野艾蒿挥发油诱导HeLa细胞凋亡与坏死

目的:研究野艾蒿挥发油对HeLa细胞凋亡与坏死的影响。方法:MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态与结构的变化,DNA Ladder、流式细胞仪检测细胞凋亡,彗星电泳检测DNA损伤,Western blot检测Caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达。结果:MTT法检测结果显示野艾蒿挥发油对HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖性。野艾蒿挥发油处理HeLa细胞24 h后,100、200μg/mL实验组细胞体积缩小,核固缩,染色质凝集、片段化,表现为典型的凋亡特征;400μg/mL实验组细胞膜破裂、内含物外泄,表明细胞已坏死。此外,DNA Ladder结果显示,各实验组均有梯状条带;流式细胞仪检测结果也显示,各实验组均有凋亡峰。野艾蒿挥发油处理HeLa细胞6 h后,100μg/mL实验组彗星电泳中出现彗尾。Western-blotting结果显示,野艾蒿挥发油能够诱导HeLa细胞中Caspase-3蛋白表达量降低,同时PARP发生剪切、失活。结论:野艾蒿挥发油具有抑制HeLa细胞增殖的作用。低浓度野艾蒿挥发油诱导细胞凋亡,高浓度野艾蒿挥发油引起细胞坏死,其凋亡机制是依赖Caspase-3介导的PARP凋亡信号转导途径。

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

背景与目的:Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1(inhibitor-1 of protein phosphataseⅠ,PPI1)依赖于35位苏氨酸的磷酸化而发挥抑制作用。本研究目的在于观察PPI1野生型和持续活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株的凋亡及凋亡刺激敏感性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:通过Lipofectamine介导,用PPI1野生型和持续活化型突变体表达质粒分别转染HeLa细胞,以未转染的及转染空载体的HeLa细胞为对照组,用RT-PCR和Western blot鉴定目的蛋白的表达;通过克隆形成实验观察PPI1对细胞克隆形成能力的影响,用Hoechst33258荧光染色、亚二倍体分析法分析PPI1对HeLa细胞凋亡的影响,用流式细胞术分析转染PPI1后的HeLa细胞对肿瘤坏死因子(tumor-necrosis factor,TNF)凋亡刺激的敏感性,用Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及MAPK信号转导通路的影响。结果:PPI1野生型和持续活化型突变体在HeLa细胞中能够有效表达。荧光染色和亚二倍体分析均表明PPI1持续活化型突变体的表达使细胞凋亡增多,并能明显抑制HeLa细胞的克隆形成能力。Western blot分析表明,PPI1持续活化型突变体可使促凋亡分子P53、P27、BAK表达上调,而抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xL的表达下调。流式细胞术分析表明PPI1持续活化型突变体表达的HeLa细胞在TNF-α刺激后细胞凋亡率为19.06%,而对照组为2.67%和1.89%。Westernblot分析表明,TNF刺激后,在JNK信号转导通路中,该组细胞JNK的磷酸化程度比对照组明显增强,而且持续的时间也较长;对于p38信号转导通路,则在TNF刺激30min后,p38出现磷酸化,而其他组均无。结论:PPI1持续活化型突变体的表达可诱导宫颈癌细胞株的凋亡,并能明显增强HeLa细胞对TNF凋亡刺激的敏感性,其中涉及到JNK、p38信号转导通路的活化增强。

蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞抑制作用的形态学观察

目的研究蛴螬粗提物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株抑制作用引起的形态学改变。方法应用MTT法、HE染色、油红O染色、透射电镜的方法检测蛴螬粗提取物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞抑制作用的影响及观察细胞的形态学改变。结果蛴螬3种粗提取物中以石油醚粗提物增殖抑制率最高。蛴螬石油醚粗提物对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01),同时呈时间依赖性(P<0.01)。倒置显微镜下蛴螬石油醚粗提物50μg/m l作用后早期细胞出现凋亡形态学变化;作用晚期细胞发生膜破裂坏死。HE染色和透射电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化。油红O染色和透射电镜观察到细胞发生脂肪变性。结论蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬3种粗提物中以石油醚粗提物抑制增殖作用效果最佳。蛴螬石油醚粗提物对Hela细胞抑制增殖作用在粗提物50μg/m l作用48 h之前主要以诱导凋亡为主,在其后时间以诱发肿瘤细胞脂肪变性和坏死为主。

