热休克转录因子2在高糖诱导的足细胞焦亡与损伤中的作用

目的探讨热休克转录因子2(HSF2)在糖尿病肾脏疾病(DKD)足细胞焦亡与损伤发生中的作用机制。方法将12只C57BL/6J雄性小鼠随机均分为对照组和DKD组,采用免疫组化(IHC)染色检测DKD组小鼠肾脏组织中HSF2的表达。体外培养永生化人足细胞,构建高糖诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高渗组(HO组)、高糖+过表达对照组(HG+OE-NC组)、高糖+HSF2过表达组(HG+OE-HSF2组)、低糖+敲低对照组(LG+si-NC组)、低糖+HSF2敲低组(LG+si-HSF2组)、空白对照组(con组)、敲低对照组(si-NC组)、HSF2敲低组(si-HSF2组)、HSF2敲低+ROS抑制剂组(si-HSF2+MT组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光检测足细胞损伤相关蛋白zo-1、synaptopodin的表达水平;Western blot评估足细胞中HSF2蛋白、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和焦亡相关蛋白cleaved-Caspase-1、IL-1β蛋白的表达水平;线粒体超氧化物红色荧光探针试剂盒检测足细胞线粒体超氧化物(mtROS)水平。结果与对照组相比,DKD组小鼠肾组织中HSF2表达显著降低(P<0.05)。HG组足细胞NLRP3、Cleaved-Caspase-1、IL-1β相对表达水平均高于LG组、HO组和HG+OE-HSF2组,HSF2表达水平均低于LG组和HO组,synaptopodin、zo-1蛋白和mRNA相对表达水平均低于LG组和HG+OE-HSF2组(P<0.05)。与LG+si-NC组相比,LG+si-HSF2组足细胞synaptopodin、zo-1蛋白和mRNA相对表达水平均显著降低,NLRP3、IL-1β、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均显著升高(P<0.05)。与LG组相比,HG组及LG+si-HSF2组足细胞mtROS均明显增加;与HG组相比,HG+OE-HSF2组足细胞mtROS明显减少;与con组相比,si-HSF2组和si-HSF2+MT组足细胞mtROS均明显增加(P<0.05)。结论HSF2通过调控ROS/NLRP3信号通路介导高糖诱导的足细胞焦亡与损伤。

pCMV-HSF2-FLAG重组质粒的构建及其在Caco-2细胞中的表达

目的:构建人HSF2 pCMV-Myc真核表达载体,研究其在人结肠上皮肿瘤细胞Caco-2内的表达和定位.方法:以HSF2 Human cDNA ORF clone为模板,PCR法扩增出全长HSF2编码系列,用EcoRⅠ和KpnⅠ对HSF2 PCR纯化产物双酶切后,采用基因重组技术将其插入至pCMV-Myc载体中.DNA测序正确后,脂质体法将重组质粒转染到Caco-2细胞内,提取细胞总RNA逆转录为cDNA后进行普通PCR检测HSF2 mRNA转录水平,提取细胞蛋白进行Western blot检测HSF2蛋白质水平及融合蛋白表达.采用激光共聚焦显微镜观察HSF2及融合蛋白在Caco-2内的表达和定位.结果:将人全长HSF2编码序列克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,酶切鉴定片段为1557bp,重组质粒测序正确.转染重组质粒后,PCR显示HSF2在mRNA水平较未转染组和空载组升高;Western blot检测到融合蛋白正确表达,分子量约为70kDa.与未转染组和空载组相比,重组质粒组HSF2蛋白质水平明显升高.激光共聚焦显微镜下观察到HSF2和融合蛋白定位一致,主要分布于Caco-2细胞质中,少量聚集在细胞核膜.结论:成功构建了人全长HSF2编码序列的pCMV-HSF2-FLAG真核表达载体,并在Caco-2细胞中成功表达,为进一步研究HS F2在溃疡性结肠炎中的作用奠定了良好的基础.

