量反应关系,用多因素COX比例风险模型分析患者全因死亡或心脑血管疾病死亡的独立危险因素。结果共纳入109例患者,随访时间为80.0(38.2,113.2)个月。Kaplan-Meier生存分析显示高CHI3L1组患者全因死亡率高于低CHI3L1组(χ^(2)=4.720,P=0.030),2组患者心脑血管疾病死亡率无明显差异(χ^(2)=1.954,P=0.162)。当CHI3L1≥199.8 ng/ml时,全因死亡率随着CHI3L1水平的增加有明显增加(HR=1.747,95%CI:1.035~2.947,P=0.037)。COX回归分析结果显示:年龄增加(HR=1.029,95%CI:1.001~1.056,P=0.040)、长透析龄(HR=2.251,95%CI:1.310~3.868,P=0.003)、收缩压高(HR=1.022,95%CI:1.008~1.036,P=0.002)、血肌酐低(HR=0.135,95%CI:0.064~0.283,P<0.001)均为血液透析患者全因死亡的独立危险因素,多种因素校正后高CHI3L1仍然是患者全因死亡的独立危险因素(HR=1.963,95%CI:1.010~3.813,P=0.047)。结论高CHI3L1组患者全因死亡率高于低CHI3L1组患者,血CHI3L1可能是血液透析患者全因死亡的独立预测指标。

几丁质脱乙酰酶的生物学功能、三维结构及其抑制剂的研究进展

由于农用化学品存在靶标有限性和耐药性等问题,新靶标的开发成为农药研发的重中之重。几丁质是昆虫表皮和真菌细胞壁的主要组成成分,具有重要的生物学功能。几丁质脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)可将几丁质脱乙酰化为壳聚糖,这一过程除了影响昆虫体壁和真菌细胞壁的形成外,还可调控昆虫的生长发育或决定病原菌的致病性。越来越多的研究表明,CDA有望成为新农药创制的候选靶标。本文介绍了CDA作为作物保护潜在靶标的研究进展,主要综述了当前不同来源CDA的生化功能、晶体结构、酶与底物的结合模式和以及近年来已报道的以CDA为靶标的抑制剂的研究进展,可为以几丁质脱乙酰酶为靶标的抑制剂的筛选以及新型农药的开发提供指导。

Rhizopus stolonifer几丁质脱乙酰酶的异源表达及其与几丁质酶的协同作用研究

几丁质脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)是几丁质生物转化为壳聚糖的关键酶。然而,目前报道的高活性CDAs非常少。为了获得高效的CDA,并提高其对几丁质的生物转化效率,该研究对来源于Rhizopus stolonifer中的CDA进行基因克隆、表达及纯化,获得几丁质脱乙酰酶Rs CDA1,研究其酶学性质并探究其与来源于Vibrio harveyi的几丁质酶Vh Chit2对几丁质的协同水解作用。结果表明,Rs CDA1的比酶活力为5.2 U/mg,在45℃、pH 6.5条件下活性最高,在温度低于40℃、pH 6.5~8.0保持较好的稳定性。1 mmol/L的Ca^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、Ba^(2+)和Co^(2+)对Rs CDA1的活力有促进作用;1 mmol/L的Ni^(2+)和Cu^(2+)对该酶有抑制作用。此外,Rs CDA1与Vh Chit2在几丁质水解中表现出良好的协同降解和脱乙酰作用。Rs CDA1与Vh Chit2(摩尔浓度比为10∶1)在50℃、pH 6.5条件下水解20 mg/mL几丁质2 h时,对几丁质酶和CDA的协同度分别达到120.3%和175.6%。与单独使用Rs CDA1相比(27.5%),两者协同水解时几丁质的脱乙酰度增加到35.3%。因此,Rs CDA1在几丁质的生物转化中具有潜在的应用前景。