细胞同步化对肿瘤坏死因子诱导Hela细胞凋亡的影响

目的 研究细胞周期时相对肿瘤坏死因子 (TNF)诱导Hela细胞凋亡的影响。方法 应用胸腺嘧啶核苷 (TdR )双阻断法将培养的Hela细胞同步化 ,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色 ,分析同步化的Hela细胞和正常培养的Hela细胞对TNF(加放线菌酮增效 )诱导凋亡的敏感性。结果 同步化Hela细胞较正常培养的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性增强。

银杏叶提取物EGb761通过caspase-3抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡

目的探讨caspase-3的活化在银杏叶提取物EGb761对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡中的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot检测caspase-3p20活性片段,Caspase-3ColorimetricAssay试剂盒测定caspase-3活性。结果流式细胞术分析结果显示,EGb761在10-40mg/L终浓度范围内对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;Westernblot检测显示,rhTNF-α诱导的HeLa细胞caspase-3p20活性片段水平增高,能被不同剂量EGb761(10-40mg/L)明显抑制,且随EGb761浓度增加抑制效果增强;caspase-3活性测定结果显示,EGb761对rhTNF-α诱导的caspase-3活化有显著的抑制作用,且随剂量增加抑制作用增强。结论结果提示,EGb761抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-3活化有关。

原花青素对肿瘤坏死因子-α诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响

目的研究原花青素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测试剂盒测定caspase-8活性,Westernblot检测caspase-8酶原表达水平。结果原花青素(5、10、20mg/L)对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,100μg/L)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对rhTNF-α(100μg/L)诱导的HeLa细胞caspase-8活化均有显著抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对HeLa细胞caspase-8酶原表达无明显影响。结论原花青素抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-8活化有关。

银杏叶提取物EGb761对TNF-α诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的 初步研究银杏叶提取物EGb761对重组人肿瘤坏死因子- α(rhTNF- α)诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法观察EGb761对HeLa细胞生长的影响;细胞凋亡实验分5组,即空白对照组,rhTNF -α对照组(10 0 μg/L ) ,EGb761低浓度组[rhTNF- α(10 0 μg/L) +EGb761(10mg/L) ] ,EGb761中浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L ) +EGb761(2 0mg/L ) ] ,EGb761高浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L) +EGb761(4 0mg/L) ] ,采用流式细胞术和Hoechst3 3 2 5 8荧光染色检测凋亡。结果 EGb761在5 .0～80 .0mg/L终浓度范围内对HeLa细胞生长无明显影响;流式细胞术测定各组亚倍体细胞峰积分百分率(% )为:空白对照组(5 .3 5±2 .2 ) ,rhTNF- α对照组(3 7.8±6.1) ,EGb761低浓度组(19.2±3 .4) ,EGb761中浓度组(16.5±5 .7)和EGb761高浓度组(11.3±3 .9) ;荧光染色检测各组凋亡百分率(% ) :对照组(4 .2 3±2 .0 )、rhTNF α对照组(2 7.8±4.3 )、EGb761低浓度组(14 .9±3 .4)、EGb761中浓度组(12 .1±3 .7)和EGb761高浓度组(9.61±2 .3 ) ;结果显示,EGb761在10～40mg/L终浓度范围内对rhTNF α诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系。结论 EGb761能有效抑制rhTNF- α诱导的HeLa细胞凋亡。

银杏叶提取物对rhTNF-α诱导HeLa细胞凋亡和Caspase-8活性的影响

目的研究银杏叶提取物EGb761对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡和Caspase-8活性的影响.方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-8荧光检测试剂盒测定Caspase-8活性.结果EGb761在10～40 mg/L终浓度范围内对rhTNF-α诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P＜0.01),呈剂量依赖关系;EGb761在10～40 mg/L终浓度范围内对rhTNF-α诱导的HeLa细胞Caspase-8活化均有显著的抑制作用(P＜0.01),呈剂量依赖关系.结论结果提示,EGb761抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡可能与其抑制Caspase-8活化有关.