干扰和过表达热休克转录因子2对肠上皮细胞凋亡和迁移的影响

目的:通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰肠上皮细胞热休克转录因子2(heat shock transcription factor 2,HSF2)表达,研究不同HSF2水平对肠上皮细胞凋亡和迁移的影响.方法:(1)选取HT-29(人结肠癌细胞株)作为研究材料,丁酸钠(设置不同时间点/浓度)诱导细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡、周期.按实验结果选取最佳丁酸钠浓度及时间位点;(2)慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰结肠上皮细胞HSF2表达;用倒置荧光显微镜、Western blot法检测目的基因在细胞中的转染效率;(3)细胞迁移实验(划痕法/Transwell小室)检测过表达和干扰HSF2后细胞迁移能力的改变;(4)经过表达和干扰HSF2后的细胞,给予丁酸钠诱导凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期.结果:(1)MTT实验结果显示:阴性对照组(NC组)的HT-29细胞增殖活性在实验观察期间(0-96 h)不断升高,48 h后,实验组的细胞对4个丁酸钠浓度组均表现出明显的生长抑制,相对于NC组之间差异具有统计学意义(P<0.01),故丁酸钠对HT-29细胞的生长抑制作用呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示:NC组有少量凋亡,总凋亡率为0.548%±0.113%,而实验组经4个不同浓度丁酸钠处理48 h后,总凋亡率分别为51.588%±5.110%、77.732%±2.746%、90.115%±1.438%、94.247%±1.243%,与NC组之间差异具有统计学意义(P<0.01).而当丁酸钠浓度>2.5 mmol/L,凋亡率较1.25 mmol/L明显上升.细胞周期检测结果显示:与NC相比,1.25 mmol/L丁酸钠处理HT-29细胞48 h,G0/G1期HT-29细胞未显示出明显差异(P=1.00>0.05),即无明显细胞周期阻滞;而2.5、5.0、10 mmol/L以上浓度在各观察点均出现明显的细胞周期阻滞现象,呈明显的G1/G0期阻滞(P<0.01);(2)慢病毒载体转染效果检测:通过倒置荧光显微镜(×100)观察可发现,各组HT-29细胞经慢病毒载体转染后均有GFP表达,转染率达80%以上.用Western blot法检测结果显示:慢病毒构建载体能够在细胞中高效、稳定地过表达和干扰目的基因;(3)MTT法检测转染过表达和si RNA的HSF2细胞在丁酸钠诱导凋亡环境下活性变化,结果显示:过表达组细胞活性高于过表达对照组(P<0.05),干扰组的细胞活性低于干扰对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)细胞迁移实验发现:过表达组的细胞迁移能力较NC组明显增加,而干扰组则明显降低(P<0.05);(5)过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞周期的影响:NC组以及使用慢病毒载体处理的5组之间,各时间点细胞周期分布差异均无统计学意义(P>0.05);(6)过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞凋亡率的变化:过表达组总凋亡率低于过表达对照组(P<0.05);干扰组总凋亡率高于干扰对照组(P<0.05).结论:细胞发生凋亡时,HSF2可能对肠上皮细胞起保护作用,提示HSF2可能通过调控细胞周期来实现对细胞增殖的影响,但也可能还有其他途径;HSF2可能在凋亡损伤时对肠上皮细胞起修复作用.

干扰HSF2对THP-1细胞NLRP3炎症复合体的影响

目的:通过慢病毒-热休克转录因子2-RNA干扰(lentivirus-heat shock transcription factor2-RNA interference,LV-HSF2-RNAi)人巨噬细胞系(THP-1),探讨HSF2对THP-1细胞NOD样受体3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症复合体及其下游白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的影响.方法:选用THP-1作为研究对象,使用慢病毒(LV-HSF2-RN Ai)转染THP-1,干扰其HSF2表达,使用佛波醋(phorbol 12-myristate13-acetate,PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞;将细胞分为对照组与转染组,使用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞凝胶电泳PCR检测细胞NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing a CADR domain,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(cysteine-requiring aspartate protease-1,Caspasel)、IL-1βmRNA表达:蛋白质免疫印迹实验(Western blot)检测细胞NLRP3、ASC、Caspasel、IL-1β蛋白表达:酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基内IL-1β水平.结果:Western blot检测HSF2干扰组中HSF2蛋白表达明显低于未转染组和阴性对照组(P<0.05);PMA诱导THP-1细胞分化,LPS刺激后,干扰组NLRP3、ASC、Caspasel、IL-1βmRNA及蛋白表达水平明显高于对照组及干扰对照组(P<0.05);HSF2干扰组IL-1β表达水平明显高于未转染组及阴性对照组(538.800 pg/mL±52.250 pg/mL vs 257.010pg/mL±26.148 pg/mL,238.231 pg/mL±29.245 pg/mL,P<0.05).结论:干扰HSF2可以明显提高THP-1细胞NLRP3炎症复合体活化水平,提高IL-1β水平.

