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Mutants of Escherichia coli heat-labile enterotoxin and cholera toxin as mucosal adjuvants
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作者 冯强 《Journal of Chongqing University》 CAS 2003年第2期71-77,共7页
Mucosal vaccination has been getting more and more recognition because of its compliance and low risk of spreading infectious disease by contaminated syringes used in subcutaneous immunization. However, most vaccines ... Mucosal vaccination has been getting more and more recognition because of its compliance and low risk of spreading infectious disease by contaminated syringes used in subcutaneous immunization. However, most vaccines are unable to induce immune responses when given mucosally, and require the use of strong adjuvant for effective delivery systems. Heat-labile enterotoxin (LT) and Cholera toxin(CT) are powerful mucosal adjuvants when co-administered with soluble antigens. But high toxicity hampers their use in humans. Thanks to the fine knowledge of the structure-function relationship of LT and CT, many nontoxic or low toxic mutants have been generated, part of them retain high adjuvanticity of mucosal immunization. Among these mutants, LTS63K, LTA72R, LTR192G and CTE29H, CTE112K have been widely investigated. LTS63K and CTE112K are fully non toxic, whereas LTA72R and CTE29H are low toxic, and LTR192G is nontoxic in vitro(it remains the same toxicity as wild type LT in vivo). These mutants are extremely active as mucosal adjuvants when co-administrated with a variety of antigens in different animal models. They will be investigated more widely and deeply in the future. Some of them will be tested soon in human bodies. 展开更多
关键词 大肠杆菌 肠毒素 霍乱毒素 粘膜疫苗
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猪圆环病毒2型Cap蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究 被引量:4
2
作者 侯强红 余兴龙 +5 位作者 李微 李润成 罗维 刘浩 尹恒 刘忠华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期847-851,共5页
为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒... 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(ltB) 融合表达 免疫原性
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表达大肠杆菌LT-B抗原的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建 被引量:2
3
作者 杨晓 陈添弥 +1 位作者 张蓓宁 黄翠芬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期227-231,共5页
采用无毒的鼠伤寒沙门氏菌SR-11 △Cya,ACrp,Aasd菌株作为宿主菌,选择相应的asd^+表达载体构建了含大肠杆菌肠毒素B亚基基因(toxB)的重组质粒,并通过两次转化引入宿主菌,构成了平衡致死的重组体。特异性的测定表明,这种无抗药性的杂合... 采用无毒的鼠伤寒沙门氏菌SR-11 △Cya,ACrp,Aasd菌株作为宿主菌,选择相应的asd^+表达载体构建了含大肠杆菌肠毒素B亚基基因(toxB)的重组质粒,并通过两次转化引入宿主菌,构成了平衡致死的重组体。特异性的测定表明,这种无抗药性的杂合菌株能较高水平地表达LT-B抗原,可望成为预防ETEC腹泻和相应的沙门氏菌病双价口服活疫苗的研究基础。 展开更多
关键词 重组 大肠杆菌 抗原 鼠伤寒菌
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人产肠毒素大肠杆菌ST、LT-B肠毒素基因融合的研究 被引量:3
4
作者 汪江 陈添弥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期173-178,共6页
将人产肠毒素大肠杆菌(ETEC),编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码不耐热肠毒素B亚基(LT-B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联,ELISA检测融合基因表达蛋白产物观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基... 将人产肠毒素大肠杆菌(ETEC),编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码不耐热肠毒素B亚基(LT-B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联,ELISA检测融合基因表达蛋白产物观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因串联个数增加而逐渐升高,而LT的ELISA滴度则减弱。说明了ST可以通过基因串联提高表达产物抗原活性,这为产肠毒素大肠杆菌多价疫苗的研制提供了重要的研究基础。 展开更多
