汉黄芩素通过调节Hedgehog-YAP信号通路减轻肝硬化大鼠的肝纤维化

目的:探讨汉黄芩素(Wog)对肝纤维化模型大鼠的影响及其机制。方法:将大鼠分为对照组,模型组,Cym组(Hedgehog抑制剂组),Wog低、中、高剂量组。检测各组大鼠血清肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)水平,肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平;天狼星红染色观察肝组织胶原纤维;RT-qPCR法检测肝组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA水平;检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;免疫印迹检测Hedgehog-YAP通路相关蛋白SMO、GLI2、SHH、Yes相关蛋白1(YAP)、p-YAP水平。结果:与对照组相比,模型组血清ALT、AST、GGT、HA、CⅣ、LN、PCⅢ水平和肝组织ColⅠ、α-SMA mRNA、Hyp、MDA、SMO、GLI2、SHH、p-YAP/YAP水平均升高,SOD水平降低;与模型组相比,Cym组和Wog低、中、高剂量组血清ALT、AST、GGT、HA、CⅣ、LN、PCⅢ水平和肝组织ColⅠ、α-SMA mRNA、Hyp、MDA、SMO、GLI2、SHH、p-YAP/YAP水平均降低,SOD水平均升高;其中Cym组与Wog高剂量组相比,上述指标无显著差异。对照组肝组织未见增生的纤维组织,模型组肝组织胶原纤维增生明显,胶原染色面积增大;与模型组相比,Cym组和Wog低、中、高剂量组肝组织胶原纤维增生程度均减轻,胶原染色面积减小;其中Cym组与Wog高剂量组相比,胶原纤维增生程度无显著差异。结论:Wog可减轻肝纤维化模型大鼠肝纤维化程度,对肝纤维化模型大鼠具有保护作用,其机制可能与Wog可抑制Hedgehog-YAP信号通路有关。

Hedgehog/Gli1通路在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用

目的：探讨Hedgehog/Gli1信号通路在雷奈酸锶（strontium ranelate,Sr）促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化中的作用。方法：体外分离培养大鼠BMSCs,诱导其成骨分化,根据实验目的加入不同浓度的Sr、Hedgehog受体拮抗剂cyclopamine（Cy）及Gli1小干扰RNA（Gli1-siRNA）。用Western blotting法检测Gli1及Runx2的表达,酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色法检测钙结节水平。结果：应用不同浓度的Sr（0.1-5 mmol/L）处理BMSCs细胞7 d后,细胞内Gli1蛋白表达增高,Sr的浓度为3 mmol/L时,Gli1表达达到高峰;使用Cy与Sr共处理BMSCs 7 d,能拮抗Sr对Gli1蛋白表达的上调作用;应用Gli1-siRNA转染细胞后,能下调Gli1蛋白的表达,并抑制Sr对Gli1下游Runx2蛋白表达的上调作用,还可拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论：Hedgehog/Gli1通路参与了Sr促进骨髓间充质干细胞向成骨分化的过程。

Sonic hedgehog阻断抗体增强外周血单个核细胞抗宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)阻断抗体对外周血单个核细胞(PBMCs)抗宫颈癌HeLa细胞作用的影响。方法:免疫细胞化学技术和RT-PCR法检测Shh及其信号分子在HeLa细胞中的表达;Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与HeLa细胞建立共培养体系;于共培养体系中加入Shh阻断抗体,流式细胞术检测CD3、CD69和CD71分子表达;ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-4分泌;显微镜观察PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结果:HeLa细胞表达Shh及其信号分子,HeLa细胞传代6次对Shh的表达水平没有影响;共培养体系中CD3+细胞增多;Shh阻断抗体可以促进CD69、CD71表达和IFN-γ的分泌,但抑制IL-10分泌,对IL-4分泌没有显著影响;Shh阻断抗体增强PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结论:Shh阻断抗体可以促进PBMCs活化,增强PBMCs抗宫颈癌HeLa细胞的作用。