HSP60和NRF2在透明细胞性肾细胞癌中的表达及临床价值

目的研究透明细胞性肾细胞癌(ccRCC)中热休克蛋白60(HSP60)及核因子E2相关因子2(NRF2)的表达及临床意义。方法选取2017年3月至2019年3月在安康市中心医院诊治的89例ccRCC患者为研究对象,应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)及免疫组织化学检测癌组织及癌旁组织中HSP60、NRF2的表达。统计分析ccRCC中HSP60、NRF2的表达与临床病理特征关系。采用Spearmen秩相关分析HSP60与NRF2 mRNA表达的相关性,Kaplan-Meier生存分析(Log-Rank检验)ccRCC中HSP60、NRF2的表达与患者生存预后的关系,单因素和多因素COX比例风险模型分析影响ccRCC患者生存预后的危险因素。结果ccRCC癌组织HSP60的相对表达量(0.483±0.112)明显低于癌旁组织(1.227±0.265),差异有统计学意义(t=24.397,P<0.001),而NRF2 mRNA的相对表达量(1.725±0.285)明显高于癌旁组织(0.551±0.101),差异有统计学意义(t=36.629,P<0.001)。ccRCC癌组织中HSP60与NRF2的表达呈明显负相关(r=-0.520,P<0.001)。ccRCC癌组织中HSP60、NRF2的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(χ^(2)=11.749、24.815、45.762,17.225、21.913、7.061,均P<0.05)。HSP60低表达组3年生存率为41.5%(17/41),明显高于HSP60高表达组的3年生存率93.2%(41/44),差异有统计学意义(χ^(2)=30.79,P<0.001);HSP60低表达组平均生存时间为(23.5±6.1)个月,明显高于HSP60高表达组的平均生存时间(28.2±6.4)个月,差异有统计学意义(t=3.460,P<0.001)。NRF2低表达组3年生存率为95.2%(40/42),明显高于NRF2高表达组的3年生存率41.9%(18/43),差异有统计学意义(χ^(2)=30.79,P<0.001),HSP60低表达组平均生存时间为(29.1±6.2)个月,明显高于HSP60高表达组的平均生存时间(22.4±6.3)个月,差异有统计学意义(χ^(2)=4.941,P<0.001)。多因素Cox回归分析结果显示,ccRCC组织中HSP60低表达、NRF2高表达、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期是影响ccRCC患者不良预后的独立危险因素。结论ccRCC中HSP60表达降低,而NRF2表达升高,二者表达与肿瘤分期、淋巴结转移及远处转移有关,有望成为提示ccRCC预后的肿瘤标志物。

环氧化酶-2、血管内皮细胞生长因子、热休克蛋白27和P53在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的通过对中国人非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、热休克蛋白27(HSP27)和P53表达的检测,观察这4种蛋白质在NSCLC肿瘤组织中的表达情况,分析其与性别、年龄、病理类型、肿瘤细胞分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移的相关性,为临床判断和有效控制NSCLC提供有价值的参考。方法采用免疫组织化学法检测50例NSCLC患者肿瘤组织中COX-2、VEGF、HSP27和P53的表达,采用原位杂交法检测COX-2mRNA的表达。结果COX-2、VEGF、HSP27、P53单一指标阳性均与性别、年龄、组织学分类、肿瘤直径、N分期、肿瘤细胞分化程度无关。COX-2与淋巴结转移有关(偏相关系数为0.3237,P=0.028),而VEGF、HSP27、P53与淋巴结转移无关。COX-2和P53或COX-2和VEGF共同高表达在N2期的NSCLC中明显多于N0和N1期;COX-2、P53和VEGF共同高表达或其中两种蛋白质高表达在N2期的NSCLC中明显多于N0和N1期(P=0.002)。HSP27高表达虽然与淋巴结转移无关,但与COX-2高表达有关(偏相关系数为0.5143)。结论COX-2、P53和VEGF共同高表达或其中两种蛋白质高表达与NSCLC淋巴结转移密切相关。COX-2与NSCLC淋巴结转移有关。

