扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响

探讨MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响。方法 将宫颈癌Hela细胞进行培养;扩增MACC1基因;检测MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9、caspase-3基因表达水平、凋亡特异核酸酶水平、Hela细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭水平以及Hela细胞的周期(G1期、S期、G2期)。结果 siRNA;MACC1组的MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9基因表达水平低于siRNA;NC组;caspase-3基因表达水平高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中凋亡特异核酸酶水平为(1.85±0.18);显著高于siRNA;NC组(1.01±0.09)(P<0.05)。siRNA;于细胞侵袭及细胞迁移数量和Hela细胞A值、等方面,相比siRNA,MACC1组更低;NC组;细胞凋亡率高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中G1期细胞比例高于siRNA;NC组;S期细胞、G2期细胞的比例低于siRNA;NC组(P<0.05)。结论 MACC1的表达能够改善宫颈癌Hela细胞的凋亡特异核酸酶水平,调控细胞周期,将Hela细胞阻滞在G1期,诱导细胞凋亡。

抑制SCD1活性对调节脂肪酸代谢途径和抑制宫颈癌细胞肿瘤生物学行为的作用

目的 探究抑制硬脂酰辅酶A去饱和酶1 (SCD1)活性对宫颈癌细胞肿瘤生物学行为的作用,并检测其中脂肪酸代谢的分子机制。方法 收集48例宫颈癌患者的癌组织标本和48例子宫肌瘤患者的正常宫颈组织标本。采用免疫组织化学SP染色法和实时定量PCR检测宫颈癌组织与正常宫颈组织中SCD1表达的差异;采用MTS法检测细胞存活率;采用EdU染色观察细胞增殖情况;采用体外划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用免疫荧光染色检测上皮-间质转化标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达;采用实时定量PCR测定脂肪酸代谢基因SREBP1、ACLY、ACC和FAS的表达量;采用尼罗红荧光染色观察细胞内脂滴含量。结果 宫颈癌组织中SCD1阳性表达率和SCD1 mRNA相对表达量高于正常宫颈组织(P <0.05)。不同浓度的MF-438处理HeLa细胞后,细胞存活率和EdU阳性细胞率下降,划痕闭合率、迁移细胞数和侵袭细胞数减少,E-cadherin荧光染色强度增加,vimentin荧光染色强度减弱,SREBP1、ACLY、ACC、FAS mRNA相对表达量均下调,脂滴含量减少,并呈浓度依赖性(均P <0.05)。结论 SCD1在宫颈癌组织中异常高表达,抑制SCD1活性能够明显降低HeLa细胞的脂质代谢水平,并抑制细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化。

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响

目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。

重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析

目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。

壳寡糖对Hela细胞cyclin D1、bcl-xl和bcl-2 mRNA表达的影响

背景:研究表明壳寡糖具有抗肿瘤作用,但壳寡糖对cyclin D1、bcl-2和bcl-xl影响机制尚不清楚。目的:观察壳寡糖抑制Hela细胞生长的作用,以及对细胞内cyclin D1、bcl-xl和bcl-2 mRNA表达的影响。方法:壳寡糖(0.1,0.5,1,2,5g/L)刺激Hela细胞后,CCK8实验检测其对细胞生长的影响;运用实时荧光定量PCR方法在分子水平检测cyclin D1、bcl-xl和bcl-2 mRNA在细胞中的表达情况。结果与结论:壳寡糖可抑制Hela细胞的生长;随着壳寡糖的质量浓度由0.1g/L增加至2g/L,壳寡糖抑制cyclin D1,bcl-2,bcl-xl基因表达的作用也逐渐增强,在2g/L时作用最强,但质量浓度过高时(5g/L)抑制作用反而有所减弱。结果表明壳寡糖的抗肿瘤作用可能通过两方面进行:一方面壳寡糖可以抑制与细胞周期有关的cyclin D1 mRNA表达以抑制肿瘤细胞的增殖;另一方面壳寡糖可以抑制抗凋亡蛋白Bcl-2和bcl-xl mRNA的表达以促进肿瘤细胞的凋亡;且对前者的作用强于后者。

榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELK1及其靶基因的影响

目的观察中药榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELK1及其靶基因的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,双荧光素酶报告系统检测药物对转录因子ELK1的影响,Western Blot检测磷酸化ELK1及其靶基因c-fos表达。结果榄香烯乳能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,其半数生长抑制剂量为80.6μg/mL;榄香烯乳处理组荧光素酶活性下降,磷酸化的ELK1及其靶基因c-fos的表达均下调。结论榄香烯乳可能通过下调转录因子ELK1的磷酸化水平,抑制c-fos的表达,从而抑制人宫颈癌Hela细胞的生长。

