红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响

目的观察红芪多糖对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及调控基因硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD-1)表达的影响,探讨其对NAFLD的干预效应。方法受试动物按随机数字表法分为空白组和实验组,实验组采用高脂饲料喂养8周造模,随机分为模型组、阳性对照组、红芪多糖组,药物干预8周后分别检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量,采用半定量PCR检测肝脏SCD-1基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠血清ALT、AST和LDL-c、TC、TG升高(P<0.05,P<0.01),HDL-c降低(P<0.01);SCD-1基因表达降低(P<0.01);与模型组比较,红芪多糖组血清ALT、AST降低(P<0.01),LDL-c、TC、TG降低(P<0.05,P<0.01),HDL-c升高(P<0.01);肝组织SCD-1基因表达升高(P<0.01)。结论红芪多糖具有调节NAFLD大鼠脂代谢紊乱和促进调控基因SCD-1表达的作用。

红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂的影响

目的:观察红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂、血糖的影响,以进一步评价红芪多糖对2型糖尿病糖脂代谢紊乱的调节作用。方法:将40只12周龄雄性SPF级BKS背景肥胖型2型糖尿病db/db小鼠随机分为红芪多糖(HPS)高剂量组、HPS中剂量组、HPS低剂量和模型对照组,每组10只;另外10只同品系非糖尿病db小鼠为正常对照组。分别给予红芪多糖及生理盐水灌胃治疗8周后观察各组小鼠的血脂情况。结果:红芪多糖高、中剂量组能明显改善db/db小鼠血脂水平(P<0.01),而红芪多糖低剂量组与模型组比较未见明显差异(P>0.05);在实验过程中,除正常对照组外,其余各组血糖均不同程度上升,治疗8周时,HPS高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:红芪多糖对12周龄的db小鼠血脂、血糖有一定的调节作用,对研究血脂与2型糖尿病、肥胖、脂肪肝的关系及治疗有一定意义。

红芪多糖对改善2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察红芪多糖(HPS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗的治疗作用。方法采用高热量饲料加低剂量注射链脲佐菌素(STZ)造模,分别予二甲双胍及HPS进行干预,测定干预后血糖(FPG)、血清胰岛素(Ins)、C肽(CP)、游离脂肪酸(FFA)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果HPS可降低高热量饲料加STZ所致T2DM大鼠FPG,增加ISI,降低Ins及CP分泌,抑制FFA的产生。结论HPS可通过多途径多环节减轻糖尿病模型大鼠的胰岛素抵抗。

红芪多糖3的荧光标记及其组织分布研究

目的对红芪多糖3(HPS-3)进行荧光标记,并研究其在小鼠组织中的分布特征。方法以异硫氰酸酯FITC为探针,对HPS-3进行标记;采用荧光分光光度法测定荧光标记的红芪多糖(HPS-3-FITC)在小鼠各组织中的质量浓度,并以FITC为阴性对照,探讨HPS-3-FITC在小鼠体内的组织分布特征。结果实现FITC对HPS-3的荧光标记,其取代度为1.71%;小鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、肠和脑的药时曲线下面积(AUC)分别为31.51,291.81,23.67,103.65,326.14,21.89,23.53和0.36μg·mL^(-1)·h。结论成功实现了HPS-3的荧光标记,绝大多数药物聚集在肾和肝,有明显肾肝靶向性。

红芪多糖3作用小鼠胸腺组织蛋白双向电泳技术的建立

目的建立和优化红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg.d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较。结果去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此去脂蛋白纯化法所得蛋白的双向电泳图谱显示更好的溶解性和重复性,此外在双向凝胶电泳(2-DE)时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化,使横向和纵向拖尾有明显改善,成功建立了背景清晰,蛋白分离良好、分辨率较高的胸腺组织蛋白的双向电泳体系。去脂蛋白纯化法同样适用于A549细胞蛋白提取纯化。结论建立了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白质组提取纯化的方法,采用去脂蛋白纯化法可以更有效地提取胸腺组织蛋白。利用优化后的实验方法,获得了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白2-DE图谱,为后续研究打下基础。