HSF2和促炎症细胞因子在溃疡性结肠炎中的表达

目的:检测溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者结肠黏膜和血清中热休克转录因子2(heat shock factor 2,HSF2)和促炎症细胞因子如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-8的转录和翻译水平,评价HSF2与UC病情严重程度的关系以及其与促炎症细胞因子表达的相关性.方法:收集2013-02/2014-02昆明医科大学第一附属医院住院治疗的UC患者.选取因腹痛或腹部不适收住昆明医科大学第一附属医院,经肠镜检查未发现有异常黏膜病变,根据罗Ⅲ标准诊断为肠易激综合征的患者作为对照组.采集肠黏膜组织和血清.UC病情评估采用溃疡性结肠炎疾病活动指数(UC-disease activity index,UC-DAI)评分系统.实时荧光定量PCR法检测结肠黏膜中HSF2和TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA转录水平.ELISA测定血清中HSF2、TNF-α、IL-1β、IL-8的含量.应用SPSS17.0统计学软件对实验数据进行统计分析,探讨HSF2和TNF-α、IL-1β、IL-8在结肠黏膜组织及血清中表达的相关性.结果:共收集UC活动期患者肠黏膜组织样品20例,对照组5例.UC患者血清样品60例,对照组血清样品20例.(1)UC患者结肠黏膜组织中HSF2 mRNA(轻度:1.30±0.11 vs 1.00±0.00,P<0.05;中度:1.50±0.14 vs 1.00±0.00,P<0.01;重度:2.02±0.19 vs 1.00±0.00,P<0.01)、TNF-αmRNA(轻度:6.28±1.79 vs1.00±0.00,P<0.05;中度:10.21±1.68 vs 1.00±0.00,P<0.01;重度:19.23±4.38 vs 1.00±0.00,P<0.01)、IL-1βmRNA(轻度:48.91±13.72 vs 1.00±0.00,P<0.05;中度:99.12±17.28 vs 1.00±0.00,P<0.01;重度:212.89±29.69 vs 1.00±0.00,P<0.01)、IL-8 mRNA(轻度:27.49±4.55 vs 1.00±0.00,P<0.05;中度:54.73±12.00 vs 1.00±0.00,P<0.01;重度:124.73±26.08 vs 1.00±0.00,P<0.01)的相对表达量较对照组显著增加.且HSF2与TNF-α、IL-β、IL-8的表达具有正相关性(r=0.89,0.89,0.80,P<0.001);(2)UC患者HSF2(轻度:0.91 ng/mL±0.33 ng/mL vs 0.42 ng/mL±0.29 ng/mL,P<0.05;中度:1.26 ng/mL±0.28ng/mL vs 0.42 ng/mL±0.29 ng/mL,P<0.01;重度:2.15 ng/mL±0.42 ng/mL vs 0.42 ng/mL±0.29 ng/mL,P<0.01)、TNF-α(轻度:17.29pg/mL±1.71 pg/mL vs 13.45 pg/mL±3.63 pg/mL,P<0.05;中度:17.42 pg/mL±1.85 pg/mL vs 13.45 pg/mL±3.63 pg/mL,P<0.01;重度:21.16 pg/mL±2.15 pg/mL vs 13.45 pg/mL±3.63 pg/mL,P<0.01)、IL-1β(轻度:11.86 pg/mL±5.18 pg/mL vs 4.93 pg/mL±2.92 pg/mL,P<0.05;中度:15.05 pg/mL±2.90 pg/mL vs4.93 pg/mL±2.92 pg/mL,P<0.01;重度:22.77pg/mL±7.19 pg/mL vs 4.93 pg/mL±2.92 pg/mL,P<0.01)、IL-8(轻度:19.49 pg/mL±4.38pg/mL vs 8.25 pg/mL±2.23 pg/mL,P<0.01;中度:32.18 pg/mL±6.81 pg/mL vs 8.25 pg/mL±2.23 pg/mL,P<0.01;重度:60.19 pg/mL±9.71pg/mL vs 8.25 pg/mL±2.23 pg/mL,P<0.01)血清浓度均显著高于对照组,且HSF2血清浓度与TNF-α、IL-β、IL-8血清浓度呈正相关性(r=0.77,0.73,0.85,P<0.001).结论:HSF2与TNF-α、IL-1β、IL-8在溃疡性结肠炎结肠黏膜组织及血清中的表达均增加,且HSF2与TNF-α、IL-1β、IL-8的表达具有正相关性,提示HSF2可能作为一项新的评估UC炎症活动程度的指标.

