肿瘤抑制基因7L通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胰腺癌细胞生长的作用机制

目的 探讨肿瘤抑制基因(ST)7L对胰腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响及其作用机制。方法 收集胰腺癌患者及健康体检者血浆标本各22例,同时收集胰腺癌组织和癌旁组织标本13对。将ST7L过表达质粒及空白质粒分别转染胰腺癌细胞作为ST7L组和对照组,将ST7L敲降质粒及空白质粒分别转染胰腺癌细胞作为si-ST7L组和si-NC组。采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测临床样本中ST7L的表达水平;采用Western blot检测胰腺癌细胞系中ST7L的表达水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测相关蛋白表达水平并分组进行比较。结果 胰腺癌患者血浆ST7L表达水平明显低于健康对照者,胰腺癌组织中ST7L的表达水平显著低于对应癌旁组织;ST7L在胰腺癌细胞系PANC-1、AsPC-1、PaCa-2中的表达水平均明显低于胰腺导管正常细胞H6C7(P<0.05)。ST7L组及对照组细胞24 h、48 h、72 h及96 h的增殖能力均依次升高,ST7L组细胞24 h、48 h、72 h及96 h的增殖能力均明显低于同期对照组(P<0.05)。ST7L组PANC-1及PaCa-2细胞凋亡率均高于对照组;ST7L组PANC-1及PaCa-2细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达水平均高于对照组,而Bcl-2表达水平均低于对照组(P<0.05)。ST7L组细胞β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达均低于对照组;si-ST7L组细胞β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达均高于si-NC组(P<0.05)。结论 ST7L可能通过降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达来抑制胰腺癌细胞生长。

艾灸督脉调控Wnt/β-catenin信号通路对APP/PS1双转基因小鼠自噬水平的影响

目的:探讨艾灸督脉对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠自噬及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响,为防治阿尔茨海默病提供实验依据。方法:将12只C57BL/6J雄性小鼠设为正常组,另48只同龄同背景APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、艾灸+抑制剂组,每组12只。艾灸组隔附子饼灸百会,温和灸大椎、风府,20 min/d;雷帕霉素组腹腔注射2 mg/kg雷帕霉素;艾灸+抑制剂组在艾灸组基础上,腹腔注射3-甲基腺嘌呤1.5 mg/kg。以上3组均每日干预1次,干预2周,每周停1次。正常组和模型组小鼠仅固定,不采取任何干预措施。各组小鼠在干预前后均行水迷宫实验检测逃避潜伏期,透射电镜观察小鼠海马脑区自噬体和自噬泡的数量及形态,免疫组化检测脑区β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))表达差异,实时荧光定量聚合酶链式法(qRT-PCR)检测海马脑区Aβ_(1-42)mRNA相对表达量,免疫印迹(WB)法检测小鼠海马组织微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)/微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、泛素结合蛋白62(p62)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Wnt家庭成员3a(Wnt3a)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达情况。结果:干预后,与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组逃避潜伏期缩短(P<0.05)。模型组和艾灸+抑制剂组海马区自噬泡和自噬体较少,艾灸组和雷帕霉素组自噬泡和自噬体较多。与正常组比较,模型组Aβ_(1-42)阳性表达颗粒数增多(P<0.05);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组Aβ_(1-42)阳性表达颗粒减少(P<0.05)。与正常组比较,模型组Aβ_(1-42)mRNA相对表达量增多(P<0.05);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组Aβ_(1-42)mRNA相对表达量减少(P<0.05)。与正常组比较,模型组p62、mTOR、GSK-3β蛋白表达均升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Wnt3a、β-catenin蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组p62、mTOR、GSK-3β蛋白表达均下降(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Wnt3a、β-catenin蛋白表达均升高(P<0.05);与艾灸+抑制剂组比较,艾灸组、雷帕霉素组p62、mTOR、GSK-3β蛋白表达均降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Wnt3a、β-catenin蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:艾灸督脉可加速APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ的清除,其作用机制可能与艾灸督脉激活Wnt信号通路,进而促进细胞自噬有关。