关键词 产肠毒素 大肠杆菌 ST lt-B 基因融合 病原菌
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用聚合酶链反应检测LT-大肠埃希菌 被引量:1
5
作者 崔英霞 杨毓华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期177-178,共2页
本文报告了用聚合酶链反应快速检测LT—E Coli 的实验方法及应用。使用了二个寡核苷酸引物,直接将大便标本接种于LB 肉汤中,对LTA 亚基一段高度保守区域的DNA 进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,检测了30株细菌,只有LT—E Coli,LT/ST—E Co... 本文报告了用聚合酶链反应快速检测LT—E Coli 的实验方法及应用。使用了二个寡核苷酸引物,直接将大便标本接种于LB 肉汤中,对LTA 亚基一段高度保守区域的DNA 进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,检测了30株细菌,只有LT—E Coli,LT/ST—E Coli 为阳性,其余细菌检测均为阴性,最低检测细菌量为50CFU,整个检测过程在7h 内完成.用此方法,检测了40株从腹泻患者标本中分离的大肠埃希菌,并用LT 探针技术进行比较,完全符合率为90%,用此方法检测LT—E Coli,快速、特异、敏感。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 大肠杆菌
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人毒素原性大肠杆菌肠毒素ST、LT-B基因的融合
6
作者 汪江 陈添弥 《生物技术通讯》 CAS 1994年第1期8-12,共5页
将毒素原性大肠杆菌(ETEC)编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码热敏肠毒素B亚基(LT—B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联。ELISA检测融合基因表达蛋白产物,观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因... 将毒素原性大肠杆菌(ETEC)编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码热敏肠毒素B亚基(LT—B)的基因进行融合,并在此基础上进行不同数目ST基因的串联。ELISA检测融合基因表达蛋白产物,观察到ST与LT-B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因串联个数增加而逐渐升高,而LT的ELISA滴度则减弱。本研究说明ST可以通过基因串联提高表达产物抗原活性。这为毒素原性大肠杆菌多价疫苗的研制提供了重要的研究基础。 展开更多
关键词 毒素原性大肠杆菌 ST lt-B 基因融合 重组疫苗
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利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒素LT_B0ST_I融合基因 被引量:1
7
作者 王莹 周智爱 +1 位作者 李震 曹祥荣 《上海农业学报》 CSCD 2001年第1期39-44,共6页
利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI 基因片段连接起来 ,构建了LTB STI 融合基因。并将其克隆到 pUCm T载体上 ,转化到大肠杆菌DH5α中 ,得到克隆T LS ,序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框 ,具有起始密码子AT... 利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI 基因片段连接起来 ,构建了LTB STI 融合基因。并将其克隆到 pUCm T载体上 ,转化到大肠杆菌DH5α中 ,得到克隆T LS ,序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框 ,具有起始密码子ATG和终止密码子TAA 。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 耐热性肠毒素 重组PCR ltB-STI融合基因
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实时荧光定量PCR检测感染小鼠肠道内容物的LT肠毒素基因
8
作者 王芳 赵献军 +3 位作者 雷萌桐 白东宁 王大会 齐雪峰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期6-10,共5页
构建LT-PMD19质粒标准品,进行SYBR Green荧光定量PCR检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因,以确定该方法的特异性和灵敏度,绘制标准曲线;通过腹腔注射0.2mL ETEC菌液建立小鼠腹泻模型,分别于感染后4h、15h、2d、7d和14d各处死2只,通过建立... 构建LT-PMD19质粒标准品,进行SYBR Green荧光定量PCR检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因,以确定该方法的特异性和灵敏度,绘制标准曲线;通过腹腔注射0.2mL ETEC菌液建立小鼠腹泻模型,分别于感染后4h、15h、2d、7d和14d各处死2只,通过建立的荧光定量PCR方法对小肠液中的ETEC的LT基因进行定量检测。研究结果显示,用建立的荧光定量PCR检测LT基因无非特异性扩增,标准曲线呈良好的线性关系(R2=0.999),标准品的熔解曲线均呈单峰,灵敏度为8.18×103拷贝数/μL;小鼠感染4h后LT毒素含量最高,剖检可见小肠肿大,充满黄绿色的内容物,感染后7d、14d均未检测出LT毒素,肠道未见明显病变,表明LT肠毒素在肠道内的生成规律与肠道病变损伤呈正相关。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 lt基因 SYBR Green I 实时荧光定量PCR
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产毒素大肠杆菌LTB-K99融合基因的构建
9
作者 许程剑 陈创夫 +3 位作者 武军元 王琦 张金波 刘辉 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第1期98-101,共4页
利用PCR技术从原始菌种中扩增得到K99和LTB基因,将K99和LTB基因连接起来,构建了LTB-K99融合基因。融合基因克隆到pBS-T载体上,转化大肠杆菌top10,经Bam HI和Xho I双酶切鉴定重组质粒。测序分析结果表明,该融合基因有正确的阅读框,为以... 利用PCR技术从原始菌种中扩增得到K99和LTB基因,将K99和LTB基因连接起来,构建了LTB-K99融合基因。融合基因克隆到pBS-T载体上,转化大肠杆菌top10,经Bam HI和Xho I双酶切鉴定重组质粒。测序分析结果表明,该融合基因有正确的阅读框,为以后转入表达载体的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 ltB基因 K99基因 融合基因