野生大豆与栽培大豆几丁质酶基因鉴定及其表达分析

几丁质酶是以几丁质等为底物的糖基水解酶(GH,glycosyl hydrolases),在植物生长发育及抵御逆境中发挥重要功能。然而,大豆几丁质酶基因的组织表达模式及对逆境的响应尚不清楚,影响了其在遗传改良中的应用。本研究分别鉴定野生大豆与栽培大豆几丁质酶基因,并分析其表达模式。结果发现,野生大豆与栽培大豆分别含62个和55个几丁质酶基因,位于17条和18条染色体上;进化树分析发现,117个基因分为5类,其中类群Ⅲ与类群Ⅴ属于GH18亚家族,类群Ⅰ、类群Ⅱ与类群Ⅳ属于GH19亚家族;启动子分析发现,几丁质酶家族成员包含响应激素及逆境胁迫顺式作用元件。栽培大豆几丁质酶基因表达分析发现,其在不同组织及抗病耐逆等过程差异表达,其中Gm.01G142400和Gm.13G346700等在接种花叶病毒的抗病品种叶片中诱导表达,Gm.03G254300和Gm.20G164600等在低磷胁迫的磷高效品种根系中诱导表达,Gm.08G259200和Gm.19G245400等在低磷胁迫根瘤中诱导表达;野生大豆几丁质酶基因表达分析发现,其在不同组织及耐盐过程差异表达,其中Gs.02G002604和Gs.02G002940等在盐胁迫耐盐品种叶片中诱导表达。以上结果为挖掘利用几丁质酶基因奠定了基础。

少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492对线虫的降解作用研究

【目的】为探究捕食线虫真菌少孢节丛孢菌几丁质诱导过程中分泌蛋白AO-492的生物学功能。【方法】对少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492主要结构域编码区进行基因克隆及分子特征分析,并在毕赤酵母中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白ReAO-Z492,采用NAG检测法分析了该重组蛋白在不同温度、pH及金属离子条件下的酶学活性,并将其作用于秀丽隐杆线虫及虫卵分析其生物学功能。【结果】几丁质酶AO-492有信号肽,无跨膜结构域,含有两个几丁质结合结构域和一个糖苷水解酶18家族结构域,并含有糖苷水解酶18家族几丁质酶高度保守的底物结合位点-SVGGWT-和水解酶活性位点-FDGGDLDWE-,含有典型的TIM桶形分子结构。系统进化分析显示,该蛋白与坚粘孢单顶孢几丁质酶(EPS35099.1)的亲缘关系相对最近。SDS-PAGE和Western Blot分析表明,ReAO-Z492分子量约为59 kD,可与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性反应。ReAO-Z492最适温度为40℃,最适pH为7.0;Mg^(2+)对其酶活有促进作用,而Ag^(+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)和Zn^(2+)有抑制作用。ReAO-Z492对秀丽隐杆线虫体壁及其虫卵卵壳有较强的降解活性。【结论】少孢节丛孢菌几丁质酶 AO-492 对秀丽隐杆线虫及虫卵具有较强的降解作用。

不同环境和营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌生长、产孢及几丁质酶表达的影响

[目的]研究温度、pH和不同营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)生长及产孢特性的影响,分析其在碳氮饥饿条件下几丁质酶的表达水平,优化该菌的培养条件,为该菌的扩大培养提供参考依据。[方法]将圆锥节丛孢菌AC-shz1菌株接种于YPSSA培养基,分别置于不同温度(15、20、25、30和35℃)、pH(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0)、碳源(果糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素、几丁质)、氮源(甘氨酸、苯丙氨酸、蛋白胨、酵母粉、硫酸铵、尿素)和碳氮比(1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、40∶1)环境条件下进行培养,观察并记录菌丝的生长速度及形态,测定其产孢能力;在碳氮源饥饿条件下,采用实时荧光定量PCR方法对4种几丁质酶基因的表达水平进行分析。[结果]圆锥节丛孢菌在温度15~30℃均能生长,其中以25℃时菌丝生长最快且产孢能力最强;在pH为6.5~7.5时菌丝生长良好,其中以pH 7.0时产孢能力最强。圆锥节丛孢菌最适菌丝生长和产孢碳源为葡萄糖和蔗糖,其中含葡萄糖的培养基产孢量最高;最适氮源为酵母粉和蛋白胨,含酵母粉的培养基产孢量最高,以葡萄糖和酵母粉为碳氮源的最适碳氮比为5∶1。与对照组相比,在碳饥饿条件下,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-14(AC-14,P<0.01)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-190(AC-190,P>0.05)基因转录水平上调,捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-379(AC-379,P>0.05)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-483(AC-483,P<0.01)基因转录水平下调;在氮饥饿条件下,上述4种几丁质酶基因转录水平均极显著下调(P<0.01)。[结论]菌丝生长和产孢最适温度为25℃,最适pH为7.0,最适碳氮源分别为葡萄糖和酵母粉,最适碳氮比为5∶1。本研究结果为进一步研发具有高效的捕食线虫真菌生物防控制剂奠定了基础。