茶黄素通过调节Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法 肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞活性实验结果将后续实验分为空白对照组,茶黄素低剂量(20μmol/L)组、中剂量(40μmol/L)组和高剂量(80μmol/L)组,细胞培养24 h。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;Western blot检测HepG2细胞中Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2细胞中GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量。结果 与空白对照组相比,茶黄素组HepG2细胞增殖显著降低(P<0.05)、凋亡率显著增加(P<0.05),GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),Ki67、PCNA、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量显著下调(P<0.05),而cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达量显著上调(P <0.05)。结论 茶黄素可通过调控Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、Hedgehog信号通路及CaBp-D9k基因表达的作用机制

目的 研究利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、人类胚胎发育调控因子(Hedgehog)信号通路及钙调节蛋白(CaBp-D9k)基因表达的作用机制。方法 取60只SD大鼠随机分为健康组、糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、去势组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组,每组10只。糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组建立糖尿病模型,去势组建立去势模型,糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组在糖尿病模型建立成功后建立去势模型。采用全自动化学分析仪检测空腹血糖值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素水平,HE染色观察病理形态,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素(BGP)mRNA、CaBp-D9k mRNA水平,TUNEL检测成骨细胞凋亡,免疫印迹检测音猬因子(Shh)、细胞表面受体(Ptch)1、锌指蛋白(Gli)1蛋白表达。结果 HE染色结果显示:与健康组相比,糖尿病组和去势组中骨小梁排列紊乱,数量减少,变细,发生断裂,空洞增多,成骨细胞数量显著减少,糖尿病+去势组中这种病理变化更加严重;在经过利拉鲁肽干预后,糖尿病+利拉鲁肽组和糖尿病+去势+利拉鲁肽组新生骨量及成骨细胞增多。与健康组相比,糖尿病组、去势组、糖尿病+去势组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数升高,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1水平降低,且以去势组与糖尿病+去势组水平变化最显著(P<0.05),经过利拉鲁肽干预后,与糖尿病组、去势组及糖尿病+去势组相比,糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数显著降低,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1显著升高(P<0.05)。结论 利拉鲁肽通过激活Hedgehog信号通路、提高骨钙素及CaBp-D9k水平,降低血糖水平,减少成骨细胞凋亡,促进骨形成,改善糖尿病骨质疏松病情严重程度。

薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义

目的分析薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义。方法选取2020年4月至2021年4月在本院接受治疗的46例薄型子宫内膜不孕症患者作为观察组。同期选择非薄型子宫内膜造成不孕症患者46例作为对照组。采用腹部超声观察两组患者子宫内膜厚度及形态。采用多普勒超声检查子宫螺旋动脉收缩期峰值流速(PSV)、搏动指数(PI)与阻力指数(RI)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平和促卵泡成熟激素(FSH)。Western Blot检测内膜组织血管内皮生成分子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、E-钙粘蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-链蛋白水平。结果观察组子宫内膜厚度明显小于对照组(P<0.05);观察组A型子宫内膜比例明显低于对照组,C型子宫内膜比例明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清E2、P水平明显低于对照组,FSH水平明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者PSV明显低于对照组,PI和RI明显高于对照组(P<0.05)。观察组VEGF、LIF蛋白水平明显低于对照组,E-钙粘蛋白、MMP-9、β-链蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。结论薄型子宫内膜不孕症患者子宫内膜容受性较差,血流量较差,Wnt/β-链蛋白可能参与调节患者子宫内膜的生长发育。