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用多聚酶链反应检测LT-大肠杆菌
10
作者 崔英霞 杨毓华 《医学研究生学报》 CAS 1992年第4期349-351,402,共4页
本文报告用多聚酶链反应检测产生不耐热肠毒素大肠杆菌,使用二个寡核苷酸引物,直接从麦康凯平板的菌落中对该毒素的 A 亚基一段高度保守区域的 DNA 进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,30株细菌只有产生不耐热肠毒素大肠杆菌检测结果为阳性... 本文报告用多聚酶链反应检测产生不耐热肠毒素大肠杆菌,使用二个寡核苷酸引物,直接从麦康凯平板的菌落中对该毒素的 A 亚基一段高度保守区域的 DNA 进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,30株细菌只有产生不耐热肠毒素大肠杆菌检测结果为阳性,其它细菌均为阴性.此法简便、特异、敏感. 展开更多
关键词 产生不耐热肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 多聚酶链反应 A 亚基
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大肠杆菌不耐热肠毒素对狂犬病病毒减毒疫苗株粘膜免疫效应的增强作用 被引量:4
11
作者 张茂林 刘红丽 +5 位作者 余兴龙 涂长春 扈荣良 邹啸环 郭学军 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期39-42,共4页
将狂犬病病毒 SRV9减毒疫苗与大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)混合 ,分别经口腔滴入、灌胃、灌肠等途径免疫小鼠。通过检测外周血淋巴细胞特异性转化率、CTL反应、Ig G、Ig A、SIg A等免疫指标 ,并结合攻毒保护 ,探讨了狂犬病病毒经消化道... 将狂犬病病毒 SRV9减毒疫苗与大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)混合 ,分别经口腔滴入、灌胃、灌肠等途径免疫小鼠。通过检测外周血淋巴细胞特异性转化率、CTL反应、Ig G、Ig A、SIg A等免疫指标 ,并结合攻毒保护 ,探讨了狂犬病病毒经消化道不同途径接种产生的免疫效果以及 L T在粘膜免疫中的作用。结果表明 :肠道接种组的狂犬病病毒特异性免疫应答水平高于口腔和胃接种组的免疫应答水平 ,L 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 狂犬病病毒减毒疫苗 粘膜免疫 特异性转化率
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幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定 被引量:4
12
作者 周维英 吴超 +2 位作者 石云 张卫军 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-125,130,共6页
目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编... 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合。结论HpHpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 黏附素 尿素酶B亚单位 大肠杆菌不耐热毒素B亚单位
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鱼用口服疫苗免疫佐剂研究进展 被引量:2
13
作者 黄钧 施金谷 +5 位作者 陈明 黄艳华 温华成 彭民毅 王瑞 梁万文 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期869-872,共4页
免疫佐剂是一种先于或与抗原同时使用,能够增强机体的非特异性免疫能力及相应抗原的免疫原性,但其本身不具备抗原特性的物质。文章对鱼用口服疫苗免疫佐剂的作用机理以及霍乱毒素(CT)、大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、细胞因子等几种主要鱼... 免疫佐剂是一种先于或与抗原同时使用,能够增强机体的非特异性免疫能力及相应抗原的免疫原性,但其本身不具备抗原特性的物质。文章对鱼用口服疫苗免疫佐剂的作用机理以及霍乱毒素(CT)、大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、细胞因子等几种主要鱼用口服疫苗免疫佐剂的应用情况进行综述,发现鱼用口服疫苗免疫佐剂的研究应用过程中仍存在作用机理研究相对滞后、忽略肠道黏膜免疫机理特殊性、使用成本过高、安全性等问题,建议今后加强对鱼类肠道黏膜免疫机理以及口服疫苗免疫佐剂作用机理的研究,优化口服疫苗免疫佐剂的免疫剂量和程序,降低生产成本,研发出更为广泛、廉价的口服疫苗免疫佐剂,提高其安全性等,以促进水产养殖业的健康发展。 展开更多
关键词 鱼用口服疫苗 免疫佐剂 霍乱毒素 大肠杆菌不耐热肠毒素 细胞因子 应用现状
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ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立 被引量:6
14
作者 张雪寒 何孔旺 +1 位作者 张书霞 华荣虹 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期67-70,共4页
肠毒素性大肠杆菌的致病性与其具有粘附性的菌毛和产肠毒素的能力密切相关。由于菌毛的血清型多而复杂 ,肠毒素只有不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)两种 ,因此成为研究的对象。用三对扩增产物分别为 1 1 0bp、2 37bp、368bp的引物... 肠毒素性大肠杆菌的致病性与其具有粘附性的菌毛和产肠毒素的能力密切相关。由于菌毛的血清型多而复杂 ,肠毒素只有不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)两种 ,因此成为研究的对象。用三对扩增产物分别为 1 1 0bp、2 37bp、368bp的引物建立了检测LT和STⅠ、STⅡ毒素基因的多重PCR方法。扩增产物分别用HindⅢ、HincⅡ、Sau3AⅠ限制性内切酶酶切 ,均得与预期一致的 2个片段。对各个参考株的检测结果为 1 0 0 %符合。结果表明该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 ETEC肠毒素基因 多重PCR检测 耐热肠毒素 致病性 大肠杆菌 腹泻
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大肠杆菌热敏肠毒素的检测及纯化 被引量:3
15
作者 孔春梅 郑丽兰 +3 位作者 穆祥 许剑琴 刘小宝 索占伟 《科学技术与工程》 2006年第14期2019-2023,共5页