乳腺癌组织中Hedgehog相关蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Hedgehog相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法从334例乳腺癌组织中制备组织块。免疫组织化学法检测六种Hedgehog信号蛋白(Shh、ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3)的表达。结果 Hedgehog信号蛋白表达与一些预后因素显著相关,包括淋巴结转移与Shh(P=0.001)、Gli-3(P<0.001)、Ptch(P=0.025)的相关性、分期与Shh和Ptch表达(P分别为0.007和0.037)的相关性,核分级与Smo(P=0.004)和Gli-3(P=0.026)的相关性,组织学分级与Smo(P=0.007)的相关性。Shh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3表达在表型之间差异有统计学意义(P分别为<0.0001、<0.0001、0.004、0.039、0.031和0.003)。Gli-2表达与较差的整体生存结果相关(P=0.012)。结论 Hedgehog通路表达激活与乳腺癌的侵袭性相关,可能是乳腺癌的一个有效的治疗靶点。Gli-2可作为乳腺癌的一个预后指标。

获得性异位骨化的分子生物学机制

背景:异位骨化是一个动态发展的过程,临床中不同亚型的异位骨化具有不同病因或诱导因素,但在异位骨化中后期进展阶段又表现出相似的病理过程,其中由于创伤等因素引起的获得性异位骨化具有较高的发病率。目的:对近年获得性异位骨化发生发展相关分子生物学机制研究进行综述。方法:以“分子生物学,异位骨化,机制”为检索词在中国知网、万方医学数据库进行检索,以“molecular biological,heterotopic ossification,mechanisms”为检索词分别在PubMed、Embase、Web of Science及Google Scholar数据库进行检索,检索时限为2016年1月至2022年8月,并根据获得文献进行补充检索,对所得文献进行筛选,最终纳入131篇文献进行综述分析。结果与结论:①获得性异位骨化的发生和发展是一个动态的过程,具有一定的隐匿性,因此该疾病的诊疗有一定的困难。②文章通过综述国内外相关文献,发现获得性异位骨化涉及骨形态发生蛋白、转化生长因子β、Hedgehog、Wnt及mTOR共5条主要信号通路,同时在局部微环境中涉及到Runx2、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子、成纤维细胞生长因子及Sox9共5项核心枢纽因子,核心机制可能是不同信号通路之间的相互作用,影响机体成骨细胞前体细胞、成骨细胞微环境以及与此相关的细胞因子,进而影响机体骨代谢并导致获得性异位骨化的发生。③未来可以以异位骨化相关单细胞的成骨内稳态为研究方向,以成骨细胞前体细胞-成骨微环境-信号通路及细胞因子作为研究要素,探索各部分要素在不同时空条件下的特征,比较不同种类、不同个体细胞成骨内稳态异同,从整体视角观察异位骨化分子信号网络调控机制,有利于未来临床防治异位骨化新方法的探究。④以中医药及靶向治疗为代表的治疗方法是近年的研究热点,如何将中医药与体内成骨稳态联系,并与靶向治疗相结合,也是未来研究方向之一。⑤目前获得性异位骨化的研究仍多限于基础实验研究,临床防治方法仍存在疗效不确切及不良反应明显等缺陷,相关靶向防治药物临床应用安全性及有效性仍有待验证,如何以基础实验研究为基础,结合发生发展机制,为临床防治提供新方向将是未来研究的重点。

Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨Hedgehog信号通路转录因子Gli1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色检测Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在102例乳腺浸润性导管癌及30例癌旁正常组织中的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 Gli1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为75.5%(77/102),高于癌旁正常组织的26.7%(8/30),两者差异有统计学意义(P<0.05)。Gli1蛋白的表达与腋窝淋巴结转移、雌激素受体(ER)表达有关(P<0.05),而与患者的年龄、绝经状况、肿瘤直径、病理分期、组织学分级、孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达状况均无关(P>0.05)。结论 Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在乳腺癌组织中存在高表达,其一定程度上对ER表达起到负向调节作用。

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001。结论胃癌发生过程中的Sonichedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。

