姜黄素通过抑制乙酰转移酶P300表达促进HeLa细胞凋亡

目的:探讨姜黄素(Cur)通过下调HeLa细胞腺病毒E1A相关300 kD蛋白(P300)调控HeLa细胞的活力及凋亡。方法:将对数生长期的HeLa细胞分别采用20、40、60和80μmol/L Cur处理,并以未处理组细胞作为对照,用CCK-8法检测细胞活力;选取20和40μmol/L Cur处理细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR、Western blot法检测E6基因的mRNA和蛋白表达及凋亡相关蛋白、P300和组蛋白的表达;构建沉默质粒shE6和阴性对照质粒shNC转染HeLa细胞,设置shNC,shNC+Cur(40μmol/L),shE6以及shE6+Cur(40μmol/L)四组,以CCK-8、流式细胞术以及Western blot法分别检测细胞活力、凋亡以及凋亡相关蛋白的表达;构建沉默质粒siP300和阴性对照质粒siNC转染HeLa细胞,RT-PCR、Western blot法分别检测P300的mRNA和蛋白表达、E6的蛋白表达。结果:与未处理组相比,用不同浓度Cur处理HeLa细胞后能显著抑制其活力并可使早期凋亡率增高(P<0.05);Cur处理HeLa细胞后,E6的mRNA及蛋白表达均下调,而敲减E6与未敲减E6的Cur处理组相比,敲减组的早期凋亡率以及促凋亡相关蛋白表达均低于未敲减组(P<0.05);敲减P300后,HeLa细胞中E6蛋白表达降低;而单以Cur处理HeLa细胞后,P300及相关组蛋白表达均下调(P<0.01)。结论:Cur抑制HPV18阳性宫颈癌细胞的活力并促进其凋亡,机制可能与其下调P300而抑制E6蛋白乙酰化有关。

扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

中药砒霜上调E-钙黏蛋白抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移机制研究

目的:研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷(As_(2)O_(3))抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机制,观察As_(2)O_(3)对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1抑制剂伏立诺他(SAHA)的协同作用。方法:以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况。结果:随着各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞活性均低于空白对照组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的细胞数量少于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的细胞数量少于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的Hela细胞迁移百分比低于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。结论:As_(2)O_(3)抑制Hela细胞的最佳浓度为8μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4μmol/L。As_(2)O_(3)可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生长、侵袭、迁移。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响

探讨MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响。方法 将宫颈癌Hela细胞进行培养;扩增MACC1基因;检测MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9、caspase-3基因表达水平、凋亡特异核酸酶水平、Hela细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭水平以及Hela细胞的周期(G1期、S期、G2期)。结果 siRNA;MACC1组的MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9基因表达水平低于siRNA;NC组;caspase-3基因表达水平高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中凋亡特异核酸酶水平为(1.85±0.18);显著高于siRNA;NC组(1.01±0.09)(P<0.05)。siRNA;于细胞侵袭及细胞迁移数量和Hela细胞A值、等方面,相比siRNA,MACC1组更低;NC组;细胞凋亡率高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中G1期细胞比例高于siRNA;NC组;S期细胞、G2期细胞的比例低于siRNA;NC组(P<0.05)。结论 MACC1的表达能够改善宫颈癌Hela细胞的凋亡特异核酸酶水平,调控细胞周期,将Hela细胞阻滞在G1期,诱导细胞凋亡。

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

硫酸软骨素纳米硒的结构表征及其对Hela细胞迁移和侵袭的影响

对硫酸软骨素纳米硒(selenium-chondroitin sulfate nanoparticles,SeCS)的结构进行鉴定,并考察其对Hela细胞迁移和侵袭的影响。以硫酸软骨素为模板,采用亚硒酸钠-维生素C氧化还原法制备SeCS,并运用透射电镜、扫描电镜、X射线光电子能谱仪和傅立叶红外光谱仪对SeCS进行结构表征;通过划痕实验和细胞迁移侵袭实验(Transwell)检测SeCS对Hela细胞迁移及侵袭的影响;通过Western blot免疫印迹法检测SeCS对细胞内基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)表达水平的影响。实验结果表明,制备所得的SeCS是零价态的分散良好的球形纳米粒,表面光滑。Hela细胞经20μg/mL SeCS处理后,细胞的迁移率和侵袭率分别从对照组的100%下降到(59.19±7.74)%和(82.43±4.21)%,表明SeCS能够抑制细胞的迁移和侵袭。进一步的研究发现,SeCS下调了MMP-2和MMP-9蛋白的表达量,表明SeCS通过降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达来抑制细胞的迁移和侵袭。

