“锚定结”法小鼠颈部异位心脏移植模型构建及其稳定性测试

目的在传统Cuff法(“袖套”法)血管吻合技术基础上进行改良,优化小鼠颈部异位心脏移植操作步骤、过程,以建立更稳定的小鼠颈部异位心脏移植模型。方法将6~8周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量20~24 g)分为实验组(通过“锚定结”法进行小鼠颈部异位心脏移植)和对照组(用传统Cuff法进行小鼠颈部异位心脏移植)。记录各项操作步骤时间、血管外翻次数、血管修剪次数、实验失败原因等。术后每天观察、触摸判断小鼠颈部供心存活情况,存活>48 h为移植成功。术后第7、14天HE染色观察实验组小鼠吻合血管处组织;第7天心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)染色观察2组小鼠供心。结果①实验组共进行25只移植,失败2只,供心存活率92%;对照组共进行25只移植,失败8只,供心存活率68%。实验组动脉平均外翻1.16次,修剪0.04次;静脉平均外翻1.16次,修剪0.04次。对照组动脉平均外翻2.00次,修剪0.21次;静脉平均外翻2.28次,修剪0.46次。②实验组、对照组的颈部心脏移植总时间[(77.22±3.82)vs(87.49±8.01)min]、分离血管+套管时间[(30.06±2.68)vs(36.50±6.67)min]、颈部血管吻合时间[(7.31±1.08)vs(12.34±2.58)min]差异有统计学意义(P<0.05)。③术后第7、14天实验组吻合血管处组织HE染色显示血管通畅。④术后第7天供心cTnT染色情况提示对照组、实验组均无大面积坏死。结论“锚定结”法进行小鼠颈部异位心脏移植保证了单人显微操作的稳定、高效,术后供心存活时间长、吻合血管通畅率高、心功能状态好、术后并发症少。

改良Cuff技术建立小鼠颈部异位心脏移植模型

目的改进Cuff技术制作小鼠颈部异位心脏移植模型,以简化手术操作,提高手术成功率。方法使用自制套管将供心肺动脉套接于受体右颈外静脉,将供心升主动脉套接于受体右颈总动脉。结果正式实验40例,手术成功率92.5%。手术时间约60 min,供心冷缺血时间小于30 min。结论改良Cuff技术建立小鼠颈部异位心脏移植模型,无需显微外科操作,是一种经济实用、稳定可靠、易于复制的动物模型。

小鼠颈部异位心脏移植模型的初步探索

目的探讨初学者使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型的技术要点与难点。方法第1阶段选用C57BL/6小鼠随机分为供、受体,完成手术建模。术后供心复跳,小鼠活动正常,持续3天以上视为手术成功,3天内供心停跳或小鼠死亡视为手术失败,记录失败原因。第2阶段分为同系组(C57BL/6小鼠为供、受体)与模型组(BALB/c小鼠为供体、C57BL/6小鼠为受体),术后每天观察供心活动状态记录移植物存活时间(n=9);术后第7天移植心脏取材固定,HE染色,记录供心排斥反应病理分级(n=9)。结果第1阶段解决了麻醉意外、手术操作不当、血管套管外翻失败、供心结扎口出血、静脉连接处淤血、环境温度过低和术后感染等问题后成功建模;第2阶段模型组较同系组移植物生存期明显缩短(P<0.01),排斥反应病理分级显著升高(P<0.01),模型组移植物心肌细胞损伤、间质水肿、出血,大量炎性细胞浸润,呈中到重度急性排斥反应表现。结论使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,省去了血管吻合这一技术难点,大大降低手术难度,其中0.4mm×0.5mm、0.8mm×1.0mm套管的选用值得推广与学习。

套管法建立小鼠颈部心脏移植模型的探讨

目的探讨套管法建立小鼠颈部心脏移植模型的优越性。方法供体、受体均为小鼠,将受体颈总动脉、颈外静脉制成套管,再分别与供心升主动脉、肺动脉行套管吻合。结果经过25次正式实验,手术成功率为92.0%,供心总缺血时间约20 min,术后平均存活(16.0±2.5)d。结论套管法简单可靠,手术成功率高,术后并发症少,供心总缺血时间短,术后血管通畅性好,是建立小鼠颈部心脏移植模型的优选方法。