Sonic Hedgehog与前列腺生长调控

Sonic hedgehog(Shh)是一类在胚胎发育过程中起关键作用的信号调节因子。研究认为Shh信号在前列腺导管形成分化以及基质-上皮的相互作用等机制中发挥着重要作用,从而调节前列腺发育、生长和细胞增殖;Shh信号作用途径的紊乱可导致肿瘤细胞的生成和增殖。探讨Shh信号机制在前列腺正常生长和疾病状态中的作用将为研究前列腺疾病的发病机制提供重要的思路。

Hedgehog信号通路效应蛋白在大肠癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路中效应蛋白在人大肠癌、正常大肠组织中的表达及与病理特征的相关性。方法采用免疫组化方法检测60份大肠癌和20份正常大肠组织中Shh、Ptchl和Glil蛋白的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果 Shh、Ptchl和Glil蛋白在大肠癌组织中均为高表达,Shh、Ptchl蛋白与Gli1蛋白的表达呈正相关。结论综合检测Shh、Ptchl和Gli1蛋白对大肠癌的诊断、治疗及预后有较明显的指导意义。

Hedgehog信号通路效应蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路中效应蛋白在人前列腺癌、癌旁正常前列腺组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测51例前列腺癌和癌旁正常前列腺组织中Shh、Ptch1和Gli1的表达。结果Shh、Ptch1和Gli1在前列腺癌组织中均为高表达,Shh与Ptch1的表达呈正相关。结论在前列腺癌Hh信号通路中Shh、Ptch1和Gli1呈现高度表达状态,Gli1更能准确地反映前列腺癌细胞的增殖水平和分化程度。

Hedgehog信号通路活化在结直肠病变的意义

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路蛋白表达在结直肠病变中的意义。方法采用免疫组织化学技术检测人正常结直肠黏膜、结直肠息肉及结直肠癌组织中Hh信号通路蛋白音刺猬因子(sonic hedgehog,SHh)、受体patched(PTCH)和分泌型Frz相关蛋白(SFRP1)的表达水平。结果正常结直肠组织中,SHh和PTCH蛋白不表达或轻度表达,SFRP1蛋白在细胞质和间质细胞轻度表达。结直肠息肉组织中,SHh轻度表达,PTCH和SFRP1不表达或轻中度表达。结直肠恶性肿瘤组织的SHh、PTCH和SFRP1大多呈高度表达。不同结直肠病变的SHh、PTCH和SFRP1蛋白表达的差异均有统计学意义(P值分别<0.01、0.05)。结论 Hh信号通路蛋白在正常结直肠黏膜几乎不表达,在结直肠息肉中有不同程度地表达,在结直肠癌中大多高度表达,提示其逐步量变与结直肠恶性病变的进程有关。

人音猬因子相互作用蛋白在肿瘤中的分子调控机制及临床价值的研究进展

HHIP(hedgehog-interacting protein)基因编码人音猬因子相互作用蛋白,位于染色体4q31.21-31.3。作为Hedgehog(Hh)信号通路的内源性拮抗剂,HHIP能够抑制Hh信号通路活化。在人类肿瘤中,Hh信号通路通常呈异常激活状态,HHIP在大多数类型的肿瘤组织中普遍低表达。HHIP表达水平与肿瘤患者总生存期呈正相关,可作为肿瘤患者的独立预后标志物。本文从HHIP在肿瘤中的生物学功能、作用机制及其临床价值方面对HHIP研究进展作综述。

Cloning and bioinformatical analysis of the N-terminus of the sonic hedgehog gene

The sonic hedgehog protein not only plays a key role in early embryonic development, but also has essential effects on the adult nervous system, including neural stem cell proliferation, differentiation migration and neuronal axon guidance. The N-terminal fragment of sonic hedgehog is the key functional element in this process. Therefore, this study aimed to clone and analyze the N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene. Total RNA was extracted from the notochord of a Sprague-Dawley rat at embryonic day 9 and the N-terminal fragment of sonic hedgehog was amplified by nested reverse transcription-PCR. The N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene was successfully cloned. The secondary and tertiary structures of the N-terminal fragment of the sonic hedgehog protein were predicted using Jpred and Phyre online.