骨形态发生蛋白/Wnt信号通路调控成骨:揭示骨骼形成和重塑的分子机制

背景:成骨细胞是负责骨骼形成和重塑的主要细胞类型,其功能的正常发挥受到多种信号通路的精密调控,其中,骨形态发生蛋白和Wnt信号通路在成骨过程中起着关键作用。目的:综述了骨形态发生蛋白/Wnt信号通路在调控成骨细胞功能中的作用,并分析其在不同生理和病理条件下的变化,以期进一步揭示骨骼形成和重塑的分子机制。方法:以中文检索词“BMP信号通路,Wnt信号通路,成骨”及英文检索词“BMP signaling pathway,Wnt signaling pathway,osteogenesis”在中国知网、万方和PubMed数据库中检索研究原著,检索时限为各数据库建库至2023年6月的相关文献,最终筛选61篇文献进行分析总结。采用文献综述的方法,对骨形态发生蛋白/Wnt信号通路调控成骨作用的研究进行梳理和分析。结果与结论:①骨形态发生蛋白和Wnt信号通路在成骨细胞的分化、增殖和成熟过程中发挥重要作用。骨形态发生蛋白信号通路主要通过激活Smad蛋白来调控成骨相关基因的表达,Smad蛋白被激活后进入细胞核,调控与成骨相关的基因表达,与骨形态发生蛋白不同,Wnt信号通路主要依赖于β-catenin的激活来发挥生物学效应。②不同生理和病理状态下,骨形态发生蛋白/Wnt信号通路的调控作用会受到多种因素的影响。生长因子及激素及机械应力等会在一定程度上影响骨形态发生蛋白/Wnt信号通路的活性。③骨形态发生蛋白/Wnt信号通路在调控成骨过程中与其他信号通路相互作用,共同构成复杂的调控网络。④中药和天然化合物可以通过调控信号通路来促进骨骼健康,为中药治疗骨骼疾病提供了新的可能性。⑤未来研究可进一步探讨骨形态发生蛋白/Wnt信号通路与其他信号通路的相互作用以及其在不同生理和病理条件下的变化,解析此复杂网络中的关键节点和调控机制,为骨骼相关疾病的治疗提供更精确的靶点,也为揭示骨骼形成和重塑的分子机制提供新的思路。

Adgrv 1基因经Hedgehog通路调控纤毛发育致视网膜色素变性的研究

目的:从Hedgehog(Hh)信号通路分析Adgrv1基因变异致Usher综合征(USH)的机制。方法:基于Adgrv1变异模型小鼠(Adgrv1^(-/-)),野生型(WT)C57BL/6小鼠为对照,从细胞水平和视网膜组织水平采用qRT-PCR、HE、视网膜透射电镜和免疫荧光方法验证Adgrv1基因变异对纤毛结构的影响,分析Hh信号通路关键因子的表达变化。结果:Adgrv1基因在视网膜和原代培养肺成纤维细胞中均有表达,但Adgrv1^(-/-)小鼠表达量显著降低。Adgrv1基因变异可造成光感受器外节盘膜溶解,以及原代肺成纤维细胞纤毛长度明显缩短,在视网膜组织和细胞水平Hh信号通路上Ptch1、Gli基因表达明显下降,而PKA基因表达上升。结论:Adgrv1基因变异致视网膜色素变性,与Hh通路中PTCH1、GLI1蛋白表达降低,使得细胞纤毛缩短,视网膜光感受器细胞外节盘膜溶解有关。

LncRNA DLEU2对宫颈癌细胞生物学行为、miR-21和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并基于miR-21和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨其作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、DLEU2干扰组、DLEU2干扰空载组、DLEU2过表达组、DLEU2过表达空载组。除对照组外,给予其他组细胞转染相应的质粒。转染24 h后,检测各组的细胞增殖活性、细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白表达水平、细胞周期及细胞周期相关因子的mRNA表达水平、细胞侵袭数量及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达水平、miR-21表达水平、Wnt/β-catenin的蛋白及mRNA表达水平。结果 (1)与对照组相比,DLEU2过表达组的细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平下调、Bcl-2相关性蛋白X和Caspase-3蛋白表达水平上调(P<0.05)。(2)与对照组相比,DLEU2过表达组的G_(1)期和S期细胞比例降低、G_(2)期细胞比例升高、细胞周期相关因子的mRNA表达水平下调(P<0.05)。(3)与对照组相比,DLEU2过表达组的细胞侵袭数减少,神经型钙黏蛋白表达水平下调,上皮型钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05)。(4)与对照组相比,DLEU2过表达组的miR-21表达水平及Wnt3a、β-catenin的mRNA和蛋白表达水平均下调。(5)DLEU2干扰组的上述指标变化均与DLEU2过表达组相反(P<0.05),而两个空载组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DLEU2可能通过调控miR-21及抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,从而影响宫颈癌细胞的存活、死亡、EMT和侵袭等生物学行为。

