副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用

从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。

羊驼副结核病间接ELISA检测方法的建立

利用副结核分支杆菌重组Hed蛋白,建立了检测羊驼副结核分支杆菌抗体的间接ELISA方法。确定了最适抗原包被浓度为3.75μg/mL,最适血清稀释度为1∶50,最佳封闭条件为2%明胶4℃封闭24 h,血清最适作用时间为1.0 h,酶标SPA最适稀释度为1∶5 000,最适作用时间为1.0 h,底物最适作用条件为37℃避光显色10 min。用建立的ELISA方法检测47份羊驼临床血清,显示该方法具有较好的应用前景。