大鼠左肺原位移植模型手术技术改进

目的探讨建立更简便有效的大鼠左肺原位移植模型。方法将40只雄性SD大鼠随机分成供、受体2组,采用手术技术改进的三套管法建立大鼠左肺原位移植模型。结果 2例手术死亡,18例手术获得成功,受体手术时间平均(35±4)min,术后均存活30d以上,阻断大鼠的右肺门前后行动脉血气分析,结果无明显差异(P>0.05)。结论该方法具有操作简单,成功率高,手术时间短的特点,可用于建立大鼠左肺原位移植模型。

“袖套”法小鼠颈部异位心脏移植模型的改进

目的探讨小鼠颈部异位心脏移植模型的建立和手术方法的改进。方法采用“袖套”法血管吻合术(cuff技术),进行50次小鼠颈部异位心脏移植。结果该方法使供心术中缺血时间<30 min,7 d存活率可达到94.00%。结论改进后的模型简单实用,便于单人操作,提高了小鼠颈部心脏移植存活率,效果满意,值得推广。

无心跳供体大鼠同种异体左肺原位移植模型的热缺血时限

目的建立无心跳供体(NHBD)大鼠同种异体左肺原位移植模型,比较不同热缺血时间(WIT)对大鼠移植肺功能和结构的影响。方法将32只SD大鼠按供受体随机配对成16对,分成4组,分别为有心跳供体组(对照组,HBD)、NHBD热缺血1 h组(实验组,NHBD1h)、热缺血2 h组(实验组,NHBD2h)和热缺血3 h组(实验组,NHBD3h),每组4对。供肺摘取后置于4℃低钾右旋糖苷(LPD)液中4 h。采用三"袖套"套管法行左肺原位移植术。测定和观察移植前、移植后10 min1、h和2 h的右颈动脉血气,移植后2 h的左肺静脉血气、移植肺湿/干重比和组织形态学改变。结果NHBD1h组移植肺再灌注10 min1、h和2 h所采集的右颈动脉血PaO2数值(177.8±15.5、162.0±19.3和195.5±26.4)和对照组HBD组(187.3±34.4、191.8±36.6和198.8±36.6)的差别没有统计学意义;再灌注10 min和2 h,NHBD2h组右颈动脉血PaO2数值(154.8±25.2和116.5±32.1)以及NHBD3h组(121.0±28.2和88.3±23.6)和对照组的差别有统计学意义(P<0.05)。移植肺再灌注2 h后,NHBD1h组左肺静脉血PaO2数值与对照组的差别没有统计学意义(132.3±33.8vs143.8±17.1),NHBD2h和NHBD3h组与对照组的差别均有统计学意义(78.8±16.1vs143.8±17.1,70.8±15.5vs143.8±17.1,P<0.05)。NHBD3h组的湿/干重比数值和肺损伤程度病理评分与对照组的差别有统计学意义(P<0.05)。结论本实验成功建立了NHBD大鼠同种异体左肺原位移植模型,在本实验动物模型中,大鼠可以耐受的WIT为1 h。

改良三套管法建立小鼠左肺原位移植模型

目的探讨采用改良三套管法建立稳定的小鼠左肺原位移植模型。方法取近交系雄性C57BL/6小鼠50只随机分为供体、受体,二者体重相近,采用改良三套管法进行左肺原位移植,术后4周进行显微胸部CT、动脉血气分析及病理学检测。结果该实验行肺移植25例,除1例因肺静脉撕裂致手术失败外,余24例均成功进行移植手术,手术成功率为96%(24/25)。术后1例受体鼠因呼吸道分泌物过多致气道阻塞而死亡,死亡率为4.2%(1/24)。供肺灌注到摘取时间为(6.2±1.8)min,供肺体外套管所需时间(15.0±2.4)min,供、受者完成吻合所需时间为(31.6±5.2)min,冷缺血时间为(32.5±3.5)min,热缺血时间为(31.3±8.9)min,整个手术过程耗时(88.0±12.0)min。术后4周,显微CT检查结果显示,受体鼠移植肺野清晰,膨胀良好;血液气体分析结果显示,阻断右肺门前、后的氧气分压比较,差异无统计学意义(P>0.05);移植肺组织的病理学检查显示,与正常右肺相比,移植左肺结构正常,肺泡通气良好。结论改良后的三套管法是一种简单有效、经济实用的吻合方法,可以成功地建立稳定的小鼠左肺原位移植模型。