Hedgehog信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用

Hedgehog(Hh)信号通路存在于多种动物体内,对调节胚胎发育及胚胎形成后分化起重要作用,其异常激活参与多种恶性肿瘤的发病过程。近年来研究发现Hh信号通路传导异常可导致肝细胞癌(HCC)发生,并与肿瘤侵袭、转移相关。深入探讨Hh信号通路与HCC的关系,将有助于进一步揭示HCC的发病机制,为HCC的防治提供新的可能途径及作用靶点。

Hedgehog相互作用蛋白基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的关联性研究及功能分析

目的:分析Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关联性及功能。方法:2017年1月-2019年10月收治COPD患者188例作为观察组,另选取同期体检的健康人群287例作为对照组,提取DNA,检测HHIP基因rs1489758、rs1492820位点多态性,测定1秒用力呼气末容积/用力肺活量比值(FEV1/FVC)、FEV1占预计值百分比(FEV1%),Logistic回归分析影响COPD的相关因素。结果:两组患者rs1489758、rs1492820位点基因型及等位基因分布比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组HHIP基因rs1489758位点GG、GT型FEV1%水平明显高于TT型患者,差异有统计学意义(P<0.05);观察组HHIP基因rs1492820位点AG型FEV1%水平明显高于AA型,差异有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析结果显示,rs1489758位点GT型、等位基因T型、rs1492820位点GG型、等位基因G型均为影响COPD发生的相关因素。结论:HHIP基因rs1489758、rs1492820位点多态性可能与COPD的发生及患者肺功能相关。

Hedgehog信号通路在非酒精性脂肪性肝纤维化进程中的作用

随着肥胖及其相关代谢综合征在全球范围内的广泛流行,非酒精性脂肪性肝病引起了国内外学者的广泛重视。非酒精性脂肪性肝纤维化是单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎进展为肝硬化的关键环节和必经阶段。阐述了Hedgehog(Hh)信号通路对非酒精性脂肪性肝纤维化进程中肝细胞的作用,并对其进行了群体研究,表明Hh信号通路的异常激活推动了非酒精性脂肪性肝纤维化的进展。对Hh信号通路的深入研究可能为非酒精性脂肪性肝纤维化的治疗提供了一条新途径。

初级纤毛介导成骨前体细胞系MC3T3-E1传代衰老减低成骨分化能力

背景:在大段骨缺损修复中,由于种子细胞传代等多种因素可引起成骨类细胞衰老,造成组织工程骨植入体内后成骨分化活性降低。近年来,初级纤毛介导细胞衰老的机制已被广泛研究,但“传代衰老-成骨活性减低”的初级纤毛相关机制尚未完全明了。目的:探讨初级纤毛调控成骨性MC3T3-E1细胞传代衰老的可能机制。方法:成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞传代至第10代(早期传代)及第40代(晚期传代),同时使用siRNA沉默IFT88阻碍初级纤毛生成,即将细胞分为第10代组、第40代组、第10代+siRNA IFT88-组、第40代+siRNA IFT88-组。各组细胞成骨诱导3 d,采用RT-PCR和Western blot检测衰老标志物CDKN2A(P16)的表达、成骨活性标志物骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶的表达、Hedgehog通路IHH的表达;茜素红染色和初级纤毛免疫荧光染色分析初级纤毛形态;对初级纤毛阳性率与IHH、骨形态发生蛋白2的表达进行Spearman相关性分析。结果与结论:①成骨诱导3 d,第40代组MC3T3-E1细胞的CDKN2A(P16)表达显著高于第10代组,而在siRNA IFT88-干预后差异消失;②第10代组的初级纤毛细胞阳性率高于第40代组,siRNA IFT88-则显著性抑制第10代与第40代细胞的初级纤毛表达;③第10代组MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶及骨形态发生蛋白2的转录活性和蛋白表达均高于第40代组,通过siRNA抑制初级纤毛表达后,上述差异减低或者消失;④初级纤毛细胞阳性率与IHH蛋白表达及骨形态发生蛋白2蛋白表达呈正相关。结果表明:初级纤毛介导了成骨性MC3T3-E1细胞的传代衰老,可调控成骨分化能力。