钙泊三醇诱导的HaCaT细胞Wnt/β-Catenin信号通路差异表达基因的筛选

目的研究钙泊三醇(calcipotriol)对HaCaT细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探讨其治疗银屑病的机制。方法分别用1.0×(10-7～10-11)mol/L的钙泊三醇刺激HaCaT细胞,CKK-8法检测其对HaCaT细胞增殖的影响。再用1.0×10-7mol/L的钙泊三醇处理细胞后,抽提实验组和对照组细胞的总RNA,用紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳法检测RNA产量和质量;合成cDNA后与含有89条基因的Wnt信号通路PCR芯片进行杂交。结果当钙泊三醇的浓度为1.0×(10-7～10-8)mol/L时,作用HaCaT细胞48h后,钙泊三醇组的吸光值较空白对照组显著降低,该两组有25条基因表达差异达2倍以上,其中21条显著上调,4条显著下调。这些差异表达基因涉及细胞增殖与分化、胚胎形成、细胞内信号传导和多组织器官发育等。结论钙泊三醇通过影响Wnt信号通路中CTNNB1,LRP5,TCF7L1,WNT7B和RPL13A等相关基因表达,对角质形成细胞的增殖分化发挥调节作用。

重亚硫酸氢盐测序法检测Wnt信号通路抑制基因在急性早幼粒细胞白血病细胞中甲基化变化

目的:应用重亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基化的Wnt信号通路抑制基因,并探讨BSP法作为定量研究基因甲基化方法的优缺点。方法:以NB4细胞为研究对象,20例健康人单个核细胞为对照;常规提取DNA并用亚硫酸氢盐处理,然后用PCR扩增目标序列,应用重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析在NB4细胞中Wnt信号通路抑制基因基因的甲基化状态。并通过与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,M SP)、焦磷酸测序技术(pyrosequencing)比较、评价BSP法检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化状态的优缺点。结果:BSP产物克隆测序检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因95.26%,DKK3基因86%,SFRP1基因81.67%,SFRP2基因95.71%,SFRP4基因85%,SFRP5基因95%;20例健康人单个核细胞为对照组中Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因1.5%,DKK3基因4.2%,SFRP1基因0%,SFRP2基因0.9%,SFRP4基因2.5%,SFRP5基因1.75%。与正常人M NC相比,NB4细胞的Wnt信号通路相关抑制基因启动子甲基化率明显增高。结论:急性早幼粒细胞株NB4细胞中存在Wnt信号通路多个抑制基因高甲基化状态。此类基因异常甲基化有可能成为急性早幼粒细胞白血病的早期诊断指标和治疗靶点。

舒林酸对HBV X基因转染的肝癌细胞Wnt信号通路的影响

目的探讨非甾体类抗炎药舒林酸(Sulindac)对HBV X基因转染的人肝癌SMMC7721细胞系Wnt信号通路的影响。方法用脂质体转染方法将HBx真核表达载体pcDNA3-X瞬时转染SMMC7721细胞(SMMC7721/HBx),以转染空载体pcDNA3的SMMC7721细胞组(SMMC7721/pcDNA3)及未转染质粒的SMMC7721细胞组(SMMC7721)为对照,于转染后72 h用RT-PCR和Western blot检测HBx的表达;并以各种浓度的舒林酸于瞬时转染后24 h干预SMMC7721/HBx组和SMMC7721/pcDNA3组至72 h,Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin的表达,Western blot检测cyclinD1的表达。结果RT-PCR和Western blot显示,SMMC7721/HBx组在RNA及蛋白水平均有HBx的表达,而SMMC7721/pcDNA3组及SMMC7721组均无表达。与SMMC7721/pcD-NA3组及SMMC7721组相比,Western blot示SMMC7721/HBx组β-catenin、cyclinD1的表达水平较高,免疫细胞化学显示SMMC7721/HBx组β-catenin的表达水平较高,核染色较深,而SMMC7721/pcDNA3组及SMMC7721组之间则无明显差异。Westernblot和免疫细胞化学示一定浓度的舒林酸干预SMMC7721/HBx组和SMMC7721/pcDNA3组细胞48 h后可下调β-catenin和cy-clinD1的表达,而对SMMC7721/HBx组的下调较SMMC7721/pcDNA3组明显。结论HBx基因成功瞬时转染入SMMC7721细胞,激活Wnt信号通路,并同时上调cyclinD1的表达。舒林酸可通过下调β-catenin抑制肝癌细胞的Wnt信号通路,下调cyclinD1的表达,且HBx阳性的肝癌细胞对舒林酸较敏感。