“非内皮化袖套”建立大鼠左单肺移植模型应用于短期观察

目的：建立非内皮化袖套大鼠左单肺移植模型，以期应用于短期观察。方法：选用纯种雄性 SD 大鼠，体重250～350g，呼吸机 支持和显微外科技术下利用套管完成了20只大鼠左单肺移植。结果：20只移植鼠至实验结束存活17只，成功率为85%，套管成功 率为100%。3只失败大鼠中2只为移植再灌注后分别于75min 与90min 左右后心跳停止死亡，1只为大鼠仍存活，但开胸取肺时见 肺动脉和静脉内血栓形成，移植肺没有灌注。结论：非内皮化袖套大鼠左单肺移植手术较传统袖套技术更易掌握，手术时间缩短，成 功率较高，此动物模型应用于观察时间较短的再灌注损伤的研究是合乎要求的。

颈部袖套法建立小鼠-大鼠异种心脏移植模型

背景:小动物心脏移植模型是器官移植基础与临床研究的常用模型和重要手段,移植部位多为颈部和腹部。其中颈部异位移植最大的优点在于移植心位于颈部皮下,有利于对供心搏动情况进行直接观察,进而早期预判排斥反应的发生。目的:对小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型的麻醉方式、手术操作、围手术期处理等方面进行改进,以期建立更加稳定的动物模型。方法:采用改良袖套法建立异位异种心脏移植模型,将小鼠供心移植到受体大鼠的右侧颈部,主要改进了摘取供心的方法,并使用小动物麻醉机进行异氟烷吸入性麻醉。模型建立分为练习、稳定和定型3个阶段。取部分实验标本做组织病理学检查。结果与结论:模型建立练习阶段、稳定阶段和定型阶段手术成功率分别为53.33%,85.71%和96.15%,稳定及定型阶段手术成功率明显高于练习阶段(P<0.05);稳定和定型阶段手术总操作时间明显短于练习阶段(P<0.05)。组织病理学结果显示,异种心脏移植后出现供心血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血和炎症细胞浸润等现象,较正常心脏和同系移植均有明显改变,并且有随移植术后时间延长而逐渐加重的趋势,证实了模型的可靠性。提示小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型操作简便、稳定可靠,短时间内即可熟练掌握,成功率高,是研究异种移植排斥反应的理想动物模型。

套管法建立同系与异系大鼠颈部心移植模型的比较

目的：观察套管法建立同系与异系大鼠颈部心移植模型后的动物存活与形态学变化，进而探讨该方法的操作技巧，以提高成功率。方法：套管法制备同系（Wistar-Wistar）与异系（Lewis—Wistar）大鼠颈部心移植模型，另对异系移植动物行腹腔注射环胞霉素。术后观察移植物的搏动，并记录每组动物存活时间。移植后7d，移植心切片行H—E染色，按照国际心脏与肺移植协会制定的标准对其组织病理变化进行分级。结果：同系、异系动物间移植后，其存活率分别为（27．5±6．1）d和（7．2±1．3）d。环胞霉素的施加，可将异系移植的存活时间提高至30d以上。异系移植可致明显急性排斥反应，其病理分级以4级为主，远较同系移植和环胞霉素处理为高。结论：环胞霉素可有效缓解因异系心移植所致的急性排斥反应，延长动物存活时间。在确保良好供心的基础上，防止出血和血栓形成是模型成功制备的关键。

建立小鼠异位心脏移植模型

目的:建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。方法:选用建康C57近交系小鼠和BALB/c近交系小鼠,参考大鼠心脏移植Ono式模型,并加以改良。同系移植组(n=20)供、受体均采用BALB/c小鼠;同种异品系移植组(n=20)供体为C57近交系小鼠,受体为BALB/c近交系小鼠。结果:成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植模型,供心热缺血时间为(0.9±0.05)min,冷缺血时间为(34.8±0.7)min,手术成功率为90%。同系移植组小鼠心脏移植物获得长期存活(>100d);同种异品系移植组小鼠心脏移植物存活期为(7.5±0.1)d。结论:提高供心的摘取技术及受体的血管吻合技术是手术成功的关键。

大鼠原位肝移植手术技巧探讨

目的:探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科技巧。方法:在Kamada二袖套法基础上,着重对供肝分离、灌注、肝上下腔静脉切取,肝上下腔静脉吻合,袖套和胆道处理等手术方法作了进一步改进。结果:共建立40例大鼠原位肝移植模型,手术成功率80%,7 d存活率达70%。结论:在娴熟细致的外科操作基础上进一步缩短无肝期,可顺利完成大鼠肝移植模型的建立。