PLK1基因沉默抑制HeLa细胞凋亡

以高表达Polo样激酶1(Polo-likekinase1,PLK1)的宫颈癌细胞系HeLa细胞为模型,观察针对PLK1基因的短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对其凋亡和增殖的影响.设计并合成了针对PLK1的shRNA,将其导入构建的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的RNAi(RNAinterference)表达载体中.通过RT-PCR和Western印迹分别检测HeLa细胞PLK1基因和蛋白水平的表达,以流式细胞仪和PI-Hochest双染法测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖水平.成功构建了携带EGFP的RNAi表达载体pEGFP-H1.转染shRNA后,HeLa细胞PLK1的表达降低至30%.与对照组和空载体转染组相比,shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显增加,其增殖活性则明显降低.本课题构建的RNAi表达载体便于观察靶基因的转染情况,且不影响H1启动子的体内转录.PLK1的基因沉默能明显增加HeLa细胞的凋亡,抑制该细胞的增殖,有可能为未来肿瘤的治疗找到新的靶点和有效途径.

CXCR4/SDF-1α对宫颈癌HeLa细胞定向迁移及增殖的影响

目的了解CXCR4在HeLa细胞的表达情况，并借助细胞培养评价CXCR4／SDF-1α对HeLa细胞定向迁移及增殖的影响。方法CXCR4mAb免疫染色HeLa细胞。用Transwell侵袭转移模型评价HeLa细胞的迁移情况，其中，上室中加入预先用（或不用）CXCR4单抗预孵育的HeLa细胞，下室中加入含0～100ng／ml SDF-1α的培养基。为评价CXCR4、SDF-1α对HeLa细胞增殖的影响，将HeLa细胞接种于有（无）SDD-1α和（或）CXCR4的低血清环境72h。结果CXCR4在所有HeLa细胞上均有表达。HeLa细胞能顺SDF-1α浓度差定向迁移，且这一作用可被CXCR4mAb拮抗。SDF-1α能促进HeLa细胞在低血清环境中增殖。结论CXCR4／SDF-1α参与了HeLa细胞定向迁移的过程并影响其增殖．

Hsa-miR-218靶向调控LASP1对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检测细胞活力,构建萤光素酶报告基因载体验证miR-218与LIM和SH3蛋白1(LASP1)的相互结合作用,real-time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平,Western blot检测LASP1蛋白的表达水平。结果:经DNA测序证实与设计完全一致,测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR-218。pmiR-218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9,对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系,较空白对照组比较,差异显著(P<0.05);萤光素酶活性结果显示,克隆LASP1-3’UTR的质粒与miR-218 mimics共转染293T细胞,引起萤光素酶活性的减低;real-time PCR结果显示转染pmiR-218后,miR-218表达水平增加;过表达miR-128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:pmiR-218有效抑制HeLa细胞的生长,并具有时间-效应关系,其机制可能是miR-218通过靶向结合LASP1的3’UTR,从而下调其在HeLa细胞的表达有关。

影响生长抑素重组质粒pEGS／2SS转染HeLa细胞效果的因素研究

旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)转染效果的影响因素,探讨最佳转染条件,为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞,探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数:质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法,在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计算转染率。结果:在六孔细胞培养板上,当DNA/脂质体剂量为1μg/6μg时,转染效率最高,在转染后72 h达到34.02%;当用Plasmid Maxi Kit试剂盒提取质粒,转染时间为48 h,转染效率最高,达到17.88%。重组质粒pEGS/2SS转染He-La细胞条件是:采用试剂盒(Plasmid Maxi Kit)提取的质粒,DNA和脂质体的剂量分别为1μg与6μg,转染时间48 h,此时的转染效率最高,达17.88%。

雷帕霉素及mTOR siRNA对宫颈癌HeLa细胞mTOR和4EBP1表达的影响

目的探讨mTOR蛋白与宫颈癌发生、发展过程的相关性及雷帕霉素和mTOR siRNA对宫颈癌细胞中mTOR、4EBP1表达的影响。方法应用免疫组织化学方法检测正常宫颈鳞状上皮组织、CIN组织和宫颈癌组织中mTOR蛋白的表达情况;应用RNAi技术及雷帕霉素分别处理宫颈癌HeLa细胞,运用原位杂交、免疫细胞化学技术分别检测处理前后HeLa细胞中mTOR、4EBP1 mRNA及蛋白的表达情况。结果 mTOR蛋白在30例正常宫颈上皮组织、20例CIN组织和45例宫颈癌组织中的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、55.0%(11/20)和71.1%(32/45),正常宫颈组织、CIN组织与宫颈癌组织中mTOR阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);三种不同浓度的雷帕霉素及mTOR siRNA分别处理宫颈癌HeLa细胞24、48和72 h后,各组与相应对照组相比,mTOR、4EBP1 mRNA及蛋白的表达量均有显著下降(P均<0.05)。结论mTOR蛋白在宫颈癌组织中过表达,其过表达可能与宫颈癌的发生、发展过程相关;雷帕霉素和mTOR siRNA可抑制宫颈癌细胞mTOR mRNA及蛋白的表达,同时影响其下游4EBP1分子的表达。

