左归丸含药血清对Hedgehog-GLi通路关键因子mRNA表达及骨吸收功能的影响

目的探讨左归丸含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中Hedgehog-GLi通路关键因子mRNA表达及骨吸收功能的影响。方法建立成骨细胞、破骨细胞、骨磨片共培养体系,实验分为7组:空白对照组、假手术组、OVX组、阳性对照组、左归丸组、激动剂组和激动剂+左归丸组。选用50只雌性SD大鼠,分别制备相对应组含药血清,实验各组分别加入相对应组大鼠血清。通过实时荧光定量PCR检测成骨细胞Ihh、Ptch、Smo、GLi1、OPG及RANKL的mRNA表达;并采用甲苯胺蓝染色方法检测破骨细胞骨吸收功能。结果与假手术组相比,OVX组Ihh、Ptch、Smo、GLi1mRNA表达显著上调,同时OPGmRNA表达水平显著降低,RANKL mRNA表达水平显著增加,RANKL/OPG比值明显增高。与OVX组相比,阳性对照组与左归丸组Ihh、Ptch、Smo、GLi1mRNA表达明显下调,同时OPG mRNA表达水平显著升高,RANKL mRNA表达水平显著降低,RANKL/OPG比值明显下降。OVX组加入激动剂Shh重组蛋白后,Hedgehog-GLi信号通路关键因子的mRNA表达较OVX组明显增加。与激动剂组比较,激动剂+左归丸组Ihh、Ptch、Smo、GLi1mRNA表达以及RANKL/OPG比值均明显下降。与假手术组相比,OVX组的骨吸收陷窝面积显著增加;与OVX组相比,阳性对照组和左归丸组的骨吸收陷窝面积显著下降。结论左归丸含药血清可一定程度上抑制Hedgehog-GLi通路关键因子Ihh、Ptch、Smo、GLi1的活性,进而抑制OVX所致的骨吸收增强。

Hedgehog-Gli信号通路与肿瘤

Hedgehog-Gli信号通路的发现始于对果蝇胚胎发育的研究,其作用涉及细胞的增生分化和组织发育。众多研究表明该通路与多种肿瘤相关,包括基底细胞癌,髓母细胞瘤,胰腺癌,白血病,胃肠道肿瘤,肺癌,乳腺癌,前列腺癌等。抑制该通路有可能成为肿瘤预防和治疗的新靶点。本文将从该通路本身传导机制,在肿瘤中的活化,与其它肿瘤相关的信号通路的交谈,阻断该通路用于临床治疗四个方面对近几年的研究进展做简要综述。

Hedgehog-Gli信号传导通路在脑肿瘤中的研究进展

脑肿瘤,特别是恶性脑肿瘤的治疗目前仍是临床医生面临的一个难题,重要的原因之一是由于对脑肿瘤的发生发展机制尚不明了。最新研究表明:神经干细胞、脑肿瘤干细胞都可能参与这一过程,针对干细胞水平的研究将给脑肿瘤的治疗带来新希望。Hedgehog-Gli信号通路正是一条影响干细胞生物学行为的重要通路。本文就该通路在神经系统发育、神经干细胞分化和脑肿瘤发生的研究作一综述。

Hedgehog-Gli信号通路在骨质疏松发生中作用的研究进展

国内外骨质疏松患病率逐年增高,因此对骨质疏松的研究也一直是医学热点。骨质疏松的发生发展是由多种细胞和信号通路共同作用的结果,其中成骨细胞和破骨细胞的正常偶联是维持骨稳态防止骨质疏松发生的重要因素。Hedgehog-Gli信号通路可以通过调控成骨细胞的增殖、分化及活性,进而调控骨组织的形成,另一方面它还可以通过刺激破骨细胞RANKL表达进而促进破骨细胞增殖分化,从而调控骨吸收的过程,因此对维持骨稳态亦发挥重要作用。本文主要归纳总结了近年来中外学者对Hedgehog-Gli信号通路在骨质疏松发生中作用机制的研究结果,以期进一步明确在骨质疏松发生中Hedgehog-Gli信号通路的作用,从而为骨质疏松的防治开拓新的思路和方向。