人参二醇组皂甙对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨人参二醇组皂甙 (PDS)对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 鼠心异位移植模型。移植心在 4℃缺血 40 min。 86只Wistar老年大鼠分为 3组 :对照组 (n=2 0 ) ,心脏用 4℃ St.Thomas冷晶心肌停搏液进行心肌保护 ;实验组 (n=2 0 )同对照组 ,但停搏液含 PDS40mg/ L,于移植心复跳 30 min、 2 4 h测心肌细胞内钙含量及血清中 CK、CK- MB活力 ;空白组 (n=6) ,阻断腹主动脉及下腔静脉 40 min,上述同时间测定 CK、CK- MB活力。结果 PDS能降低心肌细胞内钙含量 (P<0 .0 1 ) ,降低血清中 CK、CK- MB活力 (P<0 .0 1 )。结论 PDS作为 St.

乌司他丁和氮脱硫酸肝素对大鼠肺移植缺血再灌注损伤保护的比较

目的:建立大鼠的原位异体左单肺移植模型。比较乌司他丁(ulinastatin,UTI)和非抗凝肝素氮脱硫酸肝素(non-anticoagulant N-desulfated heparin,NNH)在该模型中对移植肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:纯种雄性SD大鼠24只,随机分成分为三组, 再灌注时给予生理盐水对照组(n=8):1．2 ml／kg;UTI治疗组(n=8):10,000 U／kg;NNH治疗组(n=8):12 mg／kg,在显微技术和机械通气下完成左单肺移植。再灌注2 h后测量移植肺肺静脉血气,肺干湿重比W／D,髓过氧化物酶(MPO)浓度,TNF-α和IL-8浓度, 细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达,肺组织病理切片。结果:24只移植鼠至实验结束存活21只,存活率为87．5％,套管成功率为100％。3只失败大鼠中2只为移植再灌注后分别于75与90 min左右死亡,1只大鼠仍存活,但开胸取肺时见肺动脉和静脉内血栓形成,移植肺无灌注。供肺肺静脉血气PaO2 UTI组(289．68±5．65 mmHg)及NNH组(315．26±14．91 mmHg)与对照组(236．80 ±13．90 mmHg)均有显著差异(P<0．0001),NNH组和UTI组PaO2也有显著差异(P<0．0001);UTI组干湿重比W／D(4．74± 0．28)、NNH组(4．87±0．34)和对照组(5．00±0．12)无显著差异(P=0．18);UTI组MPO活性(0．52±0．25)低于对照组(0．84±0．22,P <0．05),NNH组MPO活性(0．64±0．24)和对照组(P=0．12)、UTI组(P=0．29)均无显著差异;肺组织中TNF-α浓度UTI组(138．61 ±15．30)显著高于对照组(77．54±10．14,P<0．0001),NNH组(52．85±6．55)显著低于对照组(P<0．0001);肺组织IL-8浓度UTI组 (173．45±27．63)显著高于对照组(76．22±12．42,P<0．0001)和NNH组(61．34±9．86,P<0．0001),NNH组和对照组无显著差异(P =0．12)。ICAM-1 mRNA表达UTI组(0．37±0．14)、NNH组(0．38±0．11)显著低于对照组(1．74±0．39,P<0．0001),UTI组和NNH 组无显著差异(P=0．94);光镜下病理示UTI和NNH组肺组织损伤轻于对照组。结论:非内皮化袖套大鼠左单肺移植动物模型用于观察时间较短的再灌注损伤的研究是合乎要求的。UTI和NNH对大鼠肺移植后缺血再灌注损伤具有相似的保护作用,UTI具有较强的清除氧自由基作用,NNH减少了致炎细胞因子的表达,改善移植肺的功能,对减轻肺缺血再灌注损伤较UTI有更明显的保护作用。

改进套管法建立大鼠颈部心脏移植模型

目的改进套管连接血管技术制作大鼠颈部异位心脏移植模型，建立更合理、符合实验需要的心脏移植模型。方法心脏移植供体为雄性Wistar大鼠80只，清洁级，体重250-300g；受体为雄性F344大鼠80只，清洁级，体重300-350g。用自制套管将供心肺动脉套接于受体右颈外静脉，将供心升主动脉套接于受体右颈总动脉。结果正式实验80次，移植成功77次，成功率96％。总手术时间50-70min，吻合时间2-4min，供心冷缺血时间10-15min。结论改进套管法建立大鼠颈部同种异体心脏移植模型无需显微外科操作，是一种经济实用、操作简单、稳定可靠、易于复制的动物模型，便于推广。