热休克蛋白70-2和肿瘤坏死因子α基因多态性与儿童过敏性紫癜相关性研究

目的观察热休克蛋白70-2(HSP70-2)和TNF-α基因多态性与儿童过敏性紫癜(HSP)的相关性。方法纳入2008年9月至2009年5月在南京儿童医院诊断为HSP的患儿为HSP组,健康查体儿童为对照组。采用PCR-RFLP法检测两组HSP70-2基因1267A/G和TNF-α基因-380G/A多态性,并分析其与HSP和肾损害的相关性。结果 HSP组纳入205例,对照组纳入53名。①HSP组和对照组HSP70-2基因1267位点GG基因型频率分别为22.9%和9.4%,差异有统计学意义(χ2=4.764,P<0.05);非肾损害亚组和肾损害亚组AA、AG、GG基因型频率差异无统计学意义。②HSP组和对照组TNF-α基因-308位点AA基因型频率分别为8.3%和1.9%,差异有统计学意义(χ2=6.447,P<0.05);A等位基因频率HSP组高于对照组(24.4%vs12.3%,χ2=7.241,P<0.05);非肾损害亚组和肾损害亚组GG、GA、AA基因型和A等位基因频率差异均无统计学意义。结论 HSP70-2基因1267位点GG基因型、TNF-α基因-308位点AA基因型可能是HSP发病的遗传学易感因素,但与肾损害发展可能无明显相关性。

热休克转录因子2通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进克罗恩病炎症反应的作用机制研究

目的:研究热休克转录因子2(HSF2)通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应的作用机制。方法:2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)构建小鼠克罗恩病模型,将小鼠分为正常组,模型组,对照组,实验组。对照组采用高迁移率族蛋白1(HMGB1)抗体处理阻断HMGB1信号,对照组和实验组均采用重组HSF2干预。观察小鼠一般生活状况(包括:生存状态、体质量状态、大便性状、进食饮水状态、毛发光泽度、精神状态和活动状态),小鼠疾病活动指数(DAI)评估小鼠疾病情况,苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肠组织病理改变,免疫组织化学染色(IHC)检测小鼠肠组织中p-65的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠结肠组织中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB(p-P65)、髓样分化因子(MyD88)的表达水平。结果:TNBS成功诱导小鼠克罗恩病,实验组小鼠一般生活状态较差,且DAI评分显著高于对照组、模型组,具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示实验组小鼠结肠黏膜糜烂、水肿、炎症反应程度高于模型组和对照组。实验组小鼠结肠组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组组织中HMGB1、TLR4、NF-κB(p-P65)、MyD88的表达水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HSF2可以通过激活HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应。

JAK2/STAT3通路介导热休克蛋白70对脑出血的神经保护作用

目的观察蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(janus kinase 2-signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路特异性拮抗剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺〔alpha cyano-(3-hydroxy)N-styrene benzyl amine,AG-490〕对脑出血大鼠脑组织热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(phosphorylated janus kinase 2,P-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,P-STAT3)表达的影响,并分析HSP70与PJAK2、P-STAT3的相关性,探讨JAK2/STAT3信号通路是否介导HSP70对大鼠脑出血后的神经保护作用。方法将健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠100只随机分为正常组、假手术组、脑出血和AG-490组;采用大鼠自体血注入法建立脑出血模型;各组按造模成功后时间分为6h、24h、48h、72h、7d共5个亚组,对各组大鼠进行神经功能缺损评分(neurological severity scores,NSS);免疫组化染色检测血肿周围HSP70表达,采用Western blot检测大鼠血肿周围脑组织P-JAK2、P-STAT3的表达。结果脑出血组和AG-490组HSP70、P-JAK2、PSTAT表达均高于假手术组和正常组(P<0.05),并于造模后48h达高峰(P<0.05);AG-490组HSP70、PJAK2、P-STAT表达较脑出血组低(P<0.05);脑出血组HSP70表达与NSS评分呈负相关(r=-0.511,P<0.05),HSP70表达与P-JAK2、P-STAT3的表达呈正相关(r=0.790,P<0.05;r=0.447,P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路可能通过上调HSP70的表达进而对大鼠脑出血后起神经保护作用。