红芪多糖对db/db小鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨红芪多糖(HPS)对db/db小鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 50只db/db小鼠随机分为糖尿病模型组,依那普利组,HPS200m酽略组、100mg/k【g组、50mg/kg组,每组10只。同品系非糖尿病db/m小鼠10只为正常对照组。HPS各剂量组分别给予HPS 200,100,50 mg/kg,1次/d;依那普利10 mg/kg,1次/d;糖尿病模型组和正常对照组给予等剂量生理盐水,1次/d。灌胃给药8周,观察一般情况。采用实时定量荧光聚合酶链反应检测视网膜VEGF mRNA的相对表达量,免疫组织化学法观察小鼠视网膜VEGF蛋白的表达水平。结果正常对照组小鼠视网膜VEGF免疫阳性反应主要见于神经节细胞层及内丛状层,内核层少有表达。HPS各剂量组、依那普利组和糖尿病模型组小鼠视网膜VEGF表达阳性反应增强,视网膜各层细胞的胞质中均可见棕色的阳性颗粒,阳性反应部位主要位于神经节细胞层、内核层及内外丛状层。与正常对照组小鼠比较,糖尿病模型组小鼠视网膜VEGF蛋白表达和VEGF mRNA相对表达量均升高(P<0.01)。经HPS干预后,FIPS各剂量组VEGF蛋白表达和VEGFmRNA相对表达量均低于糖尿病模型组(尸<0.01)。结论 HPS可有效抑制db/db小鼠视网膜VEGF基因表达和蛋白合成,这可能是其治疗糖尿病视网膜病变的机制之一。

红芪多糖对急性心肌梗死大鼠心肌氧化损伤及ERK/Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨红芪多糖对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌氧化损伤及细胞外信号调节激酶/核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(ERK/Nrf2/HO-1)通路的影响。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,根据随机数字表法将72只雄性大鼠随机分为假手术组(只开胸不结扎)、模型组、阳性对照组(12 mg/kg倍他乐克)、低、中、高剂量[50、100、200 mg/(kg·d)]红芪多糖组,每组12只,连续给药31 d。给药结束后,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)水平,酶联免疫法检测心肌组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSP-Px)活性,Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、谷胱甘肽半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清CK-MB、c Tn I和c Tn T水平均显著升高(均P <0. 05),心肌组织MDA含量显著升高(P <0. 05),SOD和GSP-Px活力显著降低(均P <0. 05),p-ERK、Nrf2、HO-1、GCLC蛋白表达显著降低(均P <0. 05)。与模型组相比,中、高剂量红芪多糖组大鼠血清CK-MB、c Tn I和c Tn T水平均显著降低(均P <0. 05),心肌组织MDA含量显著降低(P <0. 05),SOD和GSP-Px活力显著升高(均P <0. 05),p-ERK、Nrf2、HO-1、GCLC蛋白表达显著升高(均P <0. 05)。结论:红芪多糖可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1信号传导通路改善AMI大鼠心肌氧化损伤。

红芪多糖对实验性糖尿病胰岛素抵抗大鼠脑组织SOD和MDA的影响

目的探讨红芪多糖(Hedysarum Polybotys Saccharide,HPS)对实验性糖尿病胰岛素抵抗大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的影响。方法从60只大鼠中随机抽取8只作为正常对照组,剩余52只大鼠用高脂高糖饲料和注射小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、HPS低剂量组、HPS高剂量组,并分别以生理盐水,二甲双胍,HPS大、小剂量灌胃治疗4周。检测各组大鼠空腹血糖(Fast plaskma glucose,FPG),血清胰岛素(Insulin,INS),胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI),血脂及脑组织SOD,MDA。结果 HPS可显著降低空腹血糖、血脂、INS及MDA含量,升高ISI及SOD活性(P<0.05或P<0.01),且高剂量作用优于低剂量,存在显著的量—效关系。结论 HPS可显著改善糖尿病胰岛素抵抗大鼠脑组织SOD和MDA及其相关指标,HPS的影响是多方面的,但最终通过改善胰岛素抵抗达到治疗目的 。