Hedgehog-Gli信号通路在组织器官纤维化中作用的研究进展

研究发现Hedgehog-Gli信号通路不仅参与胚胎发育和组织发生,也参与机体多个组织器官纤维化。阻断Hedgehog-Gli信号通路时,组织器官纤维化程度减轻。Gli作为该通路直接调控靶基因的核心转录因子,在组织器官纤维化过程中起关键作用。因此,研究Hedgehog-Gli信号通路可能为治疗组织器官纤维化提供新的治疗靶点。该文就HedgehogGli信号通路在组织器官纤维化研究进展作一综述,以期为深入理解其发生、发展机制提供参考。

Hedgehog-Gli信号通路在肝星状细胞激活中的作用

Hedgehog信号通路是生物体内重要的调节昆虫和哺乳动物胚胎发育的经典通路之一。其调控发育过程中及组织损伤过程中干细胞的分化、移行和增殖。肝纤维化是慢性肝脏疾病共同的病理过程,也是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,其核心环节为肝星状细胞的异常活化。然而长期以来Hedgehog通路在肝纤维化过程中对肝星状细胞的调控作用未得到认识。近年来,学者逐渐意识到经典的Hedgehog信号通路与肝星状细胞的活化有关,然而作用机制尚不明确。

Hedgehog-GLI信号通路在胰腺癌发生中的作用

近年来研究发现Hedgehog-GLI信号转导通路的异常激活参予胰腺癌的发生及恶性生物学特性的维持．GLI锌指转录因子作为该信号通路末端的靶基因直接调控子,在这一过程中起着非常重要的作用．本文就Hedgehog-GLI信号通路在胰腺癌发生中的作用、GLI转录活性的调控及致瘤作用、Hedgehog-GLI通路的靶向治疗价值等方面的研究进展作一综述．

跑台运动对切除卵巢大鼠骨质疏松症的保护机制

目的由Hedgehog-Gli信号通路探讨跑台运动对卵巢切除所致骨质疏松症大鼠的保护机制。方法50只雌性SD大鼠,随机分为假手术组(S,15)、造模组(Z,35)。假手术组仅切除卵巢周围的少量脂肪,造模组切除双侧卵巢。术后10周采用苏木精-伊红染色法验证造模。将成功造模的大鼠随机分为模型组(M)、戊酸雌二醇阳性对照组(P)和跑台运动组(E),每组各10只。P组以0.184 mg/(kg·d)的标准灌服戊酸雌二醇混悬液,其他组灌服等剂量生理盐水,每日一次,E组同时进行每周5 d,每次30 min的中等强度跑台训练,干预12周后取材,检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、Ⅰ型前胶原N端肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX)和骨钙素(OC)的水平,Micro-CT检测骨密度,强度仪上检测骨力学性能,Western blot检测股骨中Shh、Ptc、Smo及Gli蛋白表达水平。结果与S组相比,M组骨形成代谢指标、骨密度值、骨力学性能和股骨Shh、Ptc、Smo及Gli蛋白表达均下降(P<0.01);与M组相比,P组和E组骨形成代谢指标、骨密度值、骨力学性能和股骨Shh、Ptc、Smo及Gli蛋白表达均上升(P<0.01);与P组相比,E组股骨Shh、Ptc、Smo及Gli蛋白表达升高(P<0.05)。结论12周跑台运动可通过上调股骨Shh、Ptc、Smo及Gli的表达介导对去卵巢大鼠骨代谢的调节,改善骨质疏松症。