热休克蛋白72在兔视网膜缺血再灌注损伤中的表达及重组人碱性成纤维细胞生长因子对其表达的影响

目的研究兔视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)后重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)对其组织中热休克蛋白(HSP)72活化程度的影响。方法选取66只大耳白兔,随机分为3组:缺血再灌注模型组(RIRI组30只)、rh-bFGF治疗组(RIRI+rh-bFGF组30只)、正常假手术组(6只),RIRI组、RIRI+rh-bFGF组又平均分为5个亚组(缺血再灌注后6、12、24、48、72h),每组6只大耳白兔。造模初期,RIRI组和rh-bFGF治疗组实验动物分别往玻璃体腔内注入相同剂量的0.9%氯化钠注射液和rh-bFGF溶液,并分别于制模后5个时间点处死动物摘取眼球,组织标本行苏木精-伊红(HE)染色及原位杂交。正常假手术组实验动物给予前房穿刺,无其他操作。常规HE染色后观察各组兔视网膜组织病理学变化,免疫组织化学法检测HSP72表达情况。结果正常假手术组兔视网膜各层次清晰、细胞平行排列且形态规则,视网膜神经节细胞呈单层排列、规则,无空泡变性。RIRI组兔视网膜出现高度水肿,层次紊乱、细胞结构疏松,视网膜神经节细胞出现空泡样变性,神经节细胞数目减少。RIRI+rh-bFGF组兔视网膜结构层次和细胞组织变化与RIRI组变化大致相同,但损害程度较其明显减轻。正常假手术组兔视网膜中没有发现HSP72;与RIRI组比较,RIRI+rh-bFGF组RIRI后5个时间点视网膜组织中HSP72的表达水平增高(P均<0.05)。结论 rh-bFGF对兔视网膜损伤有保护作用。

EGFR、Her-2及Hsp90α在食管腺癌患者中的表达及病理研究

目的探讨EGFR(表皮生长因子受体)、Her-2(表皮生长因子受体2)及Hsp90α(热休克蛋白90α)的表达在食管腺癌组织中的表达。方法选取食管腺癌患者30例为研究组,同时选取同期胃镜下食管活检正常的健康人员30例为对照组,对比EGFR、Her-2及Hsp90α在两组中的表达。结果食管腺癌组织中EGFR、Her-2及Hsp90α表达阳性率显著高于正常鳞状上皮,差异均有统计学意义(P<0.05);HSP90α表达与肿瘤浸润深度、肿瘤细胞分化、淋巴结转移、TNM分期以及脉管侵犯等因素相关(P<0.05),EGFR表达与肿瘤TNM分期、细胞分化、浸润深度以及淋巴结转移等因素相关(P<0.05),Her-2表达与肿瘤细胞分化、淋巴结转移以及TNM分期等因素相关(P<0.05);食管腺癌组织中Hsp90α表达与EGFR表达存在正相关(P<0.05),Hsp90α表达与Her-2表达存在正相关(P<0.05),Her-2表达与EGFR无相关性(P>0.05)。结论食管腺癌患者当中EGFR、Her-2及Hsp90α表达阳性率显著高于健康人群,并且同TNM分期以及细胞分化的因素存在密切联系。

白术内酯Ⅰ对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜保护作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜保护机制。方法:实验动物随机分为空白对照组、模型组、白术内酯Ⅰ组(10、20、40 mg/kg),采用脱氧胆酸钠和热盐水交替灌胃、结合饥饱失常方法制备CAG大鼠模型,治疗8周后,采用ELISA法检测白细胞介素-8(IL-8)含量、Western blot法检测热休克蛋白70(HSP 70)、核转录因子-kB(NF-kB)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:与空白对照组对比,模型组HSP70蛋白表达降低(P<0.01),IL-8含量(P<0.01)增加、NF-κB和COX-2蛋白表达升高(P<0.01);与模型组对比,白术内酯Ⅰ高、中、低3个剂量组提高HSP70蛋白表达,降低IL-8含量、NF-κB和COX-2蛋白表达(P<0.05),以白术内酯Ⅰ组(40 mg/kg)作用显著。结论:白术内酯Ⅰ对CAG大鼠的保护作用是通过抗炎作用。