采用平板免疫溶血试验、兔回肠结扎试验,探讨了大肠杆菌耐热肠毒素制备的方法和检测方法。试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;试验将细菌接种到产毒素... 采用平板免疫溶血试验、兔回肠结扎试验,探讨了大肠杆菌耐热肠毒素制备的方法和检测方法。试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;试验将细菌接种到产毒素培养基上培养,进行增菌,然后离心取上清液,沉淀溶于PBS液中用多黏菌素B浸出,均用80%饱和度的(NH4)2SO4盐析,之后用SephadexG-100凝胶层析分离纯化,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测热敏肠毒素的纯度。 展开更多
关键词 大肠杆菌 热敏肠毒素 检测 纯化
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一株牛源产不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定 被引量:2
16
作者 翁庆北 王嘉福 吴拥军 《西南农业学报》 CSCD 2005年第2期190-192,共3页
从遵义犊牛腹泻粪便中分离到一株大肠杆菌ZB9,通过微生物生理生化、Southern分析、PCR检测、免疫学及生物学毒性检测,鉴定为产LT的大肠杆菌,分析表明,该株菌与猪源、人源等产LT的大肠杆菌具有一定相似性。
关键词 大肠杆菌 牛源 热敏肠毒素 鉴定
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幽门螺杆菌尿素酶表位疫苗的构建、表达及鉴定 被引量:2
17
作者 周维英 吴超 +1 位作者 石云 邹全明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期157-161,共5页
目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(Uepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白表位疫苗,并对其生物学及免疫学特性进行鉴定。方法设计引物,采用PCR法分别扩增UreB表位多肽编码基... 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(Uepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白表位疫苗,并对其生物学及免疫学特性进行鉴定。方法设计引物,采用PCR法分别扩增UreB表位多肽编码基因Uepi和LTB编码基因,重叠延伸PCR法将两段基因拼接,T-A克隆后,构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。结果PCR扩增出206bp和336bp的目的片段,重叠延伸PCR扩增出524bp的融合目的基因片段。原核表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB经酶切及测序鉴定,与设计序列一致。重组工程菌pET-22b(+)-Uepi-LTB/BL21经IPTG诱导,目的蛋白表达率约25%,SDS-PAGE分析相对分子质量约20000,目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达96%,Westernblot鉴定该融合蛋白与兔抗LTB多抗血清可发生特异性结合。结论HpUreB表位串联体与LTB融合蛋白的表位疫苗经基因克隆,可获得高效表达,并显示出较好的免疫活性,为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 表位疫苗
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猪大肠埃希菌肠毒素基因的多重PCR检测 被引量:1
18
作者 陈芳 王丙云 +3 位作者 杨林 黄良宗 刘为民 马春全 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期122-124,共3页
以产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素(STa、STb)基因和不耐热肠毒素(LT)基因保守序列为靶序列,设计合成了3对可扩增目的片段为182、108和336 bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因和不耐热肠毒... 以产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素(STa、STb)基因和不耐热肠毒素(LT)基因保守序列为靶序列,设计合成了3对可扩增目的片段为182、108和336 bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因和不耐热肠毒素基因的多重PCR方法.该方法对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌Streptcoccus、鼠伤寒沙门氏杆菌Salmonella typhimrium和猪肺疫巴氏杆菌Pasteurella pneumotropic的检测结果均为阴性,并且能检测到102cfu/mL稀释度的标准菌.对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果为:含STa基因的菌株为5株;含STb基因为2株;含LT基因为3株,其中2株同时具有STb和LT基因.结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查. 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC) 耐热肠毒素(STa STb)基因 不耐热肠毒素(lt)基因 多重PCR
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大肠杆菌热敏感肠毒素的检测与制备 被引量:2
19
作者 张永红 崔德凤 +4 位作者 阮文科 李焕荣 马允英 路苹 于同泉 《北京农学院学报》 2004年第3期22-26,共5页
为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性... 为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;采用SephadexG 100纯化热敏感肠毒素LT并采用SDS PAGE电泳检测蛋白纯度,表明该方法可以除去杂蛋白,肠毒素蛋白分子量为12 展开更多
关键词 大肠杆菌热敏感肠毒素 纯化 蛋白 外毒素
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大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学 被引量:2
20
作者 翁庆北 王嘉福 《贵州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2001年第4期92-96,共5页
产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 。
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 基因质粒 分子生物学 免疫性 作用机理 基因克隆 腹泻
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