转杜仲几丁质酶基因EuCHIT1烟草对真菌抗性增强的研究

本研究从杜仲中分离并克隆了杜仲几丁质酶基因EuCHIT1,全长为1402 bp,包括序列长度为969 bp的开放阅读框,编码322个氨基酸。为验证EuCHIT1的抗菌能力,构建植物过表达载体pSH-35S-EuCHIT1后对烟草进行遗传转化获得转基因植株并开展了相关实验。结果表明,转基因烟草的几丁质酶含量显著高于野生型烟草,且添加了烟草粗蛋白EuCHIT1的培养基对尖孢镰刀菌的生长有着明显的抑制作用,同时,EuCHIT1基因显著增加了烟草叶片中过氧化氢酶(CAT)的活性。此外,为转EuCHIT1基因烟草对真菌病害的抗性机理进行研究,分析了转基因植株和野生型中水杨酸途径的关键基因PR-1a,与茉莉酸途径的关键基因COI1在接种灰霉菌之后的表达量。结果表明,转基因植株的COI1与PR-1a在接种病原菌前的表达量均显著高于野生型植株。但接种病原菌后,COI1的表达受到抑制,而PR-1a基因在接种病原菌后的最大表达量是野生型烟草的33.8倍。说明EuCHIT1基因的过表达增强了烟草对真菌的抗性,提高烟草的CAT活性及植株中病程相关蛋白基因的表达,从而增强植株对灰霉菌的抑制作用,提高植株的抗真菌病害能力。

基于黏虫转录组的几丁质酶基因筛选和表达分析

昆虫的几丁质酶对昆虫的生长发育致关重要,是生物农药的重要靶标。本研究使用高通量测序技术对迁飞性害虫黏虫Mythimna separata的中肠和表皮组织进行了转录组测序、序列组装、功能注释及差异表达基因分析。对转录组数据库中鉴定出的几丁质酶基因进行了理化性质的预测,包括cDNA长度、蛋白质分子量、氨基酸序列、等电点、不稳定系数、跨膜结构和蛋白结构域等。使用MEGA软件构建了黏虫和其他昆虫几丁质酶的系统进化树,并通过q-PCR验证了黏虫基因在不同组织和发育阶段的表达模式。通过中肠与表皮的转录组测序,获得了19.42 Gb的数据,在COG、GO、KEGG、KOG、Pfam、Swissprot、eggNOG、nr数据库注释到了25236个Unigene;基因表达分析结果表明,中肠和表皮的差异表达基因共有3137个,其中中肠高表达基因有1872个,表皮高表达基因有1265个。从转录组数据中鉴定出9个几丁质酶基因,其中7个是新的几丁质酶基因,这些基因的cDNA长度在1362~9816 bp,SMART结构预测表明几丁质酶含有1个或多个催化结构域。构建的系统进化树将昆虫几丁质酶基因分为9个亚家族。q-PCR结果表明MsCht2、MsCht5、MsCht6、MsCht7、MsIDGF1在表皮中表达量较高,MsCht4、MsCht11和MsChi-H在中肠中表达量较高,与转录组数据一致;多数几丁质酶基因在蛹期或预蛹期表达量最高,而MsCht4在5龄期表达量最高,在蛹期表达量很低。黏虫几丁质酶基因表达上存在不同的差异,不同的几丁质酶基因可能具有不同的功能。本研究筛选出了7个新的几丁质酶基因,为黏虫的生物防治提供了新的靶标。研究结果为进一步研究黏虫几丁质酶的功能奠定了基础。