基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路探讨健骨颗粒对UMR-106细胞内质网应激凋亡的影响

目的探讨健骨颗粒含药血清对UMR-106成骨样细胞内质网应激ERS凋亡的影响和作用机制。方法选用UMR-106成骨样细胞,采用0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05μmol/L不同浓度的GSK2606414(PERK抑制剂)对细胞进行干预,采用CCK8法筛选GSK2606414最佳干预浓度。将生长状态较好的UMR-106细胞随机分为阴性对照组(NC组)、模型组(H_(2)O_(2)组)、健骨颗粒组(H_(2)O_(2)+JG组)和阳性对照组(H_(2)O_(2)+GSK2606414组)4组。NC组和H_(2)O_(2)组采用10%生理盐水血清干预12 h,H_(2)O_(2)+JG组采用10%健骨颗粒含药血清干预12 h,H_(2)O_(2)+GSK2606414组采用0.03μmol/L的GSK2606414和10%生理盐水血清干预12 h,除NC组外,其余各组在不更换新培养基的情况下,再分别加入10μmol/L H_(2)O_(2)干预12 h。采用激光共聚焦显微镜观察细胞内NC组和H_(2)O_(2)组GRP78和Caspase-12荧光表达情况,DCFH-DA检测活性氧(ROS)含量,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子实时动态变化判断ROS/ERS模型是否成立。再采用An⁃nexin V-FITC/PI检测4组细胞晚期凋亡率,qPCR和Western blot检测4组ERS相关标志指标GRP78、PERK、eIf2α、ATF4和CHOP mRNA转录水平和蛋白相对表达量。结果与0μmol/L组比较,0.03μmol/L的GSK2606414是干预UMR-106细胞12 h后对细胞活力没有影响的最大浓度,故使用该浓度作为后续H_(2)O_(2)+GSK2606414组的实验干预条件。与NC组相比,H_(2)O_(2)组ROS含量显著增高(P<0.01),GRP78和Caspase-12的蛋白荧光表达量明显增加,细胞内钙离子流动速度加快并持续增高,表明H_(2)O_(2)诱导UMR-106细胞ROS/ERS模型的成功建立。与NC组相比,H_(2)O_(2)组凋亡率显著增高(P<0.05),GRP78、PERK、eIf2α、ATF4、CHOP mRNA转录水平和蛋白相对表达量均显著增高(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+JG组和H_(2)O_(2)+GSK2606414组ROS含量显著降低(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.05),GRP78、PERK、eIf2α、ATF4、CHOP mRNA转录水平(P<0.05)和蛋白相对表达量(P<0.01)均显著降低。结论健骨颗粒可通过PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路缓解内质网过度应激,降低成骨细胞凋亡率,发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响

目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。

基于HeLa细胞模型探究植物乳杆菌CY1-2的抗氧化机理

建立植物乳杆菌CY1-2保护偶氮二异丁脒盐酸盐(ABAP)损伤HeLa细胞模型,利用细胞增殖试验、细胞形态学观察及免疫印迹试验探究植物乳杆菌CY1-2的细胞保护机制。结果表明,当菌液浓度为108 CFU/mL的植物乳杆菌CY1-2保护细胞3 h后,再用浓度为110 mmol/L的ABAP损伤细胞3 h。在此模型条件下,植物乳杆菌CY1-2菌体及无细胞提取物均能有效提高HeLa细胞的存活能力,细胞存活率分别提高9.41%和25.71%。通过显微镜观察发现,与损伤组相比,经植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物保护的HeLa细胞大而饱满,边缘清晰且伸展性好。免疫印迹试验表明,与损伤组相比,植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物能够正向调控HeLa细胞的kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2-相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达量,分别提高了18%,47%和58%。植物乳杆菌CY1-2保护ABAP氧化损伤HeLa细胞的机制是激活细胞Keap1-Nrf2-ARE信号通路,提高其抗氧化能力。本研究结果为开发乳酸菌抗氧化剂提供一定的理论依据。