不同剂量^(60)Co射线照射后Fas、Egr-1基因在宫颈癌Hela细胞中的表达及意义

目的研究不同剂量60Co射线照射后Fas、Egr-1在Hela细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系;阐述其在放射诱导细胞凋亡中的作用。方法采用TUNEL法检测宫颈癌Hela细胞凋亡,半定量RT-PCR法检测Hela细胞Fas、Egr-1的表达。结果①照射后Hela细胞凋亡指数与对照组比较均有极显著差异(P<0.01);②照射后Hela细胞Fas表达与对照组比较均有极显著差异性(P<0.01);③照射后Hela细胞Egr-1表达与对照组比较均有极显著差异(P<0.01);④Fas表达与凋亡指数相关(r=0.947,P<0.01);⑤Egr-1表达与凋亡指数相关(r=0.969,P<0.01);⑥Fas表达与Egr-1表达相关(r=0.98,P<0.01)。结论①放射线可诱导Hela细胞中Fas、Egr-1的表达,并能诱导细胞凋亡;②Fas、Egr-1与细胞凋亡关系密切,二者呈正相关;③Egr-1可能通过上调Fas在Hela细胞中的表达而参与了放射诱导的细胞凋亡过程。

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

背景与目的:Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1(inhibitor-1 of protein phosphataseⅠ,PPI1)依赖于35位苏氨酸的磷酸化而发挥抑制作用。本研究目的在于观察PPI1野生型和持续活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株的凋亡及凋亡刺激敏感性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:通过Lipofectamine介导,用PPI1野生型和持续活化型突变体表达质粒分别转染HeLa细胞,以未转染的及转染空载体的HeLa细胞为对照组,用RT-PCR和Western blot鉴定目的蛋白的表达;通过克隆形成实验观察PPI1对细胞克隆形成能力的影响,用Hoechst33258荧光染色、亚二倍体分析法分析PPI1对HeLa细胞凋亡的影响,用流式细胞术分析转染PPI1后的HeLa细胞对肿瘤坏死因子(tumor-necrosis factor,TNF)凋亡刺激的敏感性,用Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及MAPK信号转导通路的影响。结果:PPI1野生型和持续活化型突变体在HeLa细胞中能够有效表达。荧光染色和亚二倍体分析均表明PPI1持续活化型突变体的表达使细胞凋亡增多,并能明显抑制HeLa细胞的克隆形成能力。Western blot分析表明,PPI1持续活化型突变体可使促凋亡分子P53、P27、BAK表达上调,而抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xL的表达下调。流式细胞术分析表明PPI1持续活化型突变体表达的HeLa细胞在TNF-α刺激后细胞凋亡率为19.06%,而对照组为2.67%和1.89%。Westernblot分析表明,TNF刺激后,在JNK信号转导通路中,该组细胞JNK的磷酸化程度比对照组明显增强,而且持续的时间也较长;对于p38信号转导通路,则在TNF刺激30min后,p38出现磷酸化,而其他组均无。结论:PPI1持续活化型突变体的表达可诱导宫颈癌细胞株的凋亡,并能明显增强HeLa细胞对TNF凋亡刺激的敏感性,其中涉及到JNK、p38信号转导通路的活化增强。

国产虫草素对Hela细胞MMP-9、TIMP-1及TIMP-1 mRNA表达的调节

目的:观察国产虫草素对人宫颈癌Hela细胞生长,MMP-9,TIMP-1及TIMP-1 mRNA表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的虫草素溶液(0,1,2,4mg/ml)对Hela细胞增殖抑制作用。人MMP-9/TIMP-1ELISA试剂盒及RT-PCR技术检测经不同浓度虫草素溶液(0,1,2,4mg/ml)处理后不同时间点(12,24,48h)Hela细胞MMP-9/TIMP-1及TIMP-1 mRNA表达的影响。结果:国产虫草素以剂量依赖方式抑制Hela细胞生长。不同浓度虫草素处理不同时间的Hela细胞分泌MMP-9呈轻度剂量依赖抑制方式,但未见统计学差异(P>0.05)。可上调TIMP-1及其mRNA的表达,且呈明显剂量依赖方式,统计学差异显著(P<0.05),尤其在24h TIMP-1 mRNA的表达及蛋白分泌达最高峰。结论:国产虫草素可以以剂量依赖方式抑制肿瘤细胞的生长;可以通过上调TIMP-1 mRNA及蛋白的表达发挥潜在的抗肿瘤细胞侵润转移的作用,为国产新型抗肿瘤药物的临床研发及应用提供实验室依据。