丽蝇蛹集金小蜂几丁质酶基因鉴定与表达分析

几丁质酶是降解几丁质的糖苷水解酶,参与昆虫蜕皮、器官发育、免疫等重要生理过程。目前,寄生蜂等膜翅目昆虫中几丁质酶的鉴定以及功能研究仍较少。本研究基于生物信息学分析,在丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis基因组中鉴定到14个几丁质酶基因,氨基酸个数介于312~2682之间。系统进化分析表明丽蝇蛹集金小蜂几丁质酶分为9个亚家族,其中GroupⅣ、Ⅶ亚家族可能通过基因串联复制而发生基因家族扩增。qRT-PCR分析结果表明几丁质酶基因的表达具有多样性,其中NvCht1、NvCht5、NvCht6、NvCht74个基因在1.5 d幼虫表达量最高,NvCht3在5 d幼虫表达量最高,NvCht8在幼虫期高表达。此外,幼虫组织中的表达分析结果表明NvCht4、NvCht5、NvCht10、NvCht12在表皮中高表达,NvCht7、NvCht8、NvCht13在肠道中高表达,NvCht9在脂肪体和表皮中高表达,NvCht11在唾液腺中高表达。本研究为寄生蜂几丁质酶的进化分析以及功能研究提供理论基础。

昆虫Ⅱ家族几丁质酶的生理功能、结构特征及其抑制剂研究进展

昆虫几丁质酶可以降解昆虫体壁和围食膜中的几丁质,在昆虫蜕皮等生命活动中发挥重要功能。作为参与昆虫几丁质降解系统的关键酶,Ⅱ家族几丁质酶(ChtⅡ)是少见的多结构域、性质复杂的几丁质酶。对昆虫中编码ChtⅡ的基因沉默会导致昆虫蜕皮失败及死亡率增加。对ChtⅡ的生化性质及晶体结构分析表明,其在几丁质降解系统中起到了“先锋及攻坚”的作用。因此,ChtⅡ有望成为新的杀虫剂靶标。本文综述了近年来关于ChtⅡ的生理功能、结构特征及其抑制剂的研究成果,可为基于昆虫几丁质酶的新杀虫剂创制提供参考。

甲壳动物几丁质酶基因的结构与功能

综述几丁质酶的分类,并以50条甲壳动物几丁质酶为例,验证氨基酸同源性的分类方式可以将甲壳动物几丁质酶细分为Group 1~Group 7。重点介绍甲壳动物几丁质酶的结构和功能,结构方面主要从Group 1~Group 7几丁质酶氨基酸序列的保守基序(Motif)组成特点和Group 1~Group 7几丁质酶结构域组成特点进行阐述,并以三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)几丁质酶为例结合解析过的几丁质酶结构,预测甲壳动物几丁质酶三维空间结构特点;功能方面几丁质酶主要参与几丁质食物的消化、蜕皮时旧壳的消化以及通过降解病原体几丁质外壳来对抗病原,发挥免疫防御的功能。

海洋菌株Aeromonas sp.YS-54来源几丁质酶的制备与性质研究

为实现甲壳类原料的高效降解与N-乙酰氨基寡糖的绿色制备,本研究以青岛近海土壤中筛选的菌株YS-54为材料,使用60%硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析制备几丁质酶;对几丁质酶的最适温度、最适pH、底物偏好性等性质进行表征;使用质谱技术确认了酶解产物的聚合度。结果表明,菌株YS-54为Aeromonas属,该菌株来源几丁质酶比活力为23.44 U/mg,分子量为63与75 kDa。几丁质酶在40℃和pH为5.0条件下具有良好的稳定性,Ba^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)与TritonX-100显著促进了几丁质酶活力(P<0.05),而Fe^(3+)、Cu^(2+)、SDS对酶活力起抑制作用。几丁质酶对α-几丁质的比活力为7.99 U/mg,为水解胶体几丁质比活力的34.09%。几丁质酶对胶体几丁质与α-几丁质的酶解产物聚合度分别为1~4与1~3。Aeromonas sp.YS-54来源几丁质酶在较宽的温度与pH范围内保持稳定,同时对α-几丁质具有良好的水解能力,可为甲壳类废弃物的高效综合利用提供技术支持。