乳腺癌中Hedgehog信号通路的表达及其与LKB1基因相关性的研究

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路主要蛋白在乳腺癌中的表达及其与LKB1基因的相关性,以及与临床病理特征、预后的关系。方法:采用免疫组化方法检测75例人乳腺癌标本中Hh信号通路主要蛋白(Shh、Smo、Sufu、Gli1、Ptch)及LKB1基因的表达,分析二者相关性,并分析Hh信号通路的表达与临床病理特征及预后的关系。结果:在75例乳腺癌样本中,阳性表达Shh、Gli1、Smo、Ptch、Sufu、LKB1分别为69(92.0%)、58(77.3%)、65(86.7%)、50(66.7%)、34(45.3%)、33(44.0%),而在其相邻的正常乳腺上皮不表达或低表达。Hh信号通路与LKB1的表达呈负相关;Hh信号通路的表达情况与患者年龄、淋巴结转移情况、分子分型具有一定的相关性,且高表达的患者预后较差。结论:Hh信号通路在乳腺癌中过度激活,与临床病理特征及预后相关,并与LKB1基因的表达呈负相关,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治及预后可能有重要影响。

Hedgehog信号调控骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化:调控方式及其串话机制尚待研究

背景:Hedgehog信号通路在骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化过程中发挥重要的调控作用,但具体的调控机制,以及与其他信号通路的串话机制仍需进一步的研究,是近来研究的热点。目的:介绍hedgehog信号在调控骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中信号转导机制的研究现状与发展趋势,以及与其他信号通路的相互串话。方法:通过搜索CNKI,PubMed及Google Scholar等数据库,以"hedgehog,骨髓间充质干细胞,软骨形成,软骨细胞"和"hedgehog,IHH,SHH,bone marrow mesenchymal stem cell,chondrogenesis,cartilage,chondrocyte"为检索词,查阅有关hedgehog信号与骨髓间充质干细胞分化相关的文献,最终共纳入36篇文献进行综述。结果与结论:骨髓间充质干细胞是目前公认的组织工程种子细胞来源,hedgehog信号通路是运动系统发育过程中重要的信号分子。Hedgehog信号蛋白IHH和SHH参与调控骨髓间充质干细胞的增殖与成软骨分化,以及软骨形成后的表型维持,且与其他信号通路发挥协同作用。然而,具体的调控方式以及与其他信号的串话机制,仍需进一步的研究,是这一领域未来研究的方向。

Hedgehog信号通路与胰腺癌吉西他滨固有耐药的相关性研究

背景:吉西他滨是胰腺癌的一线化疗药物,但化疗耐药问题普遍存在并成为胰腺癌化疗失败的主要原因。Hedgehog(Hh)信号通路是胰腺癌发生、发展的核心信号通路之一,其异常活化与多药耐药相关蛋白表达、肿瘤干细胞的维持和自我更新等明确相关。目的:探讨Hh信号通路相关因子表达与胰腺癌吉西他滨固有耐药的相关性。方法:培养人胰腺癌细胞株CFPAC-1和PANC-1,予吉西他滨、Hh信号通路抑制剂GANT61或激动剂purmorphamine处理,或吉西他滨分别与GANT61或purmorphamine联合处理,以real-time PCR和蛋白质印迹法检测Hh信号通路相关因子Shh、Ptch、Smo、Gli1表达,CCK-8实验检测不同处理对细胞增殖活性的影响。结果:与CFPAC-1细胞相比,PANC-1细胞中的Hh信号通路相关因子表达显著增高(P<0.05),对吉西他滨的敏感性相对较低。GANT61可下调PANC-1细胞中的Gli1表达,并增强细胞对吉西他滨的敏感性,而purmorphamine则可上调CFPAC-1细胞中的Gli1表达,并降低细胞对吉西他滨的敏感性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Hh信号通路相关因子表达与胰腺癌吉西他滨固有耐药相关,抑制Hh信号通路异常活化可增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。