红芪多糖对实验性T2DM大鼠胰岛素抵抗和C肽分泌作用的研究

目的:探讨中药制剂红芪多糖(Hedysarum Polybotys saccharide,HPS)在对实验性2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗和C肽(C-Peptide,CP)分泌作用的影响。方法:采用高热量饲料加小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模,分别予二甲双胍及红芪多糖进行干预,观察用药前后体质量变化及计算Lee’s指数,测定干预后胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素抵抗指数(IRI)、空腹血糖(FPG)和CP水平。结果:HPS可降低T2DM大鼠体重、Lee’s指数、IRI、血糖及CP水平,增加ISI。结论:红芪多糖可明显降低血糖,有效控制体重,改善胰岛素抵抗。

红芪多糖对糖尿病大鼠早期视网膜中核转录因子-κB影响随机平行对照研究

[目的]观测红芪多糖对糖尿病大鼠早期视网膜中核转录因子-κB影响。[方法]使用随机平行对照方法,60只大鼠喂养1周,称重后随机数字表法分为6组,空白对照组、模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪多糖低剂量组,10只/组。适应喂养1周后,造模大鼠均喂以高糖高脂饲料,第2周所有动物禁食不禁水12h以上,以剂量(30mg/Kg)链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),溶于0.1mol/L柠檬酸缓冲液,p H4.4,制成浓度为1%溶液,左侧下腹部注射,连续注射3d,72h后尾静脉取血测血糖(BG),BG≥16.7mmol/L为糖尿病模型诱导成功;高糖高脂饮食继续喂养。模型组:生理盐水,1次/d;羟苯磺酸钙组:多贝斯,90mg/kg,1次/d;红芪多糖高、中、低剂量组:分别灌胃红芪多糖150mg/kg、100mg/kg及50mg/kg,均1次/d。观测视网膜切片NF-κB免疫组化染色灰密度定量、体重、血糖。[结果]初始血糖、干预后血糖、灰度值模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高、中、低剂量组均大于空白对照组(P<0.05,P<0.01);初始血糖灰度值模型组、羟苯磺酸钙组、红芪多糖高、中、低剂量组与模型组无明显差异(P>0.05);干预后血糖羟苯磺酸钙组、红芪多糖低组与模型组无明显差异(P>0.05),红芪多糖低组与羟苯磺酸钙组无明显差异(P>0.05);灰度值红芪多糖高组与羟苯磺酸钙组无明显差异(P>0.05)。光学显微镜下观察发现,NF-κB在正常组主要表达于视网膜神经节细胞、血管内皮细胞的细胞质,表达较弱。在给药5周后,模型组大鼠视网膜上NF-κB的表达较正常组明显增加,细胞核着染成深棕黄色,在内核层和外核层呈微弱阳性表达。红芪多糖高、中、低剂量组与西药组均较模型组明显降低NF-κB蛋白的表达。[结论]红芪多糖可降低糖尿病大鼠早期视网膜NF-κB表达。

红芪多糖和硒化红芪多糖对口腔癌细胞作用的体外实验研究

目的研究红芪多糖(sedysarum polybotys saccharides,HPS)和硒化红芪多糖(selenizated hedysarum polybotyssaccharides,SE HPS)对口腔癌细胞SCC25的影响。方法取对数生长期的口腔癌细胞系SCC25,分别加入不同浓度(0、10、25、50、100、200、400μg/mL)的HPS和SE HPS,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT qPCR及Westernbloting观察细胞凋亡相关的指标。结果各浓度HPS和SE HPS均可抑制SCC25增殖,50μg/mLHPS和SE HPS抑制SCC25增殖的效果最强,并呈现时间依赖性,48h内抑制增殖效果明显,48h后效果达到平台期;SE HPS抑制SCC25细胞增殖的效果强于HPS(P<0.05)。流式细胞术结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡率分别为25.8%、30.8%,与对照组(0μg/mLHPS和SE HPS)相比差异有统计学意义(P<0.05);RT qPCR及Westernbloting结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡基因Fas/Fasl的mRNA与蛋白表达均上调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPS和SE HPS均可以抑制口腔癌细胞SCC25的增殖,SE HPS效果优于HPS,可能通过Fas/Fasl途径发挥诱导凋亡作用。