血清几丁质酶-3类蛋白-1、CC趋化因子受体2水平与急性缺血性脑卒中患者病情严重程度的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清几丁质酶-3类蛋白-1(CHI3L1)、CC趋化因子受体2(CCR2)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)病情严重程度的关系及对预后的评估价值。方法选取2021年6月至2022年12月于邯郸市第一医院就诊的AIS患者129例作为AIS组,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估病情严重程度,将患者分为轻度组63例、中度组39例和重度组27例,随访3个月后依据改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组97例和预后不良组32例。另选取同期97例体检者作为对照组。检测并比较AIS组与对照组、不同严重程度和不同预后AIS患者血清CHI3L1、CCR2水平。利用二元Logistic回归法分析AIS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估CHI3L1、CCR2水平对AIS患者预后的预测价值。结果AIS组血清CHI3L1、CCR2水平高于对照组(t=38.958、21.382,P<0.05);轻度组、中度组和重度组血清CHI3L1、CCR2水平差异有统计学意义(F=31.538、34.760,P<0.05);预后良好组患者血清中的CHI3L1、CCR2水平低于预后不良组(t=6.226、8.694,P<0.05);Logistic回归结果显示,CHI3L1、CCR2水平均是AIS患者预后不良的危险因素(OR=1.493、2.593,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清CHI3L1、CCR2及两者联合预测AIS患者预后的曲线下面积分别为0.869、0.882、0.965,敏感度为70.10%、86.60%、87.63%,特异度为93.75%、90.62%、96.87%,两者联合预测优于血清CHI3L1、CCR2单独预测(Z=2.990、2.931,P<0.05)。结论AIS患者病情越严重血清CHI3L1、CCR2水平越高,两者均可预测AIS患者预后不良,两者联合预测效能更佳。

急性肾盂肾炎患者中段尿病原菌检测及与血清几丁质酶3样蛋白1、降钙素原表达的相关性

目的探讨急性肾盂肾炎患者中段尿病原菌检测及与血清几丁质酶3样蛋白1(YKL-40)、降钙素原(PCT)表达的相关性。方法选择2018年10月至2022年10月焦作市人民医院收治的64例急性肾盂肾炎患者,将其作为急性肾盂肾炎组,另选择同期于本院进行健康体检的70例健康体检者,将其作为健康对照组。将急性肾盂肾炎组中的所有患者按照发病次数分为初次发作组(44例)和多次发作组(20例)。将健康对照组研究对象与急性肾盂肾炎患者各项血清指标进行对比,将初次发作组和多次发作组患者各项血清指标进行对比,将初次发作型和多次发作型患者中段尿病原菌分布情况进行对比,对比革兰阴性菌组和革兰阳性组急性肾盂肾炎患者各项血清指标,采用Pearson软件分析不同病原菌感染急性肾盂肾炎患者血清YKL-40、PCT与胱抑素C(CysC)指标的相关性。结果相较于健康对照组,急性肾盂肾炎组患者血清YKL-40、PCT、CysC水平更高(均P<0.05);64例急性肾盂肾炎组患者中有40例病原菌培养阳性,其中初次发作组22例,多次发作组18例;共培养出43株病原菌,其中初次发作组22株,多次发作组21株,两组患者均以革兰阴性菌为主;相较于革兰阴性菌组,革兰阳性菌组患者血清YKL-40、PCT、CysC水平更低(均P<0.05);不同感染类型患者血清YKL-40、PCT水平与CysC呈正相关(均P<0.05)。结论急性肾盂肾炎患者血清PCT、YKL-40水平异常升高,且相较于革兰阳性菌组患者,感染革兰阴性菌患者上述指标水平较高,不同感染类型患者血清YKL-40与PCT水平呈正相关,临床可结合血清YKL-40与PCT水平及感染情况对患者采取合适的治疗措施。

豌豆蚜几丁质脱乙酰酶(ApCDAs)的鉴定及表达特性

通过BLAST比对和软件分析,共筛选出4个豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)几丁质脱乙酰基因( ApCDA1、 ApCDA2、 ApCDA3和 ApCDA5),并分析了其生物学信息;通过实时荧光定量PCR技术,发现4个ApCDAs在各发育阶段均有表达,其中, ApCDA1基因在1龄、2龄若虫和成虫期表达量较高;ApCDA2基因在4龄若虫的表达量高于其他龄期;ApCDA3基因在各发育阶段后期的表达量显著高于前期和中期,2龄若虫后期表达量最高;ApCDA5基因在3龄若虫的表达量偏高,2龄后期的表达量最高;此外, ApCDA1和 ApCDA3在3龄若虫和成虫中肠、胚胎和表皮内的表达量均显著高于 ApCDA2和 ApCDA5。结果表明,ApCDAs基因对豌豆蚜的生长发育和蜕皮具有重要作用。