Wnt信号通路及靶基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的研究Wnt信号通路中β-catenin、TCF-4和Wnt-2在非小细胞肺癌中的活化状态及其与靶基因VEGF和Survivin表达的相关性,探讨Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭转移以及对靶基因表达的影响,为非小细胞肺癌多靶点基因治疗提供实验依据。方法应用RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测非小细胞肺癌的癌组织及癌旁正常组织中β-catenin、TCF-4和Wnt-2的表达,以及在Wnt信号通路的活化状态下靶基因VEGF和Survivin表达情况。结果在非小细胞肺癌组织中,β-catenin、TCF-4和Wnt-2的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01);Wnt^-组与Wnt^+组在癌旁正常组织和NSCLC组织中分布差异具有统计学意义(P=0.000);VEGF和Survivin在Wnt^+组中的表达频率均明显高于Wnt^-组。结论非小细胞肺癌组织中Wnt信号通路被活化,其通路活化可能是导致非小细胞肺癌各靶基因表达增加的重要因素,并与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关。

转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路

目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?

Wnt基因/Wnt信号通路与乳腺癌

Wnt蛋白是一组调控胚胎形成期间细胞间信号传导的高度保守的分泌信号分子.在过去的几年里,由Wnt蛋白触发的不同信号通路已经得到了详尽的研究.Wnt基因与Wnt信号通路组成分子的突变可引起发育缺陷,异常的Wnt信号传导可导致人类疾病包括肿瘤的发生.许多证据都表明,Wnt信号通路的失调与乳腺癌的发生发展密切相关.microRNAs(miRNAs)是调控基因表达的重要因子.本文从Wnt信号通路的组成、Wnt信号通路的分子调控及其与乳腺癌发生/发展的关系作一综述.

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的:研究环靶明(cyclopamine)抑制Sonic Hedgehog(SHH)信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法:抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 :在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 :抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。

瘢痕灸预处理对原发性肝癌大鼠Wnt信号通路相关基因表达的影响

目的:探讨瘢痕灸预处理肝俞及足三里穴对原发性肝癌大鼠Wnt信号传导通路相关基因表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠48只随机分为空白组、模型组、预处理肝俞组和预处理足三里组,每组12只。预处理肝俞组和预处理足三里组均提前15 d施行瘢痕灸后,与模型组一同采用腹腔注射二乙基亚硝胺溶液(50mg/kg)建立肝癌模型。采用ELISA法检测血清中甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、γ-谷胺酰转肽酶(Glutamyl transpeptidase,γ-GT)和岩藻糖苷酶(fucosidase,AFU)的表达量,RT-PCR法检测Wnt信号传导通路中Wnt3amRNA、Wnt10bmRNA的表达量,并观察大鼠肝脏组织形态学变化。结果:与模型组比较,预处理肝俞组、预处理足三里组的大鼠AFP、AFU、γ-GT和Wnt3amRNA、Wnt10bmRNA的表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与预处理肝俞组比较,预处理足三里组各指标表达量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色表明模型组肿瘤病变灶已形成,镜下可观察癌变细胞已深染,形态不规则,细胞核异常,增生结节较多;预处理足三里和预处理肝俞组两组癌变细胞数量较少,可见较少的结节形成。结论:瘢痕灸预处理肝俞和足三里穴均可以降低原发性肝癌大鼠血清中AFP、AFU、γ-GT和Wnt信号传导通路中Wnt3amRNA、Wnt10bmRNA的表达量,且瘢痕灸肝俞穴的预防作用更为显著。