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

藻岩黄质对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨藻岩黄质对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。方法:体外培养HeLa细胞,设为给药组和空白对照组,空白对照组采用常规细胞培养,给药组加入一定浓度的藻岩黄质培养。采用MTT法检测不同浓度(0.1、0.5、1μmol/L)藻岩黄质处理HeLa细胞24 h及0.5μmol/L藻岩黄质处理HeLa细胞12、24、48 h后,HeLa细胞存活率的变化;采用Annexin V/PI流式细胞仪分别检测0.1μmol/L、0.5μmol/L藻岩黄质刺激HeLa细胞24 h及48 h后的凋亡情况;测定0.1、0.5、1μmol/L的藻岩黄质刺激HeLa细胞后培养基中ATP的生成和总氧摄取量。结果:与空白对照组相比,随着药物浓度增加,HeLa细胞生长逐渐缓慢(P<0.05);随着药物浓度和刺激时间增加,HeLa细胞凋亡率显著增加(P<0.05);随着药物刺激浓度增加,HeLa细胞ATP的产生率也显著下降(P<0.05)。结论:藻岩黄质能够抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导其凋亡。

利妥昔单抗联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的临床效果及影响因素

目的探讨利妥昔单抗联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的临床效果及影响因素。方法回顾性分析2015年1月至2020年3月南通市海门区人民医院血液科收治的62例DLBCL患者临床资料,患者均采用妥昔单抗联合CHOP方案治疗,根据治疗后的临床疗效分为缓解组与未缓解组。比较两组患者的各项临床资料,采用多因素logistic回归分析疗效的影响因素,比较两组患者的3年总生存率。结果治疗后缓解组108例,未缓解组16例。两组患者的初次化疗情况、改良AnnArbor分期、有无骨髓侵犯、有无淋巴瘤B症状、红细胞沉降率(ESR)、血清乳酸脱氢酶(LDH)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果提示,改良AnnArbor分期(β=1.667,OR=1.791,95%CI:1.376~3.151)、ESR水平(β=0.775,OR=1.259,95%CI:1.172~2.903)、有淋巴瘤B症状(β=0.389,OR=0.720,95%CI:0.307~1.094)是影响利妥昔单抗联合CHOP方案治疗DLBCL患者疗效的独立危险因素。缓解组的3年总生存率为64.58%,高于未缓解组的14.29%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床上治疗DLBCL时,对于AnnArbor分期Ⅲ~Ⅳ期、ESR偏高以及存在淋巴瘤B症状的患者,应该在利妥昔单抗联合CHOP方案上推荐更加积极的治疗方案,以进一步提高临床疗效。

槲皮素对索拉非尼耐药Hela细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin, QU)联合索拉非尼(Solafenib)对索拉非尼耐药Hela细胞的作用及其机制。方法:MTT法测定不同浓度索拉非尼(0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 15.0, 20.0 µmol/L)对细胞的增殖的影响;细胞划痕实验检测各组细胞的迁移水平;PCR实验检测各组凋亡基因Bax、Bcl-2及自噬基因LC3-B、Beclin-1的表达水平;Western-blot (WB)检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3的相对表达量。结果:随着药物浓度的增加,耐药细胞和亲本细胞的抑制率逐渐升高,且对亲本细胞的抑制率明显高于耐药细胞。联合用药组抑制耐药细胞的迁移率,并且联合用药组的Bax和LC3-B基因相对表达量降低,Bcl-2、Beclin-1基因相对表达量、Bax/Bcl-2的值以及caspase-3蛋白相对表达量升高,与空白对照组和索拉非尼组相比,联合用药组细胞凋亡显著升高。结论:槲皮素与索拉非尼联合用药是通过上调Bcl-2、Beclin-1、Bax/Bcl-2基因相对表达量、下调Bax、LC3-B基因相对表达量同时上调caspase-3蛋白相对表达量的途径,抑制耐药细胞的迁移率、促进耐药细胞凋亡、抑制细胞自噬,从而起到逆转耐索拉非尼Hela细胞耐药性的作用。