LKB1协同二甲双胍影响宫颈癌HeLa细胞的增殖与凋亡及其可能的机制

目的:探索肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1或serine-threonine kinase 11,STK11)基因协同二甲双胍对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建含有LKB1基因的重组质粒LKB1-pEGFP-n1并转染HeLa细胞,MTT检测LKB1基因对经二甲双胍处理的HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,Western blotting检测对LKB1-AMPK信号通路相关蛋白AMPK、ACC和Rb磷酸化水平的影响。结果:LKB1-pEGFP-n1和空载体pEGFP-n1成功转染HeLa细胞,LKB1-pEGFP-n1转染细胞内稳定表达LKB1。二甲双胍处理LKB1-pEGFP-n1转染细胞的IC50显著低于pEGFP-n1转染细胞[(2.9±0.4)vs(7.8±1.3)mmol/L;t=-6.9921,P=0.002 2]及野生型HeLa细胞[(2.9±0.4)vs(9.6±1.5)mmol/L;t=-7.527 1,P=0.001 7]。经二甲双胍处理后,LKB1-pEGFP-n1转染细胞周期阻滞于G1期,而pEGFP-n1转染和野生型细胞周期无显著变化。二甲双胍作用剂量为15 mmol/L时,LKB1-pEGFP-n1转染细胞凋亡率较pEGFP-n1转染及野生型HeLa细胞显著增多[(28.6±2.3)%vs(9.6±1.6)%、(17.8±1.9)%,均P<0.05]。LKB1-pEGFP-n1转染细胞内AMPKα和ACC的磷酸化水平较pEGFP-n1转染和野生型细胞升高,Rb磷酸化水平降低。结论:LKB1能够协同二甲双胍影响HeLa细胞的增殖与凋亡,其可能通过LKB1-AMPK信号通路发挥作用。

缺氧微环境对TSST-1诱导的抗CEA^+结肠癌LoVo细胞免疫治疗的调控

目的:研究缺氧微环境对靶向性表达的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(toxic shock syndrome toxin-1,TSST-1)激活人外周血淋巴细胞(peripheral bloodlymphocyte,PBL)对CEA^+结肠癌LoVo细胞杀伤作用的调控。方法:包装、收集前期构建的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和癌胚抗原启动子CEAp联合调控的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5HRE-CEAp-TSST-1-1inker-CD80TM(简称pLEGFP-N1-5HCTC),感染CEA^+LoVo细胞及CEA^-宫颈癌HeLa细胞,获取稳定表达跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM蛋白(TC融合蛋白)的肿瘤细胞。用缺氧模拟试剂CoC1_2模拟缺氧微环境,RT-PCR和WesterRblotting分别检测缺氧调控下TSST-1的表达水平。将健康人PBL与pLEGFP-N1-SHCTC感染后的肿瘤细胞共培养,~3H-TdR掺入法检测缺氧调控下PBL的增殖能力,MTT法检测缺氧调控下PBL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:pLEGFP-N1-5HCTC病毒成功感染CEA^+LoVo细胞(5HCTC/LoVo),RT-PCR和Western blotting证实,缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞中TSST-1mRNA和蛋白的表达,CEA^-HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TSST-1的表达。缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞诱导的人PBL的增殖(7.3×10~3 vs 3.1×10~3cpm,P<0.05),缺氧环境下PBL对5HCTC/LoVo细胞的杀伤率明显高于常氧环境(82.69%vs53.50%,P<0.01);CEA^-HeLa细胞不能刺激PBL增殖,PBL对其也无抑制作用。结论:缺氧微环境可显著上调靶向性表达的超抗原TSST-1诱导的对CEA^+LoVo细胞的杀伤作用。

干扰ALDH1A1表达的shRNA载体成功转染宫颈癌HeLa细胞及意义

目的:采用shRNA转染构建干扰乙醛脱氢酶-1(ALDH1A1)表达的宫颈癌HeLa细胞,以进一步探讨ALDH1A1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,加入梯度浓度G418溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取对数生长期细胞,采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒(ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照质粒(shNC)转染宫颈癌HeLa细胞。5种重组质粒与Lipofectamine 2000脂质体的比例均为0.2μg:1μL,空白对照组中仅加入Lipofectamine2000脂质体。6 h后换液,24 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。结果:确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L;5种重组质粒均成功转染入HeLa细胞中。其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67%;ALDH1A1-574的转染效率为1.16%;ALDH1A1-740的转染效率为12.45%;ALDH1A1-921的转染效率为3.42%;shNC组的转染效率为1.02%。结论:干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好。

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。