沉默牛磺酸上调基因1通过Wnt/CTNNB1信号通路提高胃癌细胞对顺铂和5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨牛磺酸上调基因1(TUG1)调控胃癌细胞对顺铂(CDDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的作用效果及机制。方法实时定量PCR法检测TUG1在CDDP和5-FU耐药的胃癌组织和细胞系(SGC7901/R)中的表达。应用增强型CCK8法检测细胞的增殖活力,并计算CDDP和5-FU的半抑制浓度(IC50)。双荧光素酶实验检测Wnt/CTNNB1信号通路活性。Western boltting检测CTNNB1蛋白的表达。结果与对照组胃癌组织和细胞系(SGC7901)相比,TUG1在CDDP和5-FU耐药的胃癌组织和细胞系(SGC7901/R)中高表达。TUG1沉默上调了SGC7901/R细胞中CDDP和5-FU的IC50,提高了化疗敏感性。TUG1沉默降低了SGC7901/R细胞中Wnt/CTNNB1信号通路的活性,并抑制了CTNNB1蛋白的表达。CTNNB1过表达激活了SGC7901/R细胞中Wnt/CTNNB1信号通路,逆转了TUG1沉默对CDDP和5-FU化疗敏感性的促进作用。结论TUG1与胃癌的化疗不敏感相关,沉默TUG1通过Wnt/CTNNB1信号通路提高胃癌细胞对CDDP和5-FU的敏感性。

芹菜素对U937细胞增殖凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨芹菜素对人U937细胞株增殖和凋亡,以及对该细胞株SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc和CCND1表达的影响。方法以不同浓度芹菜素处理对数生长期的U937细胞,倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;实时荧光定量PCR检测SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达水平;Western blot检测SALL4、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,芹菜素处理组细胞碎片增多;细胞增殖受抑制,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);G2/M期细胞比例增加(P<0.05);凋亡率增加(P<0.05)。芹菜素处理36 h后,U937细胞的SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达下调,SALL4和Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芹菜素对U937细胞有抑制增殖诱导凋亡的作用,其机制可能与下调SALL4和Bcl-2,活化Caspase-3,阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。

基因芯片技术分析骨髓间充质干细胞神经分化中Wnt信号通路的激活

背景:通过对骨髓间充质干细胞诱导向神经元样分化的Wnt信号调控机制进行研究,为骨髓间充质干细胞在脊髓损伤及组织工程中的应用打下基础。目的:应用基因芯片技术测试人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中相关基因的表达变化。方法:分离和纯化人骨髓间充质干细胞,选取第5代细胞,基于Gateway^(TM)载体构建技术构建慢病毒载体,将Wnt-1转导至人骨髓间充质干细胞。设置3个实验组,分别为对照组、未转导组以及转导组,诱导人骨髓间充质干细胞神经分化,扫描电镜下观察细胞形态,应用基因芯片检测Wnt信号通路基因的调控变化及差异表达。结果与结论:(1)扫描电镜下发现:转导Wnt-1并诱导分化的细胞具有神经元样细胞的形态。(2)基因芯片杂交技术检测发现:3 287个基因上调,4 215个基因下调,与神经系统发育和分化相关基因有上调和下调的变化。(3)从中挑选了相关基因验证,表明转导Wnt-1后细胞内Wnt通路激活,下游基因转录,促进人骨髓间充质干细胞的神经分化。

WNT信号通路在KRAS基因突变型结直肠癌中的作用

目的:探讨WNT信号通路在KRAS基因突变型结直肠癌的作用。方法:收集206例郑州大学第一附属医院结直肠癌患者的临床病理资料及其新鲜组织,采用qRT-PCR方法检测WNT信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1 mRNA的表达。将KRAS基因突变的结直肠癌细胞SW480分为β-catenin siRNA组、阴性对照组及空白对照组3组,β-catenin siRNA组和阴性对照组分别转染特异性β-catenin siRNA和si-control,空白对照组细胞只加入含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,利用MTT法检测细胞增殖,Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡。结果:206例结直肠癌标本中KRAS基因突变率为37.8%;与野生型标本相比,突变型标本WNT信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1 mRNA的表达升高(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组相比,β-catenin siRNA组细胞增殖下降(P<0.05)、凋亡升高(P<0.05)。结论:与野生型相比,β-catenin和Cyclin D1两种蛋白在KRAS突变型结直肠癌样本中的表达水平更高,且抑制β-catenin表达后降低了KRAS突变型结直肠癌细胞的增殖,促进了细胞的凋亡。