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞。

细胞周期对肿瘤坏死因子诱导Hela细胞凋亡的影响

目的 研究细胞周期对肿瘤坏死因子 ( TNF)诱导 Hela细胞凋亡的影响。方法 通过胸腺嘧啶核苷酸 ( Td R)阻断法阻滞 Hela细胞的细胞周期 ,以 MTT法、流式细胞术和荧光染色分析 Td R阻滞细胞和周期化的 Hela细胞对 TNF诱导凋亡的敏感性。结果 Td R阻滞细胞周期较周期化的 Hela细胞对 TNF诱导的凋亡的敏感性降低。结论 揭示 TNF诱导

佛手叶挥发油诱导HeLa细胞凋亡与坏死

研究了佛手叶挥发油对He La细胞凋亡与坏死的影响.用单细胞凝胶电泳、DNA梯度电泳检测DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期和DNA含量的变化,Western Blot检测凋亡相关蛋白PARP的表达.结果显示:200μg/m L佛手叶挥发油处理He La细胞,彗星头缩小,荧光强度减弱且染色不均匀,出现彗尾,G2/M期细胞数量增加,PARP蛋白几乎全部被切割;400μg/m L佛手叶挥发油处理He La细胞,DNA梯度条带明显,表明大多数细胞处于晚期凋亡阶段;800μg/m L佛手叶挥发油处理He La细胞,无大分子条带,DNA完全断裂.表明200μg/m L和400μg/m L佛手叶挥发油可诱导He La细胞凋亡,800μg/m L佛手叶挥发油诱导He La细胞坏死.

3-溴丙酮酸对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的:研究3-溴丙酮酸(3-BrPA)对宫颈癌HeLa细胞生长及增殖的影响。方法:HeLa细胞经不同浓度3-BrPA作用后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测HeLa细胞的增殖情况,倒置显微镜及荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期分布及坏死或凋亡情况。结果:经3-BrPA作用一段时间后:MTT检测发现在一定浓度范围内(50-200)μmol/L对HeLa细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,与对照组比较,各浓度组差异均有统计学意义(P<0.01)。倒置显微镜下可见HeLa细胞生长稀疏,细胞透亮度下降,细胞皱缩、破碎。Hoechst染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡核固缩表现。细胞周期分析结果表明,可诱导HeLa细胞G2/M期阻滞(P<0.01)。流式细胞仪及荧光显微镜观察表明3-BrPA可诱导细胞坏死和凋亡(P<0.01)。结论:3-BrPA对宫颈癌细胞增殖有显著抑制作用。

TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响

目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶（TACE）的小发夹结构RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和测序等方法进行鉴定。转染HeLa细胞后,用Realtime PCR的方法检测其对HeLa细胞TACE基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的sTNF-α,间接反映干扰TACE的效果;用MTT法检测细胞增殖活性;用DNA ladder和流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建和筛选出了针对TACE基因的3个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了HeLa细胞TACE基因的表达。ELISA检测结果与Realtime PCR实验结果相符。同时发现干扰TACE基因后,HeLa细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05）。实验组转染shRNA1~3后72h可见特征性的基因组DNA ladder条带。结论所构建的TACEshR-NA真核表达载体能显著抑制TACE的表达。干扰TACE基因的表达可有效抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。

硫芥诱导Hela细胞发生凋亡及坏死(英文)

目的:研究硫芥诱导Hela细胞凋亡的作用,方法:生长在DMEM培养基中的Hela细胞与不同浓度的硫芥作用3小时,凋亡用电镜,电泳及流式术检测.结果:低浓度硫芥(I μmol·L^(-1))抑制细胞生长;较高浓度(1-100 μmol·L^(-1))使细胞主要在G_1期阻滞,发生典型的凋亡形态改变,提取细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,出现“DNA Ladder”.流式术观察表明硫芥处理3小时后,细胞撤药培养12小时,凋亡率达33％,S期的细胞最敏感,硫芥1000 μmol-L^(-1)使Hela细胞发生明显的坏死,结论:硫芥诱导Hela细胞发生两种不同的损伤:坏死及凋亡,硫芥的细胞毒有浓度依赖性。