红芪临床应用研究新进展

红芪为甘肃的大宗药材,主要含有红芪多糖、黄酮、苯丙素、三萜及甾体类化合物、微量元素、生物碱、有机酸等化学成分。在临床上应用广泛,其药理研究主要集中在糖尿病及其并发症、肿瘤、衰老、肺纤维化、肝损伤、骨质疏松、炎症(肠炎、葡萄膜炎、骨关节炎)、阿尔茨海默病等病证的防治。通过文献检索,梳理和总结了近几年国内外红芪药理作用及临床应用研究,体现其在临床应用优势和开发前景。

红芪多糖HG-2含量及联合透明质酸水凝胶的参数测定

目的制备红芪多糖HG-2及建立红芪多糖HG-2的含量测定方法,并联合透明质酸水凝胶测定凝胶时间、释药量、降解及溶胀率等参数。方法采用SephadexG-25纯化制备红芪多糖HG-2,苯酚-硫酸法测定含量,并用化学改性法制备透明质酸(HA)水凝胶,将二者联合制备红芪多糖HG-2HA水凝胶。结果红芪多糖HG-2的含量为95.97%,HA水凝胶的凝胶时间为(180±20)s;溶胀率为42.33%;并在第5天基本降解。红芪多糖HG-2HA水凝胶释药在第120h已趋于平稳,释药量为86.15%。结论选用葡萄糖作为对照品测定红芪多糖HG-2含量的方法简便、准确。红芪多糖HG-2HA水凝胶能够起到缓释作用,二者联用具有可行性,可以为后续动物实验提供理论依据。

红芪多糖对db/db小鼠肾组织血管内皮生长因子、色素上皮细胞衍生因子表达的影响

目的探讨红芪多糖(HPS)对糖尿病肾病(DN)db/db小鼠肾脏的保护机制。方法以12周龄雄性db/m小鼠10只作为正常组,同周龄雄性db/db小鼠50只随机分为HPS高、中、低剂量组和依那普利组、模型组,每组10只。HPS高、中、低剂量组分别给予HPS 400、200和100mg/(kg·d)灌胃;依那普利组给予依那普利10mg/(kg·d)灌胃;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃;各组均连续灌胃8周。采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织血管内皮生长因子(VEGF)与色素上皮细胞衍生因子(PEDF)蛋白表达;RT-PCR法检测各组小鼠肾组织VEGF与PEDF mRNA表达。结果模型组较正常组VEGF mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01),PEDF mRNA及蛋白表达均下调(P<0.01);与模型组比较,除HPS低剂量组外(P>0.05),其余各给药组VEGF mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05或P<0.01),PEDF mRNA及蛋白表达均上升(P<0.05或P<0.01)。结论 HPS可通是过调节db/db小鼠肾组织中VEGF、PEDF蛋白和mRNA的表达,从而起到保护DN小鼠肾脏的作用。

红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织氧化应激的影响

目的:研究红芪多糖(HPS)对调控db/db小鼠糖尿病心肌病(DCM)心肌组织中抗氧化基因表达的影响。方法:60只db/db小鼠随机平均分为5组:对照组,模型组,红芪多糖(HPS)高、中、低剂量组;正常组为12只同周龄同背景的雄性db/m小鼠。连续灌胃干预8周。检测血脂及心肌组织中丙二醛(MDA)含量;蛋白印记法和反转录聚合酶链式反应法检测小鼠心肌组织Nrf2以及其下游血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽还原酶(GR)、氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)mRNA和蛋白的表达。结果:药物治疗8周后,与模型组比较,各给药组的MDA含量均显著下降(P<0.01,P<0.05);HPS高、中剂量组及对照组Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.01),各给药组GCLC、GR蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);HPS高、中剂量组及对照组Nrf2、GCLCmRNA表达显著升高(P<0.01),各给药组HO-1、GRmRNA表达均显著升高(P<0.01)。结论:HPS可能通过增加Nrf2的表达影响抗氧化酶类的表达,从而调控氧化应激改善db/db小鼠DCM心肌损伤。