左归丸含药血清对成骨细胞中Ihh、Ptch、Smo、GLi1蛋白表达及破骨细胞数量的影响

目的 探讨左归丸含药血清对成骨细胞中Hedgehog-GLi通路关键蛋白表达及破骨细胞数量的影响。方法 选用50只雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、造模组。造模组大鼠切除双侧卵巢,12周后随机分为卵巢切除组(ovariectomy,OVX)、阳性对照组和左归丸组。阳性对照组大鼠灌服戊酸雌二醇混悬液,左归丸组大鼠灌服左归丸水煎液,连续干预7 d。末次给药1.5 h后,腹主动脉取血制备各组相应含药血清。建立成骨细胞、破骨细胞、骨磨片共培养体系,分为空白对照血清组、假手术血清组、OVX血清组、阳性对照血清组、左归丸含药血清组、激动剂组和激动剂+左归丸含药血清组,分别添加各组对应血清。免疫荧光法检测成骨细胞印度刺猬蛋白(Indian hedgehog,Ihh)、碎片蛋白(patched,Ptch)、润滑蛋白(smoothened,Smo)及GLi1蛋白表达;免疫组化法检测成骨细胞骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)、核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达;对破骨细胞进行TRAP染色,计算TRAP+细胞数;ELISA检测共培养体系上清液中TRAP的含量。结果与假手术血清组比较,OVX血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1蛋白表达水平显著上调(P<0.01),RANKL/OPG比值增高;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量亦明显增加(P<0.05)。与OVX血清组比较,左归丸含药血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达明显下调,RANKL/OPG比值下降;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量明显降低(P<0.05)。与激动剂组比较,加入左归丸含药血清后,Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达及RANKL/OPG比值均明显下降,TRAP+细胞个数及TRAP含量亦明显降低(P<0.05)。结论 左归丸含药血清可通过抑制异常活跃的Hedgehog-GLi信号通路,使Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达水平下调,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的数量和活性,起到减少骨丢失作用。

TGF-β1对话Hedgehog-Gli1信号调控肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积

该研究旨在探讨Hedgehog-Gli1（HH）信号在肾小管上皮细胞表型转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和胶原累积中的作用及与TGF-β1信号的对话机制。该实验通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以溶剂作为对照组,以1～50 ng/m L重组蛋白sonic hedgehog（Shh）或5 ng/m L TGF-β1作为诱导组,以加入或不加入HH信号特异性阻断剂环靶明（cyclopamine,Cyp）5μmol/L为干预组。细胞培养24 h,采用ELISA、q RT-PCR、免疫细胞荧光染色和Western blot等方法检测HH信号相关分子（Ptch1、Smo和Gli1）、TGF-β1、EMT相关分子（Rac1蛋白、肌成纤维细胞标志物α-SMA和上皮细胞标志物E-cadherin）、III型胶原m RNA或蛋白的表达。结果发现,外源性Shh上调Smo和Gli1表达,抑制Ptch1表达,继而激活HH信号;HH信号活化抑制肾小管上皮细胞E-cadherin的表达,上调α-SMA、III型胶原和TGF-β1的表达。环靶明干预后,Smo表达下调,进而抑制HH信号、EMT和胶原累积,并下调TGF-β1的表达。应用TGF-β1诱导小管上皮细胞EMT,同时也上调HH信号分子Smo和Gli1的表达,下调Ptch1的表达,提示TGF-β1可诱导HH信号活化。综上所述,HH信号和TGF-β1均参与了肾小管上皮细胞EMT和胶原累积过程。HH信号活化可促进TGF-β1的表达,同时TGF-β1能激活HH信号,推测TGF-β1与HH信号可能存在交叉对话以调控EMT和胶原累积。

基于Hedgehog-Gli1信号通路探讨中药复方肠复康胶囊干预结肠癌血管生成的分子机制

目的:观察中药复方肠复康胶囊对人结肠癌Lo Vo细胞裸鼠模型血管生成、肿瘤转移的抑制作用,并探讨其对Hedgehog-Gli1信号通路的干预及对VEGF表达的影响。方法:采用裸小鼠结肠癌原位种植转移模型,将荷瘤鼠50只随机分为5组,每组10只,种植后第1周开始,分别给予生理盐水(模型组)、5-FU(5-FU组)、肠复康胶囊低剂量及高剂量(肠复康胶囊低剂量组、肠复康胶囊高剂量组)、5-FU与肠复康胶囊联合应用(肠复康胶囊+5-FU组),每天1次,共用4周。种植后第5周末处死动物,测量原位肿瘤瘤体质量、抑瘤率,应用免疫组化检测各组结肠癌组织中肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD),应用Western blot法检测Gli1、VEGF蛋白表达。结果:与模型组比较,5-FU组、肠复康胶囊低剂量组、肠复康胶囊高剂量组、肠复康胶囊+5-FU组抑瘤率分别为34.96%、27.97%、52.44%、58.74%,平均瘤体质量分别为(0.93±0.27)g、(1.03±0.29)g、(0.68±0.28)g、(0.59±0.22)g,差异均有统计学意义(P<0.05);肠复康胶囊低剂量组、肠复康胶囊高剂量组、肠复康胶囊+5-FU组小鼠MVD分别为(5.33±2.1)、(2.3±1.5)、(0.66±0.5),明显低于模型组与5-FU组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组区域淋巴结转移率达100.00%,腹膜转移率达91.66%,肝转移率75.00%,肺转移率为58.33%。而肠复康胶囊高剂量组及肠复康胶囊+5-FU组各脏器转移率均较模型组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示,5-FU组及肠复康胶囊高剂量组Gli1蛋白表达分别(0.660±0.155)、(0.632±0.147),VEGF蛋白表达分别为(1.011±0.481)、(0.981±0.509),与模型组相比,Gli1和VEGF蛋白的表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:肠复康胶囊对结肠癌肿瘤新生血管生成具有抑制作用,其机制与其抑制Hedgehog-Gli1信号通路激活,下调VEGF表达而发挥抗肿瘤血管形成作用有关。

柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。

Hedgehog-Gli信号通路与髓母细胞瘤

Hedgeho-Gli信号通路在中枢神经系统的正常发育过程中发挥着重要作用。近年来研究表明Hedgehog-Gli信号通路的异常与髓母细胞瘤的发生密切相关,因此Hedgehog-Gli信号通路可能是一个潜在的髓母细胞瘤的治疗靶点,通过对其信号通路作用机制的深入研究,有助于对髓母细胞瘤的了解及找到可能的治疗方案。

9周负重爬梯训练对绝经后骨质疏松症大鼠的影响及作用机制分析

目的:探究负重爬梯训练对绝经后骨质疏松症大鼠的影响,以及Hedgehog-Gli信号通路在其中的调控作用。方法:将40只6月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、戊酸雌二醇阳性对照组(P组)和负重爬梯组(R组)。S组切除卵巢周围的脂肪组织,其他组进行卵巢摘除术。P组给予戊酸雌二醇灌胃,R组实施负重爬梯训练,为期9周。实验结束后对各组骨密度、骨代谢指标、骨力学性能以及Hedgehog-Gli信号通路因子进行检测。结果:与S组相比,M组骨密度下降(P<0.01);血清ALP3、RANKL水平升高(P<0.01),OC、OPG水平下降(P<0.01);骨最大载荷、弹性载荷和破坏载荷能力下降(P<0.01);Shh、Ihh、Ptc、Smo、Gli表达下降(P<0.01)。与M组相比,P组、R组骨密度升高(P<0.01);血清ALP3、RANKL水平下降(P<0.01),OC、OPG水平升高(P<0.01);骨最大载荷、弹性载荷和破坏载荷能力上升(P<0.01);Shh、Ihh、Ptc、Smo、Gli表达增加(P<0.01)。与P组相比,R组血清ALP3、RANKL水平升高(P<0.05),OC、OPG水平下降(P<0.05);Shh、Ihh、Ptc、Smo、Gli表达升高(P<0.05)。结论:9周负重爬梯训练能够促进绝经后骨质疏松症大鼠骨盐的沉积、成骨细胞的分化,以及上调Shh、Ihh、Ptc、Smo、Gli的表达,从而改善骨结构,提升骨力学性能,其机制可能与激活Hedgehog-Gli信号通路有关。

急性髓细胞白血病中hedgehog-Gli信号通路与阿糖胞苷耐药的研究进展

耐药与复发为当前急性髓细胞白血病（AML）治疗的瓶颈，克服AML细胞耐药为提高AML疗效、达到治愈目的的关键。阿糖胞苷（eytarabine）作为AML治疗中不可或缺的重要化疗药物，其耐药越来越受到相关研究的重视。近来，多项研究证实异常激活的hedgehog（Hh）-胶质瘤相关癌基因（Gli）信号通路在阿糖胞苷耐药中发挥重要作用，且Gli基因过表达为AML不良预后标志。Hh-Gli信号通路抑制剂，尤其是Gli特异性小分子抑制剂GANT61可抑制AML细胞生长并促进其凋亡。笔者拟就AML中Hh—Gli信号通路与阿糖胞苷耐药关系进行综述。

冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制

目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大载荷和最大位移;双能X线骨密度扫描仪检测股骨骨密度;HE-阿尔新蓝染色检测骨痂组织病理变化;Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Shh、Gli1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,骨折线清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组和戊酸雌二醇组骨小梁排列较密集,骨折线模糊不清,血清中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+环巴胺组骨小梁结构疏松,骨折线较清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活声波刺猬(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路促进骨质疏松大鼠骨折愈合。

姜黄素对人早幼粒白血病细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的研究姜黄素对人早幼粒白血病细胞HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将HL-60细胞设立实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组分姜黄素(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L)单独亚组和姜黄素(0、5.0、10.0、20.0μmol/L+30μmol/L GANT61)联合亚组,于作用24、48 h时观察。采用CCK-8法检测HL-60细胞增殖,计算细胞增殖抑制率;并评价体外联合应用药物对细胞毒性作用是否有协同作用;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡率。结果姜黄素单独亚组和姜黄素联合亚组在24、48 h对HL-60细胞的抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养至24、48 h时,5.0、10.0、20.0μmol/L姜黄素联合亚组分别与5.0、10.0、20.0μmol/L单独亚组对HL-60增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养至24、48 h时,10.0、20.0μmol/L姜黄素联合亚组与0μmol/L姜黄素联合亚组对HL-60增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。培养至24 h时,5.0μmol/L姜黄素与30μmol/L GANT61对HL-60细胞的增殖抑制率呈拮抗作用,培养至48 h时,呈单纯相加作用;24、48 h时,10.0、20.0μmol/L姜黄素与30μmol/L GANT61联合用药对HL-60细胞的增殖抑制率均呈增强作用。培养至24、48 h时,姜黄素、GANT61和姜黄素+GANT61对HL-60细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中,培养至24 h时,10.0、20.0μmol/L姜黄素联合用药分别与10.0、20.0μmol/L姜黄素单独用药对HL-60细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养至48 h时,5.0、10.0、20.0μmol/L姜黄素联合用药分别与5.0、10.0、20.0μmol/L姜黄素单独用药对HL-60细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);5.0、10.0、20.0μmol/L姜黄素联合用药与GANT61单独用药对HL-60细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素和GANT61联合用药对HL-60细胞增殖具有协同抑制作用,显著促进HL-60细胞凋亡,而且与浓度和时间有关,姜黄素可能通过抑制Hedgehog信号通路而起作用。

Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。

骨髓基质细胞调控Hedgehog/GLI信号通路抑制HL-60细胞凋亡的研究

背景与目的:骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)是造血微环境的核心组成成分。骨髓造血微环境中的BMSC能调节急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)的增殖、存活及耐药。因此,除了直接针对AML的治疗外,阻断白血病与BMSC的相互作用将为白血病的治疗提供新的策略。Hedgehog(Hh)蛋白属于分泌蛋白家族,广泛表达于哺乳动物和非哺乳动物等多个物种中,参与调控多种肿瘤的形成、器官成熟、血管生成、干细胞分化、免疫细胞及胚胎发育。Hh信号可以通过调节肿瘤细胞增殖、分化及免疫来创造适合肿瘤生存的微环境,进而为肿瘤发展和转移创造环境。然而,骨髓造血微环境能否通过Hh信号影响HL-60细胞的存活仍不清楚。该研究旨在探究BMSC诱导的Hh信号对HL-60细胞存活的影响。方法:应用CCK-8试剂盒检测不同实验组间HL-60细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测各组HL-60细胞凋亡率,半定量反转录聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,SQRT-PCR)等方法检测各实验组Hh信号通路组成成分GLI1基因及凋亡基因BCL-2、BCL-XL的表达情况,免疫荧光法检测GLI1蛋白的表达状况。结果:BMSC对HL-60细胞具有促进增殖和抑制凋亡的作用,以GLI为靶点的Hh信号通路抑制剂GANT6110μmol/L可以逆转BMSC的这些作用。共培养体系中HL-60细胞GLI1蛋白及m RNA表达上调,抑凋亡基因BCL-2和BCL-XL的m RNA表达上调。结论:BMSC对AML细胞具有保护作用,其机制可能是BMSC激活AML细胞中的Hh信号通路进而上调下游靶基因BCL-2和BCL-XL的表达。