阿司匹林联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导因子诱导剂对宫颈癌HeLa细胞功能的影响

目的探讨阿司匹林(ASP)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导因子诱导剂(TIC10)对宫颈癌HeLa细胞功能的影响及机制。方法将人宫颈癌HeLa细胞随机分为空白组、对照A组、对照B组和实验组。空白组给予含0.1 mmol·L^-1 0.9%NaCl的DMEM培养基;对照A组给予含0.1 mmol·L^-1阿司匹林的DMEM培养基;对照B组给予含0.1 mmol·L^-1 TIC10的DMEM培养基;实验组给予含0.1 mmol·L^-1阿司匹林联合0.1 mmol·L^-1 TIC10的DMEM培养基。用噻唑蓝法检测细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,用细胞划痕实验检测细胞的迁移情况,用免疫印迹实验检测Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果干预72 h后,实验组、对照A组和对照B组和空白对照组的增殖率(光密度值)分别为(0.49±0.10),(0.63±0.10),(0.62±0.10)和(0.92±0.10),细胞凋亡率分别为(30.11±4.22)%,(18.84±2.16)%,(19.90±3.00)%,和(5.84±1.11)%,细胞迁移率分别为(12.01±2.06)%,(25.50±4.10)%,(24.01±3.92)%和(41.21±3.02)%,Bcl-2分别为(0.20±0.09),(0.70±0.10),(0.69±0.11)和(0.79±0.10),Bax分别为(1.09±0.11),(0.89±0.11),(0.91±0.11)和(0.61±0.11),实验组的上述指标与对照A组和对照组B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ASP联合TIC10能抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和促进凋亡的能力明显加强,可能与调控Bcl-2和Bax蛋白表达有关。

阿司匹林联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导因子诱导剂通过增强自噬促进宫颈癌细胞凋亡

目的探讨阿司匹林(ASP)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导因子(TRAIL)诱导剂TIC10对子宫颈癌Siha、HeLa细胞自噬及凋亡的影响。方法选择HPV16阳性的子宫颈鳞癌细胞系Siha和HPV18阳性的子宫颈腺癌细胞系HeLa作为研究对象。分别单独及联合使用ASP及TIC10作用2种细胞系。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测ASP及TIC10作用后细胞增殖抑制率,用细胞划痕实验检测细胞迁移率,用平板克隆集落形成实验检测细胞克隆形率,用Western Blot法检测活化型半胱天冬酶3(cleaved Caspase-3)、活化型半胱天冬酶8(cleaved Caspase-8)、自噬相关微管关联蛋白(LC3A/B)和自噬基因(Beclin1)的水平。结果 MTT比色法显示,ASP作用后对Siha、HeLa细胞均有明显的增殖抑制作用,且呈浓度依赖性(均P <0. 01),ASP联合TIC10作用于Siha、HeLa细胞48 h后,其细胞增殖抑制率均明显高于单独使用TIC10 (均P <0. 01)。细胞划痕实验显示,ASP和TIC10作用24 h后,实验组对Siha,HeLa细胞的迁移率[ASP:(19. 61±1. 17)%和(23. 75±0. 78)%,TIC10:(16. 89±1. 47)%和(20. 59±2. 01)%]均明显小于对照组[(41. 18±2. 01)%和40. 83±3. 77)%],差异均有统计学意义(均P <0. 01)。平板克隆形成实验显示,ASP和TIC10作用2周后,实验组对Siha,HeLa细胞的克隆形成率[ASP:(24. 93±2. 12)%和(26. 47±3. 30)%,TIC10:(17. 33±1. 50)%和(19. 13±4. 99)%]均明显小于对照组[(69. 60±3. 54)%和(68. 40±4. 20)%],差异均有统计学意义(均P <0. 01)。Western blot法检测显示,促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8表达上调,细胞自噬相关蛋白LC3A/B、Beclin1表达显著上调(均P <0. 01)。结论 ASP可通过自噬增强TRAIL诱导剂TIC10对宫颈癌细胞的凋亡。