肯尼亚拟盘多毛孢几丁质酶基因鉴定及表达分析

利用生物信息学方法从重寄生肯尼亚拟盘多毛孢(Pestalotiopsis kenyana)PG52菌株基因组中挖掘几丁质酶基因并分析,通过检测锈孢子诱导不同时间段基因的表达情况筛选重寄生相关几丁质酶基因。结果表明:在PG52中共鉴定到20个GH18家族和1个GH19家族几丁质酶基因,分子量38.0~177.2 kDa,理论pI值范围3.97~9.25;其中7个有信号肽,13个定位在胞外。所有PGChns基因都含有GH18家族或GH19家族保守结构域;与木霉几丁质酶序列聚类分析显示,PG52含有7个sgA、4个sgB、8个sgC、1个sgD几丁质酶基因。锈孢子诱导下共18个几丁质酶基因在转录组中被检测到表达,7个基因在诱导24 h时表达量最高,6个基因在经诱导后持续下调表达,4个基因在诱导72 h时表达量最高。对6个表达量高以及表达倍数高的基因进行RT-qPCR分析,所有基因均出现显著差异表达,并在诱导72 h时表达量最高。经诱导后上调表达的PGChns很可能在PG52菌株重寄生过程中发挥破坏锈孢子壁的作用,需要后续进一步验证。

血清壳多糖酶3样蛋白1和几丁质酶1在脓毒症新生儿中的表达变化及其临床价值研究

目的:探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)和几丁质酶1(CHIT1)在脓毒症新生儿中的表达变化及临床价值。方法:选取新生儿脓毒症95例为脓毒症组,根据病情严重程度分为严重脓毒症组(65例)和脓毒症休克组(30例)。选取健康新生儿65例为对照组。检测血清CHI3L1和CHIT1水平以及白细胞计数、中性粒细胞计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)。分析血清CHI3L1、CHIT1水平与白细胞和中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT、CRP的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CHI3L1、CHIT1水平对脓毒症患儿预后的预测价值。结果:脓毒症组血清CHI3L1、CHIT1水平高于对照组(均P<0.05)。脓毒症休克组患儿血清CHI3L1和CHIT1水平、中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT、CRP高于严重脓毒症组(均P<0.05)。脓毒症患儿血清CHI3L1、CHIT1水平与中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT及CRP呈正相关(均P<0.05)。95例脓毒症患儿中病死15例,存活80例,病死组血清CHI3L1、CHIT1水平高于存活组(均P<0.05)。血清CHI3L1、CHIT1水平对脓毒症患儿预后均有一定的预测价值,且两者联合预测价值更高(均P<0.05)。结论:脓毒症新生儿血清CHI3L1和CHIT1水平升高,与病情严重程度及不良预后有关,两者联合对脓毒症新生儿的预后具有较高的预测价值。

血清前列腺素内过氧化物合酶2、几丁质酶3样蛋白1水平与精神分裂症患者认知功能的关系

目的:探究血清前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin endoperoxide synthase 2,PTGS2)、几丁质酶3样蛋白1(chitinase 3-like protein 1,CHI3L1)水平与精神分裂症患者认知功能的关系。方法:选取130例精神分裂症患者设为研究组,同期来院体检的96名健康体检者作为对照组。采用精神分裂症认知功能成套测验(MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)评分评估研究对象的认知功能。检测两组研究对象血清PTGS2、CHI3L1水平。Pearson法分析精神分裂症患者血清中PTGS2与CHI3L1水平与MCCB评分的相关性。结果:与对照组相比,研究组精神分裂症患者血清PTGS2、CHI3L1水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05),精神分裂症患者连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。血清PTGS2、CHI3L1水平与连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均呈负相关(P均<0.05)。结论:血清PTGS2、CHI3L1水平均与精神分裂症患者的认知功能呈负相关,是评估精神分裂症患者认知功能的潜在标志物。

HearNPV几丁质酶对CypoGV的协同增效作用

利用大肠杆菌可溶性表达棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)几丁质酶,用表达粗产物与苹果蠹蛾颗粒体病毒(CypoGV)按不同比例混合喂食3龄苹果蠹蛾幼虫,测定其对CypoGV的增效作用。生测结果显示,表达的可溶性He-arNPVChiA在2.0μg/mL的添加水平时,LT50和LT90分别比对照缩短了13.7%和20.7%。研究结果说明HearN-PVChiA对CypoGV具有明显增效作用。