利妥昔单抗联合CHOP化疗方案治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的效果

目的 观察利妥昔单抗联合CHOP化疗方案治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的效果。方法 选取2018年1月—2023年6月泉州市第一医院收治的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者68例,按照随机数字表法分为CHOP方案组与联合治疗组,每组34例。CHOP方案组予以CHOP化疗方案治疗,联合治疗组在CHOP方案组基础上予以利妥昔单抗注射液。2组患者均以3周为1个疗程,治疗6个疗程。比较2组近期疗效,治疗前后血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、癌症患者生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)评分,不良反应。结果 联合治疗组疾病控制率高于CHOP方案组(94.12%vs.73.53%,χ^(2)=5.314,P=0.021)。治疗6个疗程后,2组血清TNF-α、PDGF-BB水平降低,且联合治疗组低于CHOP方案组(P<0.01);2组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)及联合治疗组EORTC QLQ-C30评分升高,CD8^(+)降低,且联合治疗组高/低于CHOP方案组(P<0.01)。联合治疗组不良反应总发生率低于CHOP方案组(8.82%vs.29.41%,χ^(2)=4.660,P=0.031)。结论 弥漫性大B细胞淋巴瘤患者接受利妥昔单抗联合CHOP化疗方案治疗的效果良好,可有效抑制肿瘤生长和转移,提高免疫功能和生命质量,且用药较安全。

雄黄溶液对Hela和Caski宫颈癌细胞增殖抑制作用的研究

宫颈癌是一种高发病率和高死亡率的女性恶性肿瘤。雄黄,一种传统的中草药成分,近年来由于其潜在的抗肿瘤活性受到关注。本研究旨在探究雄黄溶液对宫颈癌细胞株Hela和Caski的抑制作用。通过制备不同浓度的雄黄溶液,对两种细胞株进行处理,并使用CCK-8检测细胞活力。结果显示,随着雄黄浓度的增加,Hela细胞的增殖抑制率逐渐上升。这为雄黄在宫颈癌治疗中的潜在应用提供了初步的实验依据。

宫颈癌HeLa细胞外泌体与Wnt/β-catenin信号通路相关性研究

分析宫颈癌HeLa细胞外泌体对Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。方法 选取对数生长期宫颈癌Hela细胞并以超速离心法将Hela细胞外泌体分离出来,外泌体标志蛋白通过Westernblotting检测,将Hela细胞分为实验组和对照组,细胞培养基分别含Hela细胞外泌体及无Hela细胞外泌体,细胞侵袭能力通过Transwell小室实验检测,细胞迁移能力通过细胞划痕实验检测,Wntl及β-catenin蛋白表达水平通过Westernblotting法进行检测。结果 相比于对照组,Hela细胞中有着更多的侵袭细胞数,迁移距离更长(P<0.05)。两组对比,Hela细胞中Wnt/β-catenin信号通路有着更高的Wntl及β-catenin蛋白表达水平(P<0.05)。结论 宫颈癌HeLa细胞外泌体可导致宫颈癌细胞侵袭能力以及迁移能力增强,原因可能在于Hela细胞来源外泌体可激活Wnt/β-catenin信号通路。

顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡

目的:探讨顺铂对HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化。方法:使用不同浓度的顺铂(0、2.5、5、10μmol/L)干预HeLa人宫颈癌细胞,MTT法检测细胞活性,Transwell实验观察细胞迁移能力,mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒转染HeLa细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况。结果:与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可抑制HeLa细胞的活性及细胞迁移能力(P<0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可促进HeLa细胞中LC3B的表达、细胞凋亡及Nrf2的核转位(P<0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力。

褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

探究了褪黑素(melatonin,MLT)联合顺铂(cisplatin,DDP)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。体外培养宫颈癌HeLa细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定MLT、DDP及其联合使用对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;将HeLa细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组;其中褪黑素组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素处理细胞;顺铂组采用5μg·mL^(-1)的顺铂处理细胞;联合组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素+5μg·mL^(-1)的顺铂联合处理。采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组HeLa细胞的增殖、凋亡、侵袭情况,蛋白质印迹法检测Ki-67、PCNA、Bcl-2、Bax、N钙粘蛋白(N-cadherin)、E钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达情况。MTT结果显示MLT、DDP可以显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.05),且随着使用浓度的升高抑制率显著升高;相比单独使用MLT、DDP,联合使用MLT和DDP可以显著升高对HeLa细胞增殖的抑制率(P<0.05)。相比对照组,褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率和蛋白Bax、N-cadherin、Vimentin相对表达水平升高(P<0.05)。相比褪黑素组和顺铂组,联合组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率、Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结果表明,MLT和DDP均可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭并促进其凋亡,且联合使用效果更为显著。