大鼠颈部异位肾移植术

目的建立一种简单、稳定、成功率高的大鼠颈部异位肾移植模型。方法取健康成年雄性近交系清洁级Wistar大鼠208只,体重220～260g,随机配对。整块获取带肾动脉、肾静脉和带膀胱瓣输尿管的供肾,血管重建采用供体肾动脉与受体的左颈总动脉套叠式吻合、供体肾静脉与受体右颈外静脉套管吻合。供肾输尿管远端行膀胱瓣皮肤造口。结果共进行大鼠异位肾移植术104次,其中预实验阶段62次,成功50次(80.6%),失败12次,主要原因为麻醉意外、动脉吻合口血栓和大出血、静脉空气栓塞、静脉闭塞等;正式实验42次,成功40次(95.2%),失败2次,分别为迟发性动脉吻合口出血和吻合口血栓引起。手术时间(40±6)min,其中供体手术时间(20±5)min,供肾修整时间(8±2)min;受体手术时间(18±3)min,其中动脉吻合时间(5±2)min,静脉吻合时间(2±1)min。移植肾冷缺血时间(15±3)min。移植术后1周移植肾血供良好,移植肾均长期存活(超过6个月)。6个月时受体大鼠一般状况良好,生长发育正常。结论大鼠颈部异位肾移植操作简便,冷缺血时间短,成功率高。

改良“二袖套管法”大鼠原位肝移植模型的建立

目的：建立稳定的大鼠原位肝移植模型，为进一步研究核苷酸圈套技术抗大鼠肝移植急性排斥建立良好的技术平台。方法：实验以SD大鼠为模型动物，采用改良“二袖套管法”进行原位肝移植实验，统计受体大鼠术后生存时间，并常规病理检测术后移植肝病理变化。结果：共进行大鼠原位肝移植实验82次。实验后期能稳定建立起原位肝移植模型，供体手术时间25～35min；供肝冷缺血时间40～55min；受体无肝期时间13～24min；受体手术时间45～65min；2周生存率为93％。移植肝组织在术后1周可见大量的单核淋巴细胞浸润，在门静脉周围的汇管区尤为明显；肝脏实质有点状坏死。术后2周细胞浸润增加，肝实质可见桥状坏死。术后1月移植肝组织内细胞浸润和坏死减少，且可见肝细胞和胆管增殖。结论：采用改良“二袖套管法”建立大鼠原位肝移植模型手术成功率高，稳定性好，是研究肝移植术后机体生化生理改变、免疫状态变化等的良好技术平台。

双套管法大鼠异位心脏移植模型的建立

目的:应用Cuff管技术建立大鼠异位心脏移植模型。方法:40只Wister大鼠随机分为供受体各20只。先 准备受体,将受体右髂总动、静脉外套自制Cuff管后备用;供体经肝下下腔静脉穿刺应用肝素冰盐水灌洗供心,灌洗 液自腹主动脉切口流出,至流出液澄清止,“U”剪开胸廓切取供心;将供心无名动脉、左肺动脉分别与外套有Cuff管 的受体右髂总动、静脉吻合建立心脏血流通路。结果:20例正式手术成功率90%,移植后心脏长期存活(>60d)。结 论:该方法简便、迅速、可靠,易于掌握。

大鼠肝肾联合移植模型术式的改进

目的探讨大鼠肝肾联合移植动物模型的术式改进方法。方法以0-4℃乳酸钠林格注射液经腹主动脉对供肝和供肾进行原位灌洗。整块切取供鼠肝、肠、胰、脾及与右肾,保存液中修整。移植时血管重建全部采用袖套式吻合,应用支架行胆总管吻合法重建胆道连续性,输尿管带膀胱瓣吻合,建立SD-SD大鼠原位肝肾联合移植模型。结果共行大鼠肝肾联合移植90次,其中预实验50次。正式实验成功率达90%。模型建立降低了难度,具有血管吻合时间短、血流通畅、无肝期短等优点。结论此模型是较为简易、可靠的大鼠肝肾联合移植模型。