慢性胃炎幽门螺杆菌感染危险因素及其胃黏膜组织TFF2、HSP70、TGF-βRⅡ表达

目的 探究慢性胃炎幽门螺杆菌(Hp)感染危险因素及其胃黏膜组织三叶因子2(TFF2)、热休克蛋白70(HSP70)、转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)表达.方法 选取厦门市第五医院2021年2月-2023年2月收治的180例慢性胃炎Hp感染患者为研究组,随机选取180例慢性胃炎未合并Hp感染患者为对照组.通过Lo-gistic 回归法分析慢性胃炎Hp感染危险因素,比较两组胃黏膜组织TFF2、HSP70、TGF-βRⅡ水平;比较研究组TFF2、HSP70、TGF-βRⅡ在不同临床病理特征中的表达,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析TFF2、HSP70及TGF-βRⅡ对慢性胃炎Hp感染的诊断价值.结果 饮食方式为共餐、工作压力高、有饮酒史、胃蛋白酶原(PG)-Ⅱ水平低是慢性胃炎Hp感染的危险因素(P<0.05);研究组胃黏膜组织HSP70、TGF-βRⅡ阳性表达占比高于对照组,TFF2阳性表达占比低于对照组(P<0.05);研究组TFF2、HSP70、TGF-βRⅡ阳性表达与发病部位、胃炎/胃癌家族史、饮食习惯是否规律有关(P<0.05);TFF2、HSP70、TGF-βRⅡ联合诊断Hp感染慢性胃炎患者曲线下面积(AUC)高于各指标单一检测(P<0.05),且联合检测敏感度为84.44%,特异度为88.33%.结论 慢性胃炎Hp感染与饮食方式、工作压力、饮酒史、PG-Ⅱ水平相关,其胃黏膜组织TFF2、HSP70及TGF-βRⅡ表达异常,且三者表达与患者发病部位、胃炎/胃癌家族史、饮食习惯有关,三者联合检测可提高其诊断价值.

精浆热休克蛋白及细胞因子表达与前列腺炎分型的关系

目的:探讨精浆热休克蛋白70及细胞因子表达对慢性前列腺炎分型诊断的临床价值。方法:采用酶联免疫吸附测定法(EL ISA)对慢性细菌性前列腺炎(Ⅱ)40例,炎症型慢性非细菌性前列腺炎(ⅢA型)30例,非炎症型慢性非细菌性前列腺炎(ⅢB型)30例患者及30例正常对照组精浆中热休克蛋白70及肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-2,白细胞介素-10含量进行测定,并结合慢性前列腺炎症状评分进行相关性研究。结果:Ⅱ型患者与正常对照组比较,热休克蛋白和肿瘤坏死因子-α含量显著升高(P>0.05),白细胞介素-2及白细胞介素-10含量显著降低(P<0.01)。与ⅢA型、ⅢB型组比较,差异均有显著性(P<0.01),ⅢA型与ⅢB型组比较,差异无显著性(P>0.05)。热休克蛋白70和肿瘤坏死因子-α与前列腺压出液(EPS)中W BC计数呈正相关;与症状评分呈负相关。而白细胞介素-2及白细胞介素-10与EPS中W BC计数无相关性,与症状评分呈正相关。结论:精浆中热休克蛋白70及肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-2,白细胞介素-10在慢性前列腺炎的发病过程中起重要作用,对其分型诊断具有一定的临床价值。

热休克转录因子2在溃疡性结肠炎及其他肠病中的比较分析

目的检测热休克转录因子2（HSF2）在溃疡性结肠炎（UC）、克罗恩病、肠结核、肠淋巴瘤、感染性肠炎、白塞病及正常结肠黏膜中的表达情况。方法收集病理科2003年至2011年存档的肠组织标本：UC组38例，克罗恩病组29例，肠结核组31例，肠淋巴瘤组32例，感染性肠炎组32例，白塞病组28例，正常体检组10例。采用免疫组化检测结肠黏膜HSF2的表达情况。采用图像分析技术计数切片的阳性细胞数，取光学显微镜下的平均阳性细胞数作为计数标准。结果UC患者结肠黏膜组织中HSF2的表达（64．64±15．17）明显高于其他6组（克罗恩病组、肠结核组、肠淋巴瘤组、感染性肠炎组、白塞病组、正常体检组）（32．44±5．94、36．93±6．32、36．16±6．55、37．86±7．76、34．90±5．92、35．54±6．76，P〈0．05），而这6组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HSF2在UC患者结肠黏膜组织的表达较克罗恩病组、肠结核组、肠淋巴瘤组、感染性肠炎组、白塞病组及正常体检组明显增强，提示HSF2与UC关系密切，HSF2可能对UC的发病、诊断和鉴别诊断起重要作用。

热休克转录因子1对2型糖尿病发病促进作用

目的探讨热休克转录因子1(HSF-1)在2型糖尿病发生发展中的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为2组:对照组和2型糖尿病模型组。分别采用Western blot和RT-PCR方法检测2组大鼠HSF-1基因与蛋白表达水平,并在大鼠胰岛素细胞(INS-1)水平上检测HSF-1蛋白对于胰岛素分泌及相关信号通路活化影响。结果 2型糖尿病模型大鼠HSF-1基因与蛋白表达分别上升209.3%和163.6%,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平明显提高。用SiRNA技术部分干扰INS-1细胞中HSF-1基因表达后,INS-1细胞在高糖环境培养中胰岛素分泌功能并未受到影响,但INS-1细胞中胰岛素受体的磷酸化水平提高。结论 HSF-1可能参与了2型糖尿病的进程。

