肝癌热休克蛋白-抗原肽复合物的构建及诱导CTL反应的初步研究

目的:研究体外构建热休克蛋白-抗原肽复合物的方法,观察其在体外的抗肿瘤作用。方法:用经43℃热处理1小时的人肝细胞悬液,经过裂解液裂解,60%～80%饱和硫酸铵沉淀,用SephadexG-100柱制备,取分子量为70KD组份,Westernblot进行性质鉴定。应用多肽解离液处理该组份,SephadexG-25柱过滤获得未结合多肽的蛋白分子,使其在体外与肝癌抗原肽SLIVHLNEV结合,构建成热休克蛋白-抗原肽复合物。应用此复合物刺激树突状细胞,激活同源外周血T淋巴细胞产生肿瘤特异性杀伤T淋巴细胞(CTL),应用MTT法检测其对T2细胞及肿瘤细胞的杀伤活性。结果:所得蛋白经电泳及Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定为热休克蛋白70。SephadexG-25柱双分离法证实应用上述方法成功构建了肝癌热休克蛋白70-抗原肽复合物,用该复合物负荷树突状细胞在体外可以诱导出较强的肝癌抗原肽特异性CTL,可以杀伤负荷有该肽的T2细胞及递呈该肽的肿瘤细胞系。结论:体外构建的热休克蛋白-抗原肽复合物可以增强抗原肽诱导CTL反应能力,热休克蛋白是良好的T细胞免疫佐剂,有可能在肿瘤疫苗治疗中发挥重要作用。

体外构建的HSP70-肝癌抗原肽诱导抗原肽特异性免疫反应

目的 :研究体外构建的HSP70 肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力 ,为该复合物的临床应用奠定基础。方法 :在体外构建HSP70 肝癌抗原肽复合物 ,联合应用粒 /巨细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白介素 4 (IL 4 )直接从志愿者外周血中培养出DC ;以HSP70、HSP70 肝癌抗原肽、抗原肽分别刺激DC ,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ,检测其杀伤T2细胞和肝癌细胞系的能力。结果 :HSP70 抗原肽、抗原肽均可诱导CD8+的抗原肽特异性CTL ,而前者的诱导效果更强。结论 :体外构建的HSP70 抗原肽复合物具有免疫原性 ,HSP70可以增强抗原肽诱导特异性免疫反应的能力 ,HSP70