热休克转录因子2通过促进白细胞介素-10的表达对肺癌发生的影响

目的探讨热休克转录因子2(HSF2)通过促进白细胞介素-10(IL-10)的表达对肺癌发生的影响。方法选取50例肺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学法,分别检测HSF2、IL-10的mRNA、蛋白的表达;在A549细胞中,以siRNA干扰HSF2的表达,采用Western blot法检测IL-10的表达水平。结果与对应癌旁组织相比,肺癌组织中76%(38/50)病例的HSF2表达上调(P<0.01),80%(40/50)病例的IL-10表达上调(P<0.01),蛋白水平和mRNA水平一致。肺癌组织中IL-10的表达上调与HSF2的表达上调呈正相关(R2=0.921 6)。siRNA干扰HSF2可减弱A549中IL-10的表达。结论 HSF2可通过促进IL-10的表达影响肺癌的发生。

热休克蛋白27、三叶因子Ⅱ在胃癌和癌前疾病中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)、三叶因子Ⅱ(TFF2)在胃癌和癌前疾病中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测经病理证实的正常胃黏膜组织20例、胃溃疡22例、慢性萎缩性胃炎24例和胃癌54例中HSP27和TFF2的表达情况,其表达水平以HSP27和TFF2的平均光定密度测定值表示,并对相关资料进行统计学分析。结果HSP27在正常胃黏膜中的表达光密度值(0.278±0.011)较胃溃疡(0.303±0.013)和慢性萎缩性胃炎(0.305±0.010)低,慢性萎缩性胃炎与正常胃黏膜组织中HSP27表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);HSP27在胃癌中的表达水平(0.318±0.022)较前三者高,差异均有统计学意义(P均<0.05);HSP27的表达与胃癌分化程度、淋巴转移有关(P均<0.05)。TFF2在胃溃疡(0.368±0.014)和慢性萎缩性胃炎(0.371±0.019)中的表达水平较正常胃黏膜(0.346±0.032)高,差异有统计学意义(P均<0.05)。胃癌中TFF2的表达水平(0.325±0.020)低于前3者,差异有统计学意义(P均<0.05);TFF2的表达与胃癌分化程度、浸润深度有关(P均<0.05)。结论HSP27和TFF2与肿瘤的发生密切相关,检测该指标可为胃癌诊断、判断预后和指导治疗提供依据。

逆针灸“关元”穴对更年期大鼠脾脏热休克蛋白70及其mRNA表达和血清白介素-2、肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的:观察逆针灸"关元"穴对自然更年期大鼠免疫功能的影响。方法:经阴道筛查出动情周期紊乱的10月龄SD雌性大鼠160只,随机分为自然10、12、14、16月龄组,逆灸12、14、16月龄组和逆针12、14、16月龄组。另选3.5月龄健康SD雌性大鼠16只为年轻对照组。逆灸、逆针各组从大鼠10月龄开始,每周灸或针"关元"穴2次,共8周。采用免疫组化法检测脾脏热休克蛋白70(HSP70),原位杂交法检测HSP70 mRNA表达,放射免疫法测定血清白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:更年期大鼠随着月龄的增长脾脏HSP70及HSP70 mRNA的表达呈先升后降的变化,血清IL-2含量波动性降低,TNF-α含量先降后升。与自然同月龄组相比,逆灸、逆针各月龄组HSP70及HSP70 mRNA表达和IL-2含量均呈增加趋势,其中逆灸、逆针12月龄组HSP70及HSP70 mRNA,逆灸14、16月龄组HSP70,逆针14月龄组HSP70 mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),IL-2含量逆灸14月龄组明显升高(P<0.05);TNF-α含量逆灸、逆针12月龄组均明显升高(P<0.01),逆灸16月龄组明显降低(P<0.05)。同月龄逆灸、逆针组相比,逆针12月龄组HSP70 mRNA显著升高(P<0.05)。结论:逆针灸"关元"穴对调整更年期免疫功能紊乱具有一定作用,其机制可能与调节脾脏组织细胞HSP70及其基因的表达,启动了机体内在的抗病与应变能力,从而调节血清免疫因子IL-2